用于构建MC4R基因突变的肥胖症猪核移植供体细胞的CRISPR系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了用于构建MC4R基因突变的肥胖症猪核移植供体细胞的CRISPR系统及其应用。该系统包含Cas9表达载体和针对猪MC4R基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示，所述的gRNA表达载体表达SEQ ID NO.22所示的gRNA；且该表达载体的载体骨架为pKG‑U6gRNA，质粒全序列如SEQ ID NO.3所示。采用本发明专利技术筛选的gRNA联合改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑,编辑效率比原载体有了显著的提高。

【技术实现步骤摘要】
用于构建MC4R基因突变的肥胖症猪核移植供体细胞的CRISPR系统及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及用于MC4R基因编辑的CRISPR/Cas9系统及其应用。
技术介绍
肥胖症(Obesity)是指体脂肪累积过多而对健康造成负面影响的身体状态，可能导致寿命减短及各种健康问题。肥胖是全世界主要的可预防死因，也是21世纪最重要的公共卫生问题之一。目前成人与儿童的肥胖盛行率都在上升，且女性较男性更常发生。2013年，包括美国医学会和美国心脏协会等数个医学会将肥胖定义为一种疾病，即为肥胖症。2015年，全球有6亿名成人(13％)和4200万名五岁以下的孩童有肥胖问题。世卫组织更是发出警告，指出超重和肥胖是全球引起死亡的第五大风险，全球每年“胖死”的人至少280万。尽管肥胖通常受到遗传和环境的共同影响，但肥胖症实际上是可遗传且由多基因作用的，只是不同人的易感性存在差异。在极少数情况下，遗传性肥胖症是由致病突变直接干扰能量稳态或脂肪沉积，例如人类单基因肥胖病的发生。其中，黑皮质素4受体(MC4R)基因的突变是造成人类先天性肥胖症本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于猪MC4R基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于包含Cas9表达载体和针对猪MC4R基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO载体。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于猪MC4R基因编辑的CRISPR/Cas9系统，其特征在于包含Cas9表达载体和针对猪MC4R基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体为质粒全序列如SEQIDNO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO载体。


2.根据权利要求1所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于针对猪MC4R基因的gRNA表达载体的载体骨架为pKG-U6gRNA，质粒全序列如SEQIDNO.3所示。


3.根据权利要求2所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于该表达载体表达SEQIDNO.22所示的gRNA，其靶点如SEQIDNO.18所示。


4.根据权利要求3所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于所述的针对猪MC4R基因的gRNA表达载体由SEQIDNO.26和SEQIDNO.27所示的单链DNA退火而成的双链插入载体骨架pKG-U6gRNA所得。


5.根据权利要求4所述的CRISPR/Cas9系统，其特征在于所述的gRNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛冬，汪滔，马翔，刘璐，曾为俊，王磊，程锐，赵泽英，陶裴裴，黄彩云，
申请(专利权)人：南京启真基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32