一株可保护肠道屏障的瘤胃乳杆菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一株可保护肠道屏障的瘤胃乳杆菌及应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了一株瘤胃乳杆菌，能够显著降低DSS诱导的肠道损坏小鼠的疾病活动指数，与模型组小鼠相比，瘤胃乳杆菌CCFM1140干预组小鼠的组织损伤显著减轻，促炎细胞因子TNF‑α，IL‑1β，IL‑17的浓度降低，抑炎细胞因子IL‑10的浓度上调。该菌株具有改善肠道机械屏障，免疫屏障，生物屏障的功能，可作为益生菌制剂的主要成分，具有广阔的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
一株可保护肠道屏障的瘤胃乳杆菌及应用
本专利技术涉及一株可保护肠道屏障的瘤胃乳杆菌及应用，尤其是一种能够保护肠道屏障的菌株，其可添加在各种健康食品及保健食品中，属于微生物

技术介绍
肠道屏障是指能够阻止肠腔内病原菌和毒素穿过肠黏膜入侵到血液系统和其它组织器官的结构和功能的总和，对人体健康起重要作用。肠道屏障由机械屏障、免疫屏障、生物屏障和化学屏障共同构成。机械屏障是指肠上皮分泌的黏液、肠上皮细胞及其紧密连接等，直接与肠道疾病的发生有关；免疫屏障包含了肠道相关淋巴組织、吞噬细胞、sIgA、防御素等，直接影响肠道的免疫细胞、细胞因子等，进而通过血液，淋巴循环影响全身的免疫器官；生物屏障是肠黏膜菌与宿主微环境形成的相互依赖、相互作用的肠道菌群，更是与肥胖、非酒精性脂肪肝等疾病密切相关；化学屏障包括胃酸、胆汁酸、溶菌酶、各种消化酶等，与肠道炎症、代谢疾病直接相关。许多肠道相关的疾病，如结肠炎，易激性肠炎，腹泻，便秘等肠道疾病都与肠道屏障的破坏直接相关。因此，维护肠道屏障的正常是保护肠道健康的关键。结肠炎，易激性肠炎，腹泻，便秘等肠道疾病会对肠道造成较大的影响，会影响患者的生活质量，导致社会、心理和专业领域的变化。使用药物进行常规治疗的研究越来越多，目的是减少症状和炎症。长期使用肠道肠道炎症相关的药物(抑制剂类，激素类，抗生素类)可能会导致高血压、糖尿病、骨质疏松等其他疾病，从而影响治疗的成功。鉴于现有治疗方案存在的多种问题，替代传统方法的方案显得尤为重要了，新的治疗方案包括单克隆抗体、益生元、益生菌等。而上述多种疗法的可行性也促使我们继续寻找应用更广泛、潜力更巨大，同时又具有调节肠道屏障作用的膳食补充剂。益生菌对便秘、肠炎、腹泻、非酒精性脂肪肝、糖脂代谢紊乱、情绪及行为障碍均具有显著改善作用，而这与益生菌对肠上皮细胞及紧密连接的调节作用(机械屏障)、肠道免疫细胞及细胞因子(免疫屏障)和肠道菌群(生物屏障)密不可分。
技术实现思路
本专利技术提供了一种瘤胃乳杆菌在制备预防和/或保护肠道屏障的产品中的应用，所述瘤胃乳杆菌能够用于制备预防和/或保护肠道屏障的产品中。本专利技术的第一个目的是提供一株瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140，所述瘤胃乳杆菌CCFM1140保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.61158，保藏日期为2020年8月21日。所述瘤胃乳杆菌CCFM1140来源于新疆乌苏的健康人粪便，该菌株经测序分析，其16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示，将测序得到的序列在NCBI数据库中进行核酸序列比对，结果显示菌株为瘤胃乳杆菌，命名为瘤胃乳杆菌CCFM1140，留存于江南大学食品生物技术菌种保藏中心。所述瘤胃乳杆菌CCFM1140在MRS固体培养基上的菌落突起，光滑、圆形、乳白色、半透明、直径为1-2mm。本专利技术的第二个目的是提供含有所述瘤胃乳杆菌CCFM1140的制剂，其中的瘤胃乳杆菌CCFM1140数量≥1×1010CFU/g或1×1010CFU/mL。在一种实施方式中，所述制剂为菌悬液。在一种实施方式中，所述制剂为冻干菌粉。在一种实施方式中，所述产品中，瘤胃乳杆菌的活菌数为不低于1×1010CFU/g。本专利技术的第三个目的是提供所述瘤胃乳杆菌CCFM1140在制备具备缓解和/或治疗肠道屏障损坏方面的应用。在一种实施方式中，所述应用包括如下至少一种功能：(1)缓解因肠道屏障损坏导致的结肠缩短；(2)减轻结肠组织损伤；(3)上调结肠紧密连接蛋白的表达，改善肠道的机械屏障；(4)降低促炎细胞因子TNF-α，IL-1β，IL-17的浓度，并且上调抑炎细胞因子IL-10的浓度，改善肠道免疫屏障；(5)增加有益菌群瘤胃梭菌属、阿克曼菌属的相对丰度，改善肠道生物屏障。在一种实施方式中，所述产品包括食品、药品或保健品。在一种实施方式中，所述产品是冻干粉。在一种实施方式中，所述冻干粉的制备方法为将上述瘤胃乳杆菌接种至种子培养基中进行培养，得到种子液；将种子液接种到发酵培养基中进行培养，得到细胞培养液；将细胞培养液离心，收集菌泥；将菌泥用生理盐水清洗后重悬，得到重悬液；向重悬液中添加冻干保护剂，得到混合液；将混合液真空冷冻干燥，得到冻干粉。在一种实施方式中，将种子液按2～4％(v/v)的接种量接种到培养基中进行培养。在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分包括脱脂乳粉、海藻糖、蔗糖和水。在一种实施方式中，所述冻干保护剂为含80-120g/L脱脂乳粉、80-140g/L海藻糖、140-180g/L蔗糖的溶液。在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分包括100g/L脱脂乳粉、100g/L海藻糖、160g/L蔗糖和水。在一种实施方式中，所述冻干保护剂在重悬液中的添加量为菌泥总重量的2～4倍。在一种实施方式中，种子培养基为MRS固体培养基，发酵培养基为MRS液体培养基。在一种实施方式中，所述MRS液体培养基是加了半胱氨酸盐酸盐的MRS液体培养基。在一种实施方式中，所述半胱氨酸盐酸盐的添加量为按质量分数0.04-0.1％。在一种实施方式中，将种子液按2-4％的接种量接种到MRS液体培养基中进行培养的培养条件为：34-38℃厌氧培养24h～36h，7000-12000rmp离心20～30min，收集菌泥，用生理盐水清洗3～4次后重悬。本专利技术还提供了一种用于预防和/或保护肠道屏障的产品，所述产品中含有上述瘤胃乳杆菌。在一种实施方式中，所述产品中瘤胃乳杆菌的活菌数为不低于1×1010CFU/g。有益效果：(1)本专利技术所提供的瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140分离自健康人的肠道菌群，该菌株对人体无毒副作用，因此采用本专利技术提供的瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140制备的药物，相对于用于保护肠道屏障的传统药物具有一定的优势，并且该菌株可用于制作益生菌制剂等，具有广阔的市场前景。(2)采用本专利技术所提供的瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140，能够显著降低DSS诱导肠炎期间小鼠的疾病活动指数，减轻结肠的缩短，显著减轻结肠组织的损伤。(3)瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140干预能显著上调结肠紧密连接蛋白，改善肠道的机械屏障。(4)瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140干预显著降低了促炎细胞因子TNF-α，IL-1β，IL-17的浓度，并且上调了抑炎细胞因子IL-10的浓度，改善肠道的免疫屏障。(5)瘤胃乳杆菌(Lactobacillusruminis)CCFM1140干预增加了有益菌群瘤胃梭菌属(Ruminiclostridium6)、阿克曼菌属(Akkermansia)的相对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.瘤胃乳杆菌CCFM1140，已于2020年8月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.61158。/n

【技术特征摘要】
1.瘤胃乳杆菌CCFM1140，已于2020年8月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.61158。


2.含有所述瘤胃乳杆菌CCFM1140的制剂，其中的瘤胃乳杆菌CCFM1140数量≥1×1010CFU/g或1×1010CFU/mL。


3.权利要求1所述的瘤胃乳杆菌CCFM1140在制备预防和/或保护肠道屏障的产品中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品中瘤胃乳杆菌的活菌数不低于1×1010CFU/g。


5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括功能性食品、药品或保健品。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，杨波，王烁，崔树茂，陆文伟，赵建新，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32