制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统技术方案

本发明专利技术公开了制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。本发明专利技术提供了制备重组猪细胞的方法：将HOXC13

【技术实现步骤摘要】
制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统


[0001]本专利技术属于生物
，具体属于基因编辑
，更具体涉及制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良(纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症)模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统。

技术介绍

[0002]纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症(Pure hair and nail ectodermal dysplasia，PHNED)是一种常染色体隐性遗传疾病,主要临床表现为患者自出生后全身毛发及指甲完全缺失或营养不良，这严重影响患者外观及手部精细活动功能。该疾病可分为4型、5型、6型、7型和9型五种类型，其中HOXC13基因是引起纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症9型(Ectodermal dysplasia
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9，ECTD
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9)的致病基因。
[0003]HOXC13属于Hox(Homobox)基因家族Abd
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B类成员之一,与毛囊形成和毛发生长密切相关。毛发结构蛋白KP(角蛋白)和KAP(角本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备重组猪细胞的方法，包括如下步骤：将HOXC13
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gRNA1、HOXC13
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gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞；所述HOXC13
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gRNA1为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：16中第3
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22位核苷酸所示；所述HOXC13
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gRNA4为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：17中第3
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22位核苷酸所示；所述NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白。2.HOXC13
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gRNA1、HOXC13
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gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用；HOXC13
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gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA1；HOXC13
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gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。3.HOXC13
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gRNA1、HOXC13
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gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用；HOXC13
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gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA1；HOXC13
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gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA4；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。4.HOXC13
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gRNA1、HOXC13
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gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用；HOXC13
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gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA1；HOXC13
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gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA4；所述特异质粒自上游至下游依次包括如下元件：启动子、操纵子、核糖体结合位点、PRONCN蛋白的编码基因、终止子；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。5.一种试剂盒，包括HOXC13
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gRNA1、HOXC13
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gRNA4和NCN蛋白；HOXC13
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gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13
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gRNA1；HOXC13
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gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13
...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛冬，汪滔，马翔，王磊，程锐，赵泽英，方园，胡世芳，
申请(专利权)人：南京启真基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：