一种外泌体漱口水及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及口腔溃疡药物技术领域，具体来说是一种外泌体漱口水及其制备方法和应用，外泌体漱口水由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液95

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体漱口水及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及口腔溃疡药物
，具体来说是一种外泌体漱口水及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]口腔溃疡在临床上十分常见，也被称作是“口疮”，患有该病症后患者在临床上表现出食欲下降、充血溃疡以及局部肿痛等不良症状，该病症复发率较高且不易恢复，若长时间治疗效果较差，将可能会诱发慢性溃疡，甚至是影响到患者正常的饮食及表达功能，情况严重者还可能有诱发癌前病变，甚至损害到患者生命安全。
[0003]口咽部是连接口腔、鼻咽与下呼吸道、食道等的通道，与外界环境相通，是很多细菌侵入下呼吸道和肺部并引起感染的生理部位。就人体微观生态认识的一般规律而言，在人体健康情况下，寄居于口咽部的核心菌群组合，在和谐的生理范围内波动，构成口咽部抵御外部环境变化的一道重要的微生物屏障，所以口咽部菌群对于下呼吸道感染非常重要。
[0004]间充质干细胞能够分泌许多细胞因子，例如肝细胞生长因子(HGF)、神经细胞生长因子(NGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细胞因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、集落形成刺激因子(CSF)和白介素IL1
‑
19，表皮细胞生长因子能够快速促进口腔粘膜的修复，而MSC外泌体的旁分泌作用不仅局限于直接释放细胞因子，同样依赖于其释放的外泌体。
[0005]外泌体内含有各种蛋白质、脂类和mRNA、miRNA、DNA片段等遗传物质，细胞间可以通过外泌体交换信息、相互作用，且免疫排斥风险较低，在各种病理状态及炎症反应中发挥着重要的作用，外泌体作为细胞与细胞之间通讯的介质成分，以旁分泌、远距分泌的形式在细胞间传播生物信息，在生理及病理状态下发挥重要的调控作用。MSC外泌体内具有生物学活性的分子，如蛋白质、DNA、RNA等成分与含量并非是作为一个特定静止的群体存在，而是会随着与细胞状态、培养环境、提取纯化步骤、细胞来源等多种条件的改变而呈动态变化。
[0006]现有技术的治疗口腔溃疡药物中抗生素使用频率最高，虽然抗生素有利于降低细菌繁殖量，充分发挥消毒杀菌效果，但是长期使用会影响口腔的正常菌群失调，长期以往会降低人体免疫力，增加细菌入侵的危害。

技术实现思路

[0007]针对上述存在的技术不足，本专利技术的目的是提供了一种外泌体漱口水及其制备方法和应用，本专利技术采用脐带间充质干细胞提取出来的间充质干细胞外泌体溶液、复配维生素B2和利多卡因，能够提高间充质干细胞外泌体的黏附效果，有效改善口腔局部微环境，缩短口腔粘膜组织修复的时间。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]一种外泌体漱口水，由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液95
‑
97％，维生素B21.5
‑
2.5％，利多卡因1.5
‑
2.5％。
[0010]优选的，由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液95
‑
96％，维生
素B21.7
‑
2.2％，利多卡因1.8
‑
2.3％。
[0011]优选的，由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液96％，维生素B22％，利多卡因2％。
[0012]本专利技术还保护了一种外泌体漱口水中维生素B2和间充质干细胞外泌体的组合在制备增强病原体引起的口腔溃疡修复制剂中的应用。
[0013]优选的，所述间充质干细胞外泌体溶液按照如下步骤制备：
[0014]S1、取样：于无菌状态下将离体脐带组织，清洗后剔除组织内动脉以及静脉血管，剥离组织内的华通氏胶，得到组织块样品；
[0015]S2、贴壁培养：将步骤S1的组织块样品置于体积分数为10％FBS的α
‑
MEM培养基内，于37℃、5％CO2条件下培养12
‑
15d，得到贴壁细胞；
[0016]S3、传代培养：对步骤S2的贴壁细胞进行传代培养，得到细胞上清液：
[0017]S4、提取外泌体：将步骤S3的细胞上清液离心后除菌过滤，得间充质干细胞外泌体溶液。
[0018]优选的，所述间充质干细胞外泌体溶液中外泌体浓度为0.1
‑
0.3mg/mL。
[0019]优选的，所述步骤S1的清洗方法为：采用体积分数为含1％双抗的PBS洗涤，洗去离体脐带组织内血渍。
[0020]优选的，所述步骤S3的传代培养方法为：弃去步骤S2的细胞上清液，采用体积分数为含1％双抗的PBS洗涤细胞，之后加入10mL胰蛋白酶至液体变为白色，再加入15mL体积分数为10％FBS的α
‑
MEM培养基，于1000r/min条件下离心5min，再按照1.6
×
106接种密度接种至无血清的α
‑
MEM培养基培养内，于37℃、5％CO2细胞培养箱内培养72h后，再次进行细胞传代处理，收集细胞上清液。
[0021]优选的，所述步骤S4的离心条件为：将步骤S3的细胞上清液于2000g/min条件下离心10min。
[0022]本专利技术还保护了一种外泌体漱口水的制备方法，包括如下步骤：
[0023]S1、称量：按照如下重量百分比称取原料：间充质干细胞外泌体溶液95
‑
97％，维生素B21.5
‑
2.5％，利多卡因溶液1.5
‑
2.5％，备用；
[0024]S2、将间充质干细胞外泌体溶液、利多卡因和维生素B2混合均匀，得到外泌体漱口水。
[0025]与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果是：
[0026](1)目前市售的常用口腔溃疡治疗的药物，例如采用甲硝唑能够杀灭口腔内G
+
、G
‑
厌氧菌且具有收敛作用，虽然在治疗上有较好的效果，但其镇痛作欠佳，经治疗后多易复发，而且不良反应较多；因大部分抗生素长期使用会引起口腔内部的正常菌群失调。
[0027](2)本专利技术主要针对免疫力下降使机体受到病原体的侵袭，使口腔的免疫平衡状态被破坏，导致口腔溃疡发生的人群。本专利技术的漱口水与传统漱口水对比，具有简易、安全、速效、依从性高等优点，不小心发生少量吞咽现象也无妨，本次试验在于探究漱口水治疗口腔溃疡的疗效，以期得到更有效的治愈口腔溃疡的药物；利多卡因能增强外间充质干细胞外泌体抗炎能力，降低炎症因子水平，减轻病患口腔粘膜组织疼痛感，维生素B2能改善口腔局部微环境，能提高间充质干细胞外泌体的黏附效果，缩短口腔粘膜组织修复的时间。
[0028](3)本专利技术与传统治疗方案进行了对比，具体为口腔溃疡的疗效、疗程和溃疡面大
小，通常直径＜3mm者能够在3天内痊愈，直径≥3mm者需3
‑
4天可痊愈；能够有效缓解患者疼痛程度，有助于患者正常饮食，早日康复；还能够有效促进上皮细胞再生，根据患者实际情况补充营养，增强患者饮适量，加快溃疡面愈合。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体漱口水，其特征在于，由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液95
‑
97％，维生素B21.5
‑
2.5％，利多卡因1.5
‑
2.5％，上述原料的重量百分比之和为100％。2.根据权利要求1所述的一种外泌体漱口水，其特征在于，由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液95
‑
96％，维生素B21.7
‑
2.2％，利多卡因1.8
‑
2.3％，上述原料的重量百分比之和为100％。3.根据权利要求1所述的一种外泌体漱口水，其特征在于，由如下重量百分比的原料制成：间充质干细胞外泌体溶液96％，维生素B22％，利多卡因2％。4.根据权利要求1所述的一种外泌体漱口水中维生素B2和间充质干细胞外泌体的组合在制备增强病原体引起的口腔溃疡修复制剂中的应用。5.根据权利要求1所述的一种外泌体漱口水，其特征在于，所述间充质干细胞外泌体溶液按照如下步骤制备：S1、取样：于无菌状态下将离体脐带组织清洗后剔除组织内动脉以及静脉血管，剥离组织内的华通氏胶，得到组织块样品；S2、贴壁培养：将步骤S1的组织块样品置于体积分数为10％FBS的α
‑
MEM培养基内，于37℃、5％CO2条件下培养12
‑
15d，得到贴壁细胞；S3、传代培养：对步骤S2的贴壁细胞进行传代培养，得到细胞上清液：S4、提取外泌体：将步骤S3的细胞上清液离心后除菌过滤，得间充质干细胞外泌体溶液。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：马嘉丽，明磊国，王清霞，
申请(专利权)人：陕西中鸿科瑞再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：