一种检测肠道病毒CVB3的方法技术

本发明专利技术属于电化学和分析化学领域，本发明专利技术的目的在于提供一种基于原位重组酶聚合酶扩增光致电化学生物传感器检测CVB3的方法。利用重组酶聚合酶扩增，将扩增产物原位连接到电极上，扩增产物上的生物素与溶液中的链霉亲和素标记的碱性磷酸酯酶作用，碱性磷酸酯酶再催化溶液中的底物对氨基苯基磷酸单钠水解生成游离的电子供体对氨基苯酚，对氨基苯酚增强修饰电极的光致电化学反应从而产生增强的光电信号，实现对CVB3的检测，该方法具有高的灵敏度，方法简单。方法简单。

【技术实现步骤摘要】
ZnSeNSs分散液转移到同一离心管中，超声波振动使溶液均匀混合，制得ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs复合材料。
[0007]CBV3含量的测定
[0008]首先，将碳粉和石蜡按3:1的比例混合在玛瑙研钵中，研磨均匀后，放入80℃的烘箱中，恒温加热30min，取出后研磨10min，再次放入烘箱中，重复此操作三次得糊状粉末。接下来，将糊状粉末放入玻璃管中，插入铜线，在抛光纸上抛光电极，用去离子水清洗电极，得到碳糊电极(CPE)。再将1μL～50μL的ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs溶液滴到新制的碳糊电极表面上，并在空气中自然干燥。然后将1μL～50μL的1μM巯基化正向引物滴在电极表面，用pH7.0磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除多余的未结合引物。随后，将1μL～50μL的0.1mM巯基乙胺MCH滴在ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs修饰电极表面，封闭电极表面的非特异活性位点，并用氮气吹干电极。然后在ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs/CPE上进行扩增。将2.4μL的10μM反向引物、10μL模板溶液，29.5μL缓冲液和13.2μL去离子水混合并添加到冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测肠道病毒CVB3的方法，包括如下步骤：(1)复合材料ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs的制备称取20mg的氮化硼粉末加入到盛有50.0mL的乙二醇溶液的烧杯中，超声剥离2h后使氮化硼均匀的分散在溶液中，制得氮化硼纳米片；之后将该烧杯置于磁力搅拌器上匀速搅拌，同时用制备的5mM的氢氧化钠溶液滴定，直至溶液pH达到10.0；随后，将烧杯转移到恒温水浴加热搅拌器上，并向烧杯中加入2.0ml 0.0240mol/L氯金酸，在100℃恒温水浴中加热4h，加热完成后，将烧杯中的溶液分装到离心管中并分别离心三次，条件为12000r/min，10min；离心后，收集沉淀物在80℃下干燥2h；获得了AuNPs/BNNSs材料；称取0.0150g AuNPs/BNNSs，分散于N,N
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二甲基甲酰胺DMF中，将分散液置于4℃冰箱中使用；称取0.0150g块状硒化锌分散于DMF中，超声剥离8h后得到ZnSeNSs；最后，吸取2mL AuNPs/BNNSs和2mL ZnSeNSs分散液转移到同一离心管中，超声波振动使溶液均匀混合，制得ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs复合材料。(2)CBV3含量的测定首先，将碳粉和石蜡按3:1的比例混合在玛瑙研钵中，研磨均匀后，放入80℃的烘箱中，恒温加热30min，取出后研磨10min，再次放入烘箱中，重复此操作三次得糊状粉末；接下来，将糊状粉末放入玻璃管中，插入铜线，在抛光纸上抛光电极，用去离子水清洗电极，得到碳糊电极CPE；再将1μL～50μL的ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs溶液滴到新制的碳糊电极表面上，并在空气中自然干燥；然后将1μL～50μL的1μM巯基化正向引物滴在电极表面，用pH7.0磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除多余的未结合引物；随后，将1μL～50μL的0.1mM巯基乙胺MCH滴在ZnSeNSs/AuNPs/BNNSs修饰电极表面，封闭电极表面的非特异活性位点，并用氮气吹干电极；然后在ZnSeNSs/AuNPs/BNN...

【专利技术属性】
技术研发人员：混旭，王如昊，林健健，高杰，邓陆平，秦娜娜，王明竞，张慧，
申请(专利权)人：青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：