一种快速检测2019-nCoV病毒的方法技术

本申请提供了一种快速检测2019

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法


[0001]本申请涉及医学检验
，尤其涉及一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法。

技术介绍

[0002]2020年1月12日，世界卫生组织正式将2019新型冠状病毒命名为2019
‑
nCoV。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
[0003]聚合酶螺旋反应(Polymerase Spiral Reaction，PSR)是一种新型核酸恒温扩增方法，其兼具PCR法引物设计简单和LAMP法只需要一种酶、反应高效的特点。该技术可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列，且操作简便，不需要精准的变温设备，成本较低。
[0004]目前用于检测2019
‑
nCoV的实时RT
‑
PCR法具有一定的局限性，其检测时间较长，不适合用于复工复产复学等普通人群以及低风险地区的流行病学筛查。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法，以解决不适合用于复工复产复学等普通人群以及低风险地区的流行病学筛查的问题。
[0006]本申请提供了一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法，具体包括以下步骤：
[0007]设计引物组；
[0008]依次配置ORF基因样本溶液、核壳基因N样本溶液和对照溶液；
[0009]依次配置ORF基因预混溶液、核壳基因N预混溶液和对照预混溶液；
[0010]将ORF基因样本溶液和ORF基因预混溶液进行混合得到ORF基因混合反应液；
[0011]将核壳基因N样本溶液和核壳基因N预混溶液进行混合得到核壳基因N混合反应液；
[0012]将对照溶液和对照预混溶液进行混合得到对照混合反应液；
[0013]将所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液中分别加入荧光目测检测试剂；
[0014]将加入荧光目测检测试剂后的所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液进行离心和扩增处理，采用荧光目测进行检测。
[0015]可选的，所述设计引物组包括核壳基因N引物和ORF基因引物；
[0016]所述ORF基因引物包括，
[0017]正向引物Ft1：5'－GAGGAGGTCTGTCA－CCCTGTGGGTTTTACACTTAA－3'；
[0018]反向引物Bt1：5'－GACGTGCTCGTACG－ACGATTGTGCATCAGCTGA－3'；
[0019]所述核壳基因N引物包括，
[0020]正向引物Ft2：5'－CCTTGAATACACCA－GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT－3'；
[0021]反向引物Bt2：5'－GCCAGAAGCTGGAC－CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG－3'。
[0022]可选的，所述对照预混溶液由以下溶液配置：12.5μL 2*反应缓冲液、2.5μL引物溶液RNA、1.0μL酶溶液和3.0μL去离子水。
[0023]可选的，所述扩增处理的反应条件为首先在60
‑
65℃下恒温30
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60分钟，接着在80℃下恒温5分钟或95℃下恒温2分钟。
[0024]可选的，所述核壳基因N预混溶液由以下溶液配置：12.5μL 2*反应缓冲液、1.0μL正向引物Ft2、1.0μL反向引物Bt2和4.5μL去离子水。
[0025]可选的，所述ORF基因预混溶液由以下溶液配置：12.5μL 2*反应缓冲液、1.0μL正向引物Ft1、1.0μL反向引物Bt1和4.5μL去离子水。
[0026]由以上技术方案可知，本申请提供了一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法，具体包括以下步骤：设计引物组；依次配置ORF基因样本溶液、核壳基因N样本溶液和对照溶液；依次配置ORF基因预混溶液、核壳基因N预混溶液和对照预混溶液；将ORF基因样本溶液和ORF基因预混溶液进行混合得到ORF基因混合反应液；将核壳基因N样本溶液和核壳基因N预混溶液进行混合得到核壳基因N混合反应液；将对照溶液和对照预混溶液进行混合得到对照混合反应液；将所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液中分别加入荧光目测检测试剂；将加入荧光目测检测试剂后的所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液进行离心和扩增处理，采用荧光目测进行检测。本申请基于多聚酶螺旋反应方法检测2019
‑
nCoV，操作简单、快速，仅需3
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5min即可完成包括样品处理在内的样品检测，且检测结果用肉眼直接观察，更适合用于复工复产复学等普通人群以及低风险地区的流行病学筛查。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1为一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法流程图。
具体实施方式
[0029]下面将详细地对实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下实施例中描述的实施方式并不代表与本申请相一致的所有实施方式。仅是与权利要求书中所详述的、本申请的一些方面相一致的系统和方法的示例。
[0030]参见图1，为一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法流程图。
[0031]本申请提供的一种快速检测2019
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nCoV病毒的方法，具体包括以下步骤：
[0032]设计引物组；
[0033]依次配置ORF基因样本溶液、核壳基因N样本溶液和对照溶液；
[0034]依次配置ORF基因预混溶液、核壳基因N预混溶液和对照预混溶液；
[0035]将ORF基因样本溶液和ORF基因预混溶液进行混合得到ORF基因混合反应液；
[0036]将核壳基因N样本溶液和核壳基因N预混溶液进行混合得到核壳基因N混合反应液；
[0037]将对照溶液和对照预混溶液进行混合得到对照混合反应液；
[0038]将所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液中分别加入荧光目测检测试剂；
[0039]将加入荧光目测检测试剂后的所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液进行离心和扩增处理，采用荧光目测进行检测。
[0040]进一步地，所述设计引物组包括核壳基因N引物和ORF基因引物；
[0041本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测2019
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nCoV病毒的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：设计引物组；依次配置ORF基因样本溶液、核壳基因N样本溶液和对照溶液；依次配置ORF基因预混溶液、核壳基因N预混溶液和对照预混溶液；将ORF基因样本溶液和ORF基因预混溶液进行混合得到ORF基因混合反应液；将核壳基因N样本溶液和核壳基因N预混溶液进行混合得到核壳基因N混合反应液；将对照溶液和对照预混溶液进行混合得到对照混合反应液；将所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液中分别加入荧光目测检测试剂；将加入荧光目测检测试剂后的所述ORF基因混合反应液、核壳基因N混合反应液和对照混合反应液进行离心和扩增处理，采用荧光目测进行检测。2.根据权利要求1所述的一种快速检测2019
‑
nCoV病毒的方法，其特征在于，所述设计引物组包括核壳基因N引物和ORF基因引物；所述ORF基因引物包括，正向引物Ft1：5'－GAGGAGGTCTGTCA－CCCTGTGGGTTTTACACTTAA－3'；反向引物Bt1：5'－GACGTGCTCGTACG－ACGATTGTGCATCAGCTGA－3'；所述核壳基因N引物包括，正向引物Ft2：5'－CCTTGAATACACCA－GGGGAACTTCTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志军，杨宁爱，康宇婷，党甜甜，
申请(专利权)人：宁夏医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：