本发明专利技术提供了嵌合的、人源化的和人的单克隆抗体(mAb)及其片段，其以高亲和力特异性结合至海蟾蜍毒素(MBG)。抗MBG mAb及其片段可用于治疗MBG相关疾病，包括高血压疾病和纤维化疾病，可选地与另外的治疗剂组合。此外，抗MBG mAb及其片段可用于诊断目的，包括检测生物学样本中的MBG和诊断MBG相关疾病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗海蟾蜍毒素抗体及其应用对联邦资助研究的声明本专利技术是在政府机构NIH/NICHD(国家儿童健康与发展研究所)授予的第1R43HD072745-01批准号的政府支持下进行的。政府拥有本专利技术的某些权利。参考序列表、表格或计算机程序序列表的正式文本以ASCII格式的文本文件通过EFS-Web与本说明书同时提交，其文件名为“PRI002_ST25.txt”，创建日期为2018年6月7日，大小为52KB。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，并在此以其全文形式被援引加入本文。
技术介绍
高血压与多种疾病有关。一种高血压疾病是先兆子痫(PE)。PE是妊娠的严重并发症，表征为妊娠20周后高血压(舒张压≥90mmHg)和蛋白尿(24小时内≥300mg)。PE有时或经常伴有水肿(例如肺水肿)、脑病、癫痫发作、肾功能不全、肝功能衰竭、子宫内生长受限(IUGR)和早产，后两者不利于胎儿和新生儿的生存和健康。PE发生在约5-10％的怀孕中，是全世界母婴发病率和死亡率的主要原因。PE的唯一已知有效疗法是新生儿的早产。另外，纤维化导致许多疾病。一种纤维化疾病是糖尿病肾病(DN)，其也表征为高血压。DN影响约15-25％的1型糖尿病患者和约30-40％的2型糖尿病患者，并且是世界上最常见的终末期肾病(ESRD)的病因。临床DN涉及一系列病理事件，包括肾小球内毛细血管压力和肾小球滤过率(GFR)的初始升高、肾小球肥大、系膜基质扩张、肾小球基底膜增厚、小动脉透明变性、结节性肾小球硬化、肾小管间质纤维化和损伤、以及蛋白尿(包括白蛋白尿)。例如，肾小球毛细血管的瘢痕形成(肾小球硬化)会损害肾小体的过滤过程，并使蛋白质从血液中泄漏到尿液中，从而导致蛋白尿。DN患者的血糖控制差会加剧疾病进展为肾功能不全和GFR下降，从而可导致ESRD。
技术实现思路
本公开内容提供了抗体，包括以高亲和力特异性结合至海蟾蜍毒素(MBG)的抗体片段。抗体可以是单克隆的，并且可以是人的、嵌合的或人源化的抗体。包括其片段的嵌合抗MBG抗体可能具有非人(例如鼠)互补决定区(CDR)和非人框架区，以及可选地一个或多个人恒定域。包括其片段的人源化抗MBG抗体可能具有非人(例如鼠)CDR和人框架区，以及可选地与CDR相邻的非人框架氨基酸残基和可选地一个或多个人恒定域。人抗MBG抗体及其片段可能具有人CDR和人框架区，以及可选地一个或多个人恒定域。所公开的人类抗体代表来自文库的抗海蟾蜍毒素抗体，该文库代表与海蟾蜍毒素结合的抗体的原始人类基因组库。在人噬菌粒文库(代表抗体的原始人类基因组库)上淘选鉴定了数十个MBG特异性克隆。大于100种人抗体(Fab)的后续表征将人抗体减少为14种独特抗体，这些抗体在竞争性ELISA筛选中显示与MBG结合。因此，从文库获得的人抗体代表可以结合海蟾蜍毒素的原始人基因组库中发现的那些抗体。本文所述的抗MBG抗体可以包括为抗体提供所需性质的修饰。例如，修饰可以增加抗体的血清半衰期，或者修饰可以减少血清半衰期。修饰还可以增加抗体的效应物功能，例如增加抗体-MBG复合物的清除率。修饰可以降低免疫原性，或减少由抗MBG抗体引起的其它不想要的副作用或不良事件。本文所述的抗MBG抗体可以中和或抑制MBG的生物学作用和效应，因此可用于治疗MBG相关疾病。例如，本文所述的抗MBG抗体可用于抑制MBG在细胞上的受体结合。本文所述的抗体可用于抑制由海蟾蜍毒素在细胞中诱导的PKC-δ的核易位。本文所述的抗体可用于减少由海蟾蜍毒素引起的内皮细胞对增殖的抑制。本文所述的抗体可用于减少由海蟾蜍毒素引起的内皮细胞对血管生成的抑制。MBG相关疾病可以包括，例如急性呼吸窘迫综合征和/或外伤性脑损伤。其它MBG相关疾病包括，例如高血压(例如原发性高血压)、高血压相关疾病(例如先兆子痫)和纤维化相关疾病(例如非酒精性脂肪性肝炎、糖尿病性肾病)。这些MBG相关疾病可以通过向患有MBG相关疾病的受试者施用一种或多种本文所述的抗体来治疗。本文所述的抗MBG抗体可用于诊断目的。所述MBG诊断使用抗体来检测MBG。这些诊断可以在体外或体内进行。所述诊断可以例如定量样品中的MBG或检测MBG的位置和/或该位置的MBG浓度。这些诊断可用于确定受试者是否患有MBG相关疾病，以及可选地，MBG相关疾病的严重程度。附图说明通过参考下面的详细描述，将获得对本公开内容的特征和优点的更好的理解，以下详细描述阐述了本公开内容的说明性实施例以及附图。图1示出了在直接ELISA结合实验中人源化抗MBG的抗原结合。图1a比较了6种人源化的抗MBG抗体，而图1b比较了人源化抗MBG抗体和亲本3E9抗体。图2a是Western印迹，示出了与单独的MBG(2nM)或与MBG(2nM)加抗MBG抗体一起孵育的原代心脏成纤维细胞核中蛋白激酶C-δ(PKC-δ，78kDa)的相对量。图2b是Western印迹，示出了与MBG(10nM)或与MBG(10nM)加抗MBG抗体一起孵育的原代心脏成纤维细胞核中蛋白激酶C-δ(PKC-δ，78kDa)的相对量。图3a示出了与单独的MBG(2nM)或与MBG(2nM)加人抗MBG抗体(20μg/mL)一起孵育的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖水平。图3b示出了与单独的MBG或与MBG(2nM)加人源化抗MBG抗体(2.5-10μg/mL)一起孵育的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖水平。图4示出了OD630读数作为Pi的量度，其是Na+K+-ATP酶活性的量度。条形图显示了MBG对Pi水平的作用，以及抗MBG抗体对该作用的逆转。图5示出了用于测量生物样品中MBG的竞争性ELISA测定中MBG的标准曲线。具体实施方式尽管在此描述了本公开内容的各种实施例，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施例仅以示例的方式提供。在不脱离本公开内容的情况下，本文所述的实施例的多种修改和改变以及变化和替代对本领域技术人员而言将是显而易见的。应当理解，在实践本公开内容中可以采用本文所述的实施例的各种替代方案。还应理解，本公开内容的每个实施例可以可选地与本文所述的与该实施例一致的其它实施例中的任何一个或多个组合。在以列表格式(例如，以马库什组)表示元素之处，应当理解，还公开了元素的每个可能的子组，并且可以从列表或组中除去任何一个或多个元素。还应理解，除非有明显的相反指示，否则在本文描述或要求保护的包括一个以上动作或步骤的任何方法中，该方法的动作或步骤的顺序不必要限于所记载的该方法的动作或步骤的顺序，而是本公开内容涵盖其中顺序如此受限的实施例。还应理解，一般，在说明书或权利要求书中的一个实施例被提及包括一个或多个特征时，本公开内容还涵盖由这些特征组成或基本上由这些特征组成的实施例。还应理解，本公开内容的任何实施例，例如在现有技术中发现的任何实施例，都可以明确地从权利要求中排除，而不管说明书中是否记载了特定的排除。还应理解，本文中提及肽本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗海蟾蜍毒素抗体，包括SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和人重链可变框架，以及SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和人轻链可变框架，其中所述抗海蟾蜍毒素抗体选自由H1L1、H1L2、H2L1、H2L2、H3L1和H3L2组成的组。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180621 US 62/687,9781.一种抗海蟾蜍毒素抗体，包括SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和人重链可变框架，以及SEQIDNO：6、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8和人轻链可变框架，其中所述抗海蟾蜍毒素抗体选自由H1L1、H1L2、H2L1、H2L2、H3L1和H3L2组成的组。
2.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗海蟾蜍毒素抗体是HIL1。
3.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗海蟾蜍毒素抗体是H2L1。
4.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗海蟾蜍毒素抗体是H3L1。
5.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗海蟾蜍毒素抗体是H1L2。
6.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗海蟾蜍毒素抗体是H2L2。
7.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗海蟾蜍毒素抗体是H3L2。
8.一种人源化的抗海蟾蜍毒素抗体，其中所述抗体是竞争性抑制剂，与包括SEQIDNO：1的重链可变区和SEQIDNO：2的轻链可变区的抗体结合到海蟾蜍毒素。
9.一种人源化的抗海蟾蜍毒素抗体，其中所述抗体与包括重链可变区和轻链可变区的抗体竞争性结合至海蟾蜍毒素，所述重链可变区选自由SEQIDNO：9，SEQIDNO：10和SEQIDNO：11组成的组，所述轻链可变区选自由SEQIDNO：12和SEQIDNO：13组成的组。
10.根据权利要求9所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗体包括SEQIDNO：11的重链可变区和SEQIDNO：13的轻链可变区。
11.根据权利要求1所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗体是抗体片段。
12.根据权利要求11所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗体片段是单链抗体。
13.根据权利要求11所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗体片段是Fab片段。
14.根据权利要求11所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗体片段是重组片段。
15.根据权利要求11至14中任一项所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中抗体片段包含延长部分。
16.根据权利要求15所述的抗海蟾蜍毒素抗体，其中延长部分是聚乙二醇。
17.根据权利要求1、8...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·W·拉里克，J·M·威格斯，A·R·门德尔松，V·沙玛，余波，
申请(专利权)人：CTS生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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