不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物培养基技术领域，提供一种不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基及其应用，培养基包括：非动物来源氮源、混合碳源、可溶性淀粉、氯化钠、L‑半胱氨酸盐、吐温‑80和维生素B1，其中，非动物来源氮源占培养基的含量为1.0‑3.0％；混合碳源占培养基的含量为0.5‑3.0％；可溶性淀粉占培养基的含量为0.1‑0.5％；氯化钠占培养基的含量为0.1‑1.0％；L‑半胱氨酸盐占培养基的含量为0.01‑1％；吐温‑80占培养基的含量为0.02‑1％；维生素B1占培养基的含量为0.01‑0.5％；培养基中pH为6.5‑8.5。本发明专利技术提供的培养基不含动物来源的氮源，可确保培养基不被复杂的污染物污染，确保在发酵生长婴儿双歧杆菌过程中安全性好、适用性高，发酵生长过程中工艺控制条件稳定，所得婴儿双歧杆菌产量高。

【技术实现步骤摘要】
不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基及其应用
本专利技术涉及微生物发酵
，具体涉及一种不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基及其应用。
技术介绍
双歧杆菌(Bifidobacterium)是人体最重要的生理性细菌，是胃肠道正常菌群中核心的优势菌群。长期和大量的研究表明，在人和豢养动物的整个生命过程中，双歧杆菌的多项生理调节功能对维持其健康状态具有至关重要的作用；换句话说，机体几乎所有的非健康状态，都直接或间接地与双歧杆菌数量和功能的平衡失调有关。正因如此，从20世纪70年代末开始，双歧杆菌制剂及其相关产品的开发及其产业化，成为健康产业链中重要的一环，在药品、保健品、食品、兽药和饲料等生产领域得到蓬勃发展，至今仍势头强劲。目前，双歧杆菌制剂及其相关产品的开发和生产主要通过发酵工程技术手段进行，主要有赖于双歧杆菌的大规模发酵培养，因此，不断开发出双歧杆菌高效、简便、廉价和安全的生产型培养基，以期提高培养效率，保证产品质量，降低生产成本，已成为双歧杆菌制剂及其相关产品的生产企业和研发机构着力追求的目标。现有双歧杆菌的发酵培养基配方中几乎都含有动物来源氮源，包括但不限于酪蛋白胨、胰蛋白胨、胃蛋白胨、牛蛋白胨、水解乳蛋白、牛肉浸粉、牛肉浸膏、肝浸粉、消化血清粉等等，这类动物来源的氮源可能会残留在双歧杆菌的产品中，存在一定的安全隐患。例如专利CN201910299559.1公开了一种筛选适宜双歧杆菌增殖的氮源的培养基，利用培养基配方配置得到不同氮源的培养基，所述氮源包括：鱼骨蛋白胨、酵母提取物、酵母蛋白103、大豆蛋白胨、安琪蛋白胨、干酪素、酵母浸粉803、酵母浸粉528、水解植物蛋白、胰蛋白胨、胰酪蛋白胨、食品级水解植物蛋白、乳清蛋白粉、大豆蛋白粉、鱼蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸膏、牛肉浸膏、骨胶原蛋白胨、食品级干酪素、牛肉蛋白胨、牛骨蛋白胨。该培养基仍旧采用动物来源的氮源且氮源组分复杂，对婴儿双歧杆菌的安全性保证不足，具有一定的局限性。因此，有必要提供一种新的发酵培养基以及工艺控制条件，以期解决现有技术中存在的不足。
技术实现思路
为解决现有技术的问题，本专利技术的目的在于提供一种不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基及其发酵生产方法，本专利技术提供的培养基不含动物来源的氮源，可确保培养基不被复杂的污染物污染，确保在发酵生长婴儿双歧杆菌过程中安全性好、适用性高，发酵生长过程中工艺控制条件稳定，所得婴儿双歧杆菌产量高。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术公开了一种不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，所述培养基包括：非动物来源氮源、混合碳源、可溶性淀粉、氯化钠、L-半胱氨酸盐、吐温-80和维生素B1；按W/V％计算，其中，所述非动物来源氮源占所述培养基的含量为1.0-3.0％；所述混合碳源占所述培养基的含量为0.5-3.0％；所述可溶性淀粉占所述培养基的含量为0.1-0.5％；所述氯化钠占所述培养基的含量为0.1-1.0％；所述L-半胱氨酸盐占所述培养基的含量为0.01-1％；所述吐温-80占所述培养基的含量为0.02-1％；所述维生素B1占所述培养基的含量为0.01-0.5％；所述培养基中pH为6.5-8.5。进一步地，所述非动物来源氮源选自大豆蛋白胨、酵母浸粉、酵母浸膏、玉米浆、玉米浆干粉中的一种或者多种。进一步地，所述非动物来源氮源优选为酵母浸粉。本专利技术采用非动物来源氮源本身具有丰富的可溶性蛋白、氨基酸、维生素、肽、多肽、核酸、无机盐、微量元素等，其营养结构很适合婴儿双歧杆菌的生长繁殖需要。进一步地，所述混合碳源选自葡萄糖，蔗糖、麦芽糖、甘油、乳糖、半乳糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种。进一步地，所述混合碳源为：葡萄糖和低聚半乳糖的混合物，进一步优选地，二者的质量比为1:0.25～1。本申请通过改变培养基配方，例如增加维生素B1在培养基中的含量，在混合碳源中添加低聚半乳糖，实现非动物来源的氮源具有媲美动物来源氮源等同的效果。进一步地，所述培养基按W/V％计算，其中，所述非动物来源氮源占所述培养基的含量为2.5％；所述混合碳源占所述培养基的含量为2.25％；所述可溶性淀粉占所述培养基的含量为0.25％；所述氯化钠占所述培养基的含量为0.25％；所述L-半胱氨酸盐占所述培养基的含量为0.05％；所述吐温-80占所述培养基的含量为0.1％；所述维生素B1占所述培养基的含量为0.02％；所述培养基中pH为7-8.0。进一步地，所述培养基按W/V％计算，包括酵母粉2.5％，葡萄糖2.0％，低聚半乳糖0.25％，可溶性淀粉0.25％，氯化钠0.25％，L-半胱氨酸盐0.05％，吐温-800.1％，维生素B10.02％，pH7.5～8.0。进一步地，所述婴儿双歧杆菌为婴儿双歧杆菌(B.infantis.CGMCCNO.0313-2)。婴儿双歧杆菌(B.infantis.CGMCCNO.0313-2)通过健康婴儿的新鲜粪便中分离而得到。菌种的腮腺主要依据婴儿双歧杆菌菌体形态及菌落特征进行筛选。现将婴儿双歧杆菌进行平板分离，厌氧培养48-72小时，挑选圆形的、边缘整齐、凸起、表明光滑的、较大的菌落，菌落镜检菌体直或弯曲形，扩种一次，接发酵12小时厌氧培养后，离心收集菌泥，加保护剂制成菌悬液，装安瓿管。安瓿管装好后放-20℃预冻后，用真空冷冻干燥法冻干，装于多歧管上抽真空，保存在液氮中。婴儿双歧杆菌(B.infantis.CGMCCNO.0313-2)菌种特征鉴定如下表：另一方面，本专利技术提供一种婴儿双歧杆菌的发酵生产方法，其通过将婴儿双歧杆菌种子液接种至本专利技术所述的不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基中培养，即可。本专利技术发酵生产方法，通过控制发酵培养的工艺条件，实现培养的婴儿双歧杆菌能达到1010cfu/ml的水平，以解决现有工艺无法实现的水平问题。进一步地，所述发酵生长方法，包括以下工序：工序一，种子扩培：配制不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，加热灭菌；将婴儿双歧杆菌工作种子复融后接种至培养基中，密封并培养，菌液pH降至4.5以下，即种子扩培完成；工序二，发酵培养：配制不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，加热灭菌结束后，用纯度≥99％的无菌高纯氮气将发酵罐内溶解氧进行置换，直至溶解氧低于5％；工序一扩培完成的菌液全部接种至发酵罐内，用纯度≥99％的无菌高纯氮气维持罐压压力，培养；发酵过程取样检测发酵液OD、残糖、活菌数；工序三，离心收菌：发酵培养完成后，发酵液离心，收集菌体。进一步地，所述发酵生长方法，包括以下工序：工序一，种子扩培：配制不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基500ml，调节pH至7.5-8.0，并进行115℃，15分钟灭菌待用；取婴儿双歧杆菌工作种子，常温复融3分钟，接种至优选培养基中，密封并置37.0±1.0℃摇床，120rpm进行培养，菌液pH降至4.5以下，即种子扩培完成；工序二，发酵培养：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述培养基包括：非动物来源氮源、混合碳源、可溶性淀粉、氯化钠、L-半胱氨酸盐、吐温-80和维生素B1；/n按W/V％计算，其中，所述非动物来源氮源占所述培养基的含量为1.0-3.0％；所述混合碳源占所述培养基的含量为0.5-3.0％；所述可溶性淀粉占所述培养基的含量为0.1-0.5％；所述氯化钠占所述培养基的含量为0.1-1.0％；所述L-半胱氨酸盐占所述培养基的含量为0.01-1％；所述吐温-80占所述培养基的含量为0.02-1％；所述维生素B1占所述培养基的含量为0.01-0.5％；所述培养基中pH为6.5-8.5。/n

【技术特征摘要】
1.一种不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述培养基包括：非动物来源氮源、混合碳源、可溶性淀粉、氯化钠、L-半胱氨酸盐、吐温-80和维生素B1；
按W/V％计算，其中，所述非动物来源氮源占所述培养基的含量为1.0-3.0％；所述混合碳源占所述培养基的含量为0.5-3.0％；所述可溶性淀粉占所述培养基的含量为0.1-0.5％；所述氯化钠占所述培养基的含量为0.1-1.0％；所述L-半胱氨酸盐占所述培养基的含量为0.01-1％；所述吐温-80占所述培养基的含量为0.02-1％；所述维生素B1占所述培养基的含量为0.01-0.5％；所述培养基中pH为6.5-8.5。


2.根据权利要求1所述不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述非动物来源氮源选自大豆蛋白胨、酵母浸粉、酵母浸膏、玉米浆、玉米浆干粉中的一种或者多种。


3.根据权利要求1所述不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述混合碳源选自葡萄糖，蔗糖、麦芽糖、甘油、乳糖、半乳糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种。


4.根据权利要求1所述不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于所述混合碳源为：葡萄糖和低聚半乳糖的混合物。


5.根据权利要求1所述不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述培养基按W/V％计算，其中，所述非动物来源氮源占所述培养基的含量为2.5％；所述混合碳源占所述培养基的含量为2.25％；所述可溶性淀粉占所述培养基的含量为0.25％；所述氯化钠占所述培养基的含量为0.25％；所述L-半胱氨酸盐占所述培养基的含量为0.05％；所述吐温-80占所述培养基的含量为0.1％；所述维生素B1占所述培养基的含量为0.02％；所述培养基中pH为7-8.0。


6.根据权利要求1所述不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述培养基按W/V％计算，包括酵母粉2.5％，葡萄糖2.0％，低聚半乳糖0.25％，可溶性淀粉0.25％，氯化钠0.25％，L-半胱氨酸盐0.05％，吐温-800.1％，维生素B10.02％，pH7.5～8.0。


7.根据权利要求1所述不含动物来源氮源的婴儿双歧杆菌发酵培养基，其特征在于，所述婴儿双歧杆菌为婴儿双歧杆菌(B.infantis.CGM...

【专利技术属性】
技术研发人员：周新荣，李彪，潘志友，田方方，马鸿杰，秦锁富，
申请(专利权)人：深圳科兴药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44