一株绿针假单胞菌及其应用制造技术

一种绿针假单胞菌及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了绿针假单胞菌在控制植物病害菌和抑制单子叶杂草生长的作用。本发明专利技术的绿针假单胞菌及其次生代谢产物源于自然归于自然，与环境友好兼容，对农林作物的杂草的抑制作用有较好的针对性，且在控制杂草生长的同时，具有抑制植物病虫害的作用，无污染无残留，可作为无公害新型微生物除草剂用于林地除草剂的无害化生产。

【技术实现步骤摘要】
一株绿针假单胞菌及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种绿针假单胞菌及其应用。
技术介绍
化学除草剂为我国的粮食生产做出了重大贡献，但是长期大量重复使用化学除草剂也带来了环境污染、残留药害、杂草抗药性等负面影响。随着人类环保意识的不断提高，要求减少化学除草剂使用的呼声也日益强烈。这些因素促使人们开始致力于开发新型的环境友好型的生物除草剂；微生物除草剂利用杂草病原菌活体或其代谢产物进行杂草防治，是将杂草病原菌活体或其代谢产物加工成一定的剂型，在适宜的防治时期使用来防治杂草，比如在杂草易感病时期使用。微生物除草剂根据其活性成分可以分为两大类：一类是利用微生物活体生产的活体微生物除草剂；一类是利用微生物代谢产物生产的微生物源除草剂。而狭义微生物除草剂通常是指活体微生物除草剂。由于微生物除草剂是利用植物病原菌来防治杂草，这些植物病原菌都是当地生态环境中自然存在的，因此，对环境的毒害作用相对较小。由于微生物除草剂的寄主专一性较强，所以对其他作物相对安全。与化学除草剂相比，微生物除草剂具有环境友好、无毒或低毒、无污染、易于生产等优点，而且在除草的同时往往具有调节土壤生态、抑制病虫害等多种作用，符合可持续农业发展需要；目前投入市场的微生物除草剂大多为真菌除草剂(My-coherbicide),真菌除草剂已成为微生物除草剂(Microbialherbicide)的代名词。最近几年,人们逐渐将目标转向细菌，从杂草根系土壤的微生物菌群中筛选出具有抑制植物生长作用的细菌,以及通过培养获得使其宿主植物致病的细菌胞外植物毒素。如，最近几年在加拿大西部，已对草地土壤中分离出的1000多株根际细菌进行了抑制一年生杂草生长的筛选,证明了将抑制性根际细菌作为潜在生物控制因子的可行性。对能抑制雀麦生长的几株分离菌所在的寄主范围测试表明,根际细菌及其次生代谢产物对杂草的抑制作用是寄主专一性的；非目标作物的试验表明，根际细菌往往对根系和茎生长的抑制作用很小，甚至有益。由于细菌比真菌生长周期短、发酵工艺简单、生产流程易控制、对环境条件要求不严格、易被土壤降解，因此具有良好的应用开发前景，已成为微生物除草剂研究的一大热点。
技术实现思路
针对现有微生物除草剂的发展趋势，本专利技术的目的在于提供一种绿针假单胞菌及其应用的技术方案；所述的一种绿针假单胞菌Pseudomonaschlororaphis菌株sj19，其保藏号为CGMCCNo.19318；所述的绿针假单胞菌作为抑菌剂的应用；所述的绿针假单胞菌作为除草剂的应用；本专利技术所述的绿针假单胞菌源于自然归于自然、与环境友好兼容、无污染无残留，既对植物病害有较强的抑制作用，又对单子叶草类有明显的选择性抑制作用，可用于林地除病害和杂草的无害化生产。附图说明图1为sj19菌的形态学和生物学特征；图1中，a.在PDA培养基上生长；b.该菌形成菌落形态（1cm标尺）；c.该菌的显微形态（标尺为10μm）；图2为sj19菌在LB培养基上的生长情况；左图为培养1天后的菌落生长情况，右图为培养4天后菌落生长情况；图3为sj19菌在PDA培养基上的生长情况；左图为培养1天后的菌落生长情况，右图为培养4天后菌落生长情况；图4为sj19菌促进拟南芥侧根生长对比图；右侧为拟南芥苗在sj19处理后的生长情况，左侧为对照；图5为sj19菌抑制水稻苗生长对比图；左侧为水稻苗在sj19处理后的生长情况，右侧为对照；图6为sj19菌抑制毛竹苗生长对比图；左则为毛竹苗在sj19处理后的生长情况，右侧为对照。具体实施方式以下结合实施例来进一步说明本专利技术。下述的实施例并不对本专利技术作限定作用。实施例1：绿针假单胞菌sj19的分离从一株龙鳞竹的竹鞭部取材，将新挖的竹鞭清洗干净，切成2cm左右小段，先经70%酒精表面消毒，再用50%安替福民（次氯酸钠溶液）消毒半小时，最后无菌水浸泡冲洗4-5次。将上述处理后的材料在超净台上切开，接种到PDA培养基（即固体土豆培养基）平板上，待有菌长出时，分别划线纯化，并分别提取DNA进行分子鉴定，从而获得并确认该菌株。菌株确认的具体步骤如下：1）样品收集：从平板中刮取少量待测菌入200μL的PCR管里，加入无菌水100μL，短时高速离心，去除上清；2）样品裂解：加入50μL直径为0.1mm-0.5mm的玻璃珠，和1mg/mL的proteinaseK悬液100μL，56℃保温，同时500-1000rpm水平震荡培养1h；3）核酸收集：加入5-10%chelex液50μL，80-95℃保温10-30min，短时高速冷冻离心，取上清冷冻保存；4）16s序列的PCR扩增：取步骤3）得到的微量核酸溶液为模板，以16srRNA引物p357f：CTCCTACGGGAGGCAGCAG和p907r：CCGTCAATTCMTTTRAGTTT进行PCR扩增，PCR反应体积是60μL，10XTaqBuffer6μL,2.5mM的dNTPmixture5μL,Taq3u,10μM的引物各2.5μL，模板体积为6μL，剩余用纯水补足；PCR反应程序为：95°C300s；94℃15s，52°C45s，72°C45s，共35-40轮循环；72℃300s。其扩增产物约600bp，该产物以常规PCR产物切胶纯化方法纯化后，最后以p357f为测序引物，测得其16srRNA序列为：CCGTGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGTACTTACCTAATACGTGAGTATTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGAATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCAAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGGAGCCTTGAGCTCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTTGACGGA经blast比对，与现有的PseudomonaschlororaphisstrainFFOM13菌株相似性为99%，可以认为是同一种菌的不同菌株，定名为sj19；绿针假单胞菌（Pseudomonaschlororaphis）sj19于202本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绿针假单胞菌

【技术特征摘要】
1.一种绿针假单胞菌Pseudomonaschlororaphis菌株sj19，其保藏号为CGMCCNo.19318。


2.如权利要求1所述的绿针假单胞菌Pseudomonaschlororaphis菌株sj1...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭华正，金群英，朱汤军，叶华琳，张飞英，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33