一种基于人工囊泡的分子信标原位检测冠状病毒核酸的方法技术

本发明专利技术公开用于检测冠状病毒核酸的人工囊泡及分子信标。本发明专利技术通过构建可与冠状病毒发生融合的人工囊泡，利用与冠状病毒核酸特异性结合的分子信标，实现了无需提取和扩增病毒核酸，即可快速原位检测冠状病毒，具有检测方便快捷的优点。便快捷的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种基于人工囊泡的分子信标原位检测冠状病毒核酸的方法


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及检测冠状病毒核酸的方法。

技术介绍

[0002]冠状病毒是一类有包膜的单股正链RNA病毒，基因组大约在27
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32kb之间。2019年爆发的新型冠状病毒(SARS
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COV
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2)疫情，感染病毒的人会出现程度不同的症状，如发烧或轻微咳嗽，发展为肺炎，更为严重甚至死亡。
[0003]SARS
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CoV
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2属于冠状病毒亚科β属，具有较强的传染性。核酸检测在新冠肺炎疫情防控中起着重要作用。目前SARS
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COV
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2核酸检测方法主要包括PCR技术、等温扩增技术和基因测序技术。虽然核酸PCR检测方法特异性强，灵敏性高，但仍存在假阴性高、检测时间长(包括提取、扩增和检测)等问题。因此，除了常规的PCR定量检测方法，一些新的基于核酸检测的方法被开发出来。张锋研究团队使用合成的新型冠状病毒RNA片段，设计了两个可识别新型冠状本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测病毒核酸的人工囊泡，其特征在于，由下述步骤制备而成：提取经转染ACE2蛋白基因后的高表达ACE2蛋白的细胞的质膜，将其与针对冠状病毒RNA核酸的分子信标形成包埋分子信标的人工囊泡，优选的所述病毒是冠状病毒。2.如权利要求1所述的人工囊泡，其特征在于，所述细胞质膜的制备方法如下：取所述细胞用EDTA处理，离心去上清，加入低渗缓冲液，细胞液在冰中放置3
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10min，然后40
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45℃放置60
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120s，重复2
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4次；然后对细胞液进行研磨1
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2次，离心得到的上清液于超滤管中，离心获得高表达ACE2蛋白的细胞质膜溶液；更具体的方法是：取所述细胞，吸出培养基，用PBS缓冲液清洗后吸出，用EDTA处理30
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60分钟，转移至离心管中离心去掉上清，重复离心1
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2次，加入低渗缓冲液；将细胞液在冰中放置3
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8min，然后40
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45℃放置60
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120s，重复2
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4次；将细胞液放在冰上，用匀浆器抽提10
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30次，离心后，向含细胞沉淀中加入低渗缓冲液，重复研磨一至二次，将各次离心后的上清合并即得，进一步地，对上述上清液于20,000g离心20min；再将离心后的上清放到100K的超滤管中，6000g离心10min即得。3.如权利要求2所述的人工囊泡，其特征在于，所述分子信标溶液是含有所述分子信标的混合溶液，更具体的制备是将含各分子信标的TE缓冲液等比例混合。4.如权利要求3所述的人工囊泡，其特征在于，所述细胞质膜与所述分子信标溶液混合后通过脂质体挤出器共挤，形成包埋分子信标的人工囊泡；更具体的方法是：将细胞质膜溶液与分子信标混合溶液，用脂质体挤出器反复共挤10
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30次，形成包埋分子信标的人工囊泡。5.如权利要求1或2所述的人工囊泡,其特征在于，所述分子信标是用于检测新型冠状病毒SARS
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CoV
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2的下述分子信标之一或其组合，其中每个分子信标的5'端标记荧光基团，在3'端标记淬灭基团：MB
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1 CGATCCCATAAGAGAACACACAGCCTGGATCGMB
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2 CGATCCTGCCCAGTGGTGTAAGTAATGGATCGMB
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3 CGATCCTCTCTAACATCACCTAACTCGGATCGMB
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4 CGATCCCCTTTAGTGTTATTAGCTCTGGATCGMB
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5 CGATCCTTAAAGTTCTTTATGCTAGCGGATCGMB
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6 CGATCCGTGGAATTTCAAGACTTGTAGGATCGMB
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7 CGATCCATAATCTATATCTGACACTAGGATCGMB
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8 CGATCCAATTCGTCTGGTAGCTCTTCGGATCGMB
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9 CGATCCTTTCTTAGTGACAGTTTGGCGGATCGMB
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10 CGATCCGGATTGTTGCAATTGTTTGGGGATCGMB
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11 CGATCCCGAACAGTATCTACACAAACGGATCG...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅博强，李曼莉，戴新华，张永卓，方向，龚晓云，刘思渊，唐治玉，刘瑛颖，张玲，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：