一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用。该构建方法包括：通过无缝克隆的技术构建打靶载体，该打靶载体包含3.3kb 5'同源臂、CAG启动子、loxp‑stop‑loxp、TERT‑3XFlag‑IRES‑EGFP‑WPRE‑polyA和3.3kb 3'同源臂；将Cas9 mRNA、gRNA和上述打靶载体显微注射到野生型小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，回交后繁育获得F1代小鼠，即为条件性mTERT过表达的小鼠模型。本发明专利技术提供的构建方法构建的小鼠可以与不同的Cre工具鼠交配，实现在全身各种组织器官、细胞类型中的特异性过表达。该鼠可以用于研究胚胎和神经发育、衰老、创伤修复、肿瘤发生发展和治疗的多种转基因模型造模，且与CreERT工具鼠的交配可以通过他莫昔芬控制TERT过表达的时间。

【技术实现步骤摘要】
一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用。
技术介绍
人体多数正常分化组织内几乎无端粒酶活性，但90％以上的恶性肿瘤中都能检测到端粒酶活性，提示端粒酶在肿瘤发展的过程中具有重要作用。TERTmRNA表达水平与端粒酶活性呈正比，TERT(端粒酶逆转录酶)作为端粒酶的主要亚基之一，可以TERC(端粒酶RNA基因)为模板，通过与其他亚基的共同作用延长端粒。TERT在肿瘤中存在多种激活途径。目前已有报道的有启动子点突变、拷贝数变异、表观遗传修饰、病毒整合、基因融合或重排等。脑胶质瘤、黑色素瘤、肺癌、肝癌、甲状腺癌等多种常见恶性肿瘤均存在TERT启动子突变。此外，TCGA数据库显示，肺癌、膀胱癌、卵巢癌等多种肿瘤均有TERT扩增。TERT经典的功能为作为端粒酶的主要亚基之一，参与维持端粒长度。但近年来也有许多研究表明，TERT也具有不依赖端粒酶延长端粒功能的作用。缺少RT-domain的TERT，可通过MYC和WNT通路激活小鼠毛囊干本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一，通过无缝克隆的技术构建打靶载体，所述打靶载体包含3.3kb 5'同源臂、CAG启动子、loxp-stop-loxp、TERT-3XFlag-IRES-EGFP-WPRE-polyA和3.3kb 3'同源臂；/n步骤二，将Cas9 mRNA、gRNA和所述打靶载体显微注射到野生型小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，回交后获得F1代小鼠，即为条件性mTERT过表达的小鼠模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，通过无缝克隆的技术构建打靶载体，所述打靶载体包含3.3kb5'同源臂、CAG启动子、loxp-stop-loxp、TERT-3XFlag-IRES-EGFP-WPRE-polyA和3.3kb3'同源臂；
步骤二，将Cas9mRNA、gRNA和所述打靶载体显微注射到野生型小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，回交后获得F1代小鼠，即为条件性mTERT过表达的小鼠模型。


2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述gRNA的序列为SEQIDNO.:1。


3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤二中所述鉴定采用的技术是长片段P...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉龙，于鹏程，余发星，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：上海;31