一种先天性白内障疾病动物模型构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种先天性白内障疾病动物模型的构建方法，先针对小鼠GJA8基因的第二个外显子区域设计gRNA靶标位点序列，扩增同源臂和cKO区域，分别连接到载体上；将构建好的质粒电转ES细胞向囊胚中注射阳性克隆，并转移入小鼠体内，出生小鼠经发育成熟后，得到首建者小鼠；再与野生型小鼠交配，得基因突变的杂合子小鼠F1代；最后将基因型相同的杂合子小鼠F1代交配，得基因突变纯合子小鼠F2代。本发明专利技术提供的先天性白内障疾病动物模型的构建方法，可得到表现出先天性白内障的典型特征如表现出晶状体变性混浊、晶状体上皮凋亡等特征，该动物模型可用于先天性白内障疾病的研究和筛选治疗先天性白内障疾病的药物中，其应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种先天性白内障疾病动物模型构建方法及应用
本专利技术属于生物学基因编辑
，涉及一种先天性白内障疾病动物模型构建方法及应用。
技术介绍
先天性白内障是指在出生时或出生后不久出现的晶体混浊，其发生率为0.6-6/10000人口，是造成儿童失明及弱视的重要原因，占儿童致盲性眼病第二位。基于我国庞大人口技术，先天性白内障患者可达百万，给家庭及社会带来沉重负担。虽然先天性白内障手术技法不断改进，且成功率不断提高。但儿童眼部解剖学、生理学特点及术后炎症反应较成人复杂，其弱视、后发障等术后并发症易发生，因此患者视力恢复较难达到期望效果。更为困难的是，目前对该病病因和病理机制仍缺乏深入系统研究，大量先天性白内障致病位点及基因致病机制尚不清楚，给预防、诊断及针对性治疗干预带来障碍。先天性白内障防治措施乏力的根本原因在于该病在早期胚胎及初生期的病因与病理机制缺乏深入研究。造成这种问题的原因主要有以下几个方面：1)因医学伦理范畴及该病的随机性，人类先天性白内障胚胎无法获取。2)临床表现的异质性强。该病临床表型差异较大，严重者在出生时即开始显现发病表型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种先天性白内障疾病动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)针对小鼠GJA8基因的第二个外显子区域设计gRNA靶标位点序列，序列如SEQ IDNO.1所示；扩增同源臂和cKO区域，分别连接到载体上，最后质粒构建如图9所示；将构建好的质粒电转ES细胞，通过鉴定后再向囊胚中注射阳性克隆，并转移入小鼠体内，出生小鼠即为F0，经发育成熟后，得到发生基因突变C.134G>T的首建者小鼠；/n2)将带有突变的首建者小鼠与野生型小鼠交配，得到基因突变的杂合子小鼠F1代；/n3)将基因型相同的杂合子小鼠(WT/mut)F1代相互交配，得到GJA8(C.134G>;T)基因突变纯合子...

【技术特征摘要】
1.一种先天性白内障疾病动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)针对小鼠GJA8基因的第二个外显子区域设计gRNA靶标位点序列，序列如SEQIDNO.1所示；扩增同源臂和cKO区域，分别连接到载体上，最后质粒构建如图9所示；将构建好的质粒电转ES细胞，通过鉴定后再向囊胚中注射阳性克隆，并转移入小鼠体内，出生小鼠即为F0，经发育成熟后，得到发生基因突变C.134G>T的首建者小鼠；
2)将带有突变的首建者小鼠与野生型小鼠交配，得到基因突变的杂合子小鼠F1代；
3)将基因型相同的杂合子小鼠(WT/mut)F1代相互交配，得到GJA8(C.134G>T)基因突变纯合子小鼠(mut/mut)F2代。


2.根据权利要求1所述的一种先天性白内障疾病动物模型的构建方法，其特征在于，构建方法还包括步骤4)：将步骤3)的F2代小鼠与Cre工具小鼠进行杂交，从而获得F1’代GJA8(C.134G>T)mut/mut；WT/KO杂合子小鼠，将GJA8(C.134G>T)mut/mut；WT/KO杂合子小鼠进行交配，获得F2’代GJA8KO/KO纯合子非突变小鼠。


3.根据权利要求1所述的一种先天性白内障疾病动物模型的构建方法，其特征在于，步骤1)中同源臂和cKO区域包括第二外显子5’端A片段，B片段，B1片段和3’端D片段。


4.根据权利要求3所述的一种先天性白内障疾病动物模型的构建方法，其特征在于，A片段大小为3123bp...

【专利技术属性】
技术研发人员：林森，刘闻一，李雪，罗琳林，叶剑剑，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：重庆;50