一种快速检测环境中新冠病毒的引物、方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种快速检测环境中新冠病毒的引物、方法和应用。所述检测方法是基于PCR和DNA荧光染料进行检测，结果可靠。本发明专利技术通过结合便携光谱仪、便携PCR仪、移动电源以及智能手机等现有设备，实现了新冠病毒的现场快速检测，突破了现有检测技术对人员和场所的限制，且设备便携，操作简单。操作简单。操作简单。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测环境中新冠病毒的引物、方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
更具体地，涉及一种一种快速检测环境中新冠病 毒的引物、方法和应用。

技术介绍

[0002]为防范新冠病毒，除需对人进行核酸检测外，对有可能受到新冠病毒污染的 物品、环境等，也有必要开展相应的检测。
[0003]当前，世界卫生组织及国家推荐的新冠病毒检测方法主要是荧光定量PCR 和基因测序，由于基因测序的速度比较慢，价格也较昂贵，适合从事研究但不适 合作为筛查手段。目前上市的即时检测(POCT)试剂盒多是基于基因扩增进行 检测的，和实验室内的传统PCR检测相比，一体化现场快速检测虽然便携、操 作简单，但如果过于强调其“快速”的特性，其灵敏度可能会受影响。此外，基于 试纸条的抗原快速检测试剂和抗体快速检测试剂都属于免疫检测，免疫检测比核 酸检测要快，通常只需15
‑
30分钟即可出结果，但其灵敏度不如核酸检测。
[0004]目前平衡的最好的仍是核酸检测试剂盒。从过往的重大疫情来看，无论是西 非埃博拉病毒、甲流还是中东呼吸综合征(MERS)，实时荧光PCR仍是国家首 推的检测方式。但实时荧光PCR的议价高，不适合偏远地区或社区部门进行初 筛。因此，开发新型冠状病毒的现场快速检测方法，突破现有检测技术对人员/ 场所的限制，缩短检测用时，提升便捷程度，推动诊断前移下移，实现环境样品 的快速诊断和密切接触人群的现场筛查是控制疫情的当务之急。
[0005]中国专利CN 111560472A公开了一种用于检测新冠病毒SARS
‑
CoV
‑
2的探 针和引物、试剂盒、检测方法及应用，其开发了一种全程闭管RNA指数扩增法 (WEPEAR法)，结合逆转录
‑
重组酶聚合酶扩增技术(RT
‑
ERA)进行，但其完 成检测所需仪器较多，无法进行现场可视化快速检测。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种快速 检测环境中新冠病毒的方法及其应用。
[0007]本专利技术第一个目的是提供一种新冠病毒检测引物。
[0008]本专利技术第二个目的是提供一种新冠病毒检测方法。
[0009]本专利技术第三个目的是提供一种快速检测环境中新冠病毒的产品。
[0010]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0011]本专利技术首先提供了一种新冠病毒检测引物，包括上游引物和下游引物，其序 列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示。
[0012]本专利技术还提供了所述引物在快速检测环境中新冠病毒或在制备新冠病毒快 速检测产品中的应用。
[0013]一种快速检测环境中新冠病毒的方法，其包含以下步骤：
[0014]S1.对环境中的待测物表面进行采样；
[0015]S2.提取病毒RNA并进行反转录得cDNA；
[0016]S3.以步骤S2所得cDNA为模板，用权利要求1所述引物进行PCR扩增；
[0017]S4.在步骤S3所得产物中加入聚集诱导发光材料，并在紫外灯下观察是否出 现荧光。
[0018]优选地，所述聚集诱导发光材料为TTAPE。
[0019]TTAPE为1,1,2,2
‑
四[4
‑
(2
‑
三乙基氨甲氧基)苯基]乙烯四溴化物，其结构式 如式(I)所示：
[0020][0021]优选地，步骤S3中，PCR的扩增体系为：2X Master Mix 12.5μL，上下游 引物各0.2μL，DNA模板1μL，加无菌水补充至25μL。
[0022]优选地，所述引物的使用浓度为0.2～0.5μM。
[0023]优选地，步骤S3中，PCR扩增的反应程序为：95℃预变性7min；94℃变 性30s，63℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃最终延伸7min。
[0024]优选地，步骤S4中加入10μL 200μmol/L的TTAPE。
[0025]优选地，TTAPE可在PCR反应前加入，其不会对PCR产生影响。
[0026]本专利技术还提供一种快速检测环境中新冠病毒的产品，其包含所述引物和 TTAPE。
[0027]优选地，其包括病毒提取试剂盒、拍照暗箱、比色皿、移液枪、研钵、液氮 杯、离心机、便携PCR仪、紫外手电筒和便携光谱仪。
[0028]更优选地，其还包括移动电源和笔记本电脑。
[0029]基于本专利技术所用检测标记TTAPE的特性，其仅在有大量DNA存在时才会 发光，且在紫外灯下即可观察，结果图片可通过手机拍摄。本专利技术所述方法可结 合便携光谱仪、便携PCR仪、移动电源以及智能手机等，进行新冠病毒的现场 快速检测，还可通过网络将分析结果实时传输到云端和中心大数据中。
[0030]优选地，紫外灯与样品距离45cm，高度27cm，用手机1*倍数，2.1*倍数拍 照，可视化效果较好，能明显的看到是否出现荧光。
[0031]本专利技术具有以下有益效果：
[0032]本专利技术提供了一种快速检测环境中新冠病毒的引物、方法和应用，该方法是 基于PCR和DNA荧光染料进行检测，结果可靠。本专利技术过结合便携光谱仪、便 携PCR仪、移动电源以及智能手机等现有设备，实现了新冠病毒的现场快速检 测，突破了现有检测技术对人员和场所的限制，且设备便携，操作简单。
附图说明
[0033]图1为不同浓度TTAPE对可视化结果的影响，其中1号管内所使用的TTAPE 浓度为300μmol/L，2号管内所使用的TTAPE浓度为250μmol/L，3号管内所使 用的TTAPE浓度为200μmol/L，4号管内所使用的TTAPE浓度为150μmol/L，5 号管内所使用的TTAPE浓度为100μmol/L，6号管内所使用的TTAPE浓度为 50μmol/L。
[0034]图2为不同扩增酶对可视化结果的影响，其中1号管所使用的酶为Taq PCRMaster Mix，2号管所使用的酶为Taq Plus DNA，3号管所使用的酶为热启动酶。
[0035]图3为TTAPE加入顺序对可视化结果的影响，其中1号管内所使用的TTAPE 浓度为200μmol/L，在PCR反应前加入，2号管内所使用的TTAPE浓度为 200μmol/L，在PCR反应后加入，3号管内所使用的TTAPE浓度为250μmol/L， 在PCR反应前加入，4号管内所使用的TTAPE浓度为250μmol/L，在PCR反应 后加入。
[0036]图4为阳性样本的检测结果，其中1号管为检测阳性样本，2号管为阴性对 照。
[0037]图5为现场快速检测新冠病毒时所需设备。
具体实施方式
[0038]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本 专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本技 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新冠病毒的PCR引物，其特征在于，包括上游引物和下游引物，其序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述引物在快速检测环境中新冠病毒或在制备新冠病毒快速检测产品中的应用。3.一种快速检测环境中新冠病毒的方法，其特征在于，包含以下步骤：S1.对环境中的待测物表面进行采样；S2.提取病毒RNA并进行反转录得cDNA；S3.以步骤S2所得cDNA为模板，用权利要求1所述引物进行PCR扩增；S4.在步骤S3所得产物中加入聚集诱导发光材料，并在紫外灯下观察是否出现荧光。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述聚集诱导发光材料为TTAPE。5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤S3中，PCR的扩增体系为：2X Master Mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦哲，叶领云，张妮，朱丹，周思杏，
申请(专利权)人：东莞理工学院，
类型：发明
国别省市：