一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，主要包括以下步骤：提供菌种原料和培养基；斜面培养；制备一级种子培养液；制备二级种子培养液；制备混合发酵培养液。还公开了该好氧发酵耐盐复合微生物菌剂在餐厨垃圾处理方面的应用。本发明专利技术的氧发酵耐盐复合微生物菌剂的菌种可以耐受1‑10％(NaCl计)的盐分，同时具备产生可降解餐厨垃及主要成分蛋白质、纤维素、淀粉、油脂等物质的水解胞外酶，可以加快有机大分子的降解速率，加快堆肥进程，缩短堆肥周期，提高堆肥产品品质；将其进行餐厨垃圾好氧堆肥，能够更快进入高温期，在高温期保持时间更长，堆体发酵效果更好，最快达到堆肥腐熟标准。可以缩短堆肥周期，节约生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法及应用
本专利技术涉及菌剂生产
，尤其是涉及一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法及应用。
技术介绍
餐厨垃圾可以进行好氧堆肥，在微生物的作用下将调节合适碳氮比的堆料进行生物降解，最终将有机质降解形成二氧化碳、水和能成为植物养分的矿物质和腐殖质，这类矿物质和腐殖质可以改善土壤，可以成为作物生长所必须的养分物质。为了加快餐厨垃圾的腐解的进程，除了依靠其自然滋生的微生物之外，通常为堆料中接种腐解菌剂来加速。好氧微生物的混合发酵技术是近年来兴起的一种高效环保的餐厨垃圾处理方式，混合发酵的原理是利用不同微生物的互生、共生关系以适当的比例进行组合并混合培养来配置微生物共同体。由于混合发酵的多种微生物间具有协同作用，环境适应力较强，且多种微生物所产的酶相比于单菌发酵更加广泛，可有效降解餐厨垃圾中的淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素，所以混合发酵在餐厨垃圾的处理中有着显著的效果。混合发酵是一种效率高、成本低的新方式，利用不同微生物的互生、共生关系以适当的比例进行组合发酵，其环境适应力较强，且多种微生物所产的酶相比于单菌发酵更加广泛，可有效降解餐厨垃圾中的淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素，所以混合发酵在餐厨垃圾的处理中有着显著的效果，有研究表明多种微生物菌剂复配的使用发酵餐厨垃圾的效果优于使用单一菌种的效果。餐厨垃圾堆肥受物料盐分过高这一性质影响，堆肥过程中微生物活动受到盐分胁迫、活性下降，致使堆体升温较为缓慢。
技术实现思路
专利技术目的：为了克服背景技术的不足，本专利技术第一目的是公开一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法；第二目的是公开该好氧发酵耐盐复合微生物菌剂在处理高盐餐厨垃圾上的应用。技术方案：本专利技术公开了一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：S1、提供菌种原料和培养基：所述菌种原料包括短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌，所述培养基包括LB琼脂培养基和LB液体培养基；S2、斜面培养：无菌下，将短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌接种于LB琼脂培养基中；S3、一级种子培养液：无菌下，将S2培养得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基中，制得一级种子液；S4、二级种子培养液：无菌下，将S3所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌一级种子液接种于LB液体培养基中，制得二级种子液；S5、混合发酵培养液：将S4所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌二级种子液等数量级混合接种于LB液体培养基进行混合培养，得到混合发酵培养液。其中，所述短短芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.21234。本专利技术中短短芽孢杆菌(菌株H166)已于2020年11月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号：CGMCCNo.21234；分类命名：副短短芽孢杆菌Brevibacillusparabrevisi(AF237682)。本专利技术的菌株H166能耐受1％盐分，其主要生理生化特征如下：菌落圆形、白色、湿润、透明、边缘整齐、革兰氏阳性。所述枝芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.21233。本专利技术中枝芽孢杆菌(菌株H83)已于2020年11月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号：CGMCCNo.21233；分类命名：废盐田枝芽孢杆菌Virgibacilluschiguensis(EF101168)。本专利技术的菌株H83能耐受1-7％盐分，其主要生理生化特征如下：菌体细胞杆状，末端方，成短或长链，1.0～1.2×3.0～5.0微米。产芽孢，芽孢圆形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊无明显膨大。进一步的，S1中所述LB琼脂培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，琼脂粉15～20g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/LNaOH调节PH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌20min；所述LB液体培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/LNaOH调节PH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌20min。进一步的，S2中在28-32℃下培养1-2天。进一步的，S3中短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基后，在28-32℃条件下，180-200r/min摇床培养1～2天，当菌种液体培养OD值达到3.0以上时停止培养。进一步的，S4中短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌一级种子液接种于LB液体培养基中，接种量为4-6％。在28-32℃条件下，180-200r/min摇床培养1～2天，当菌种液体培养OD值达到3.0以上时停止培养。进一步的，S5中短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌二级种子液接种于LB液体培养基进行混合培养，接种量为2-3％在28-32℃条件下，180-200r/min摇床培养1～2天。本专利技术还公开了一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的应用，将上述制备的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂应用于高盐餐厨垃圾的处理。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点为：首先，本专利技术的氧发酵耐盐复合微生物菌剂的菌种可以耐受1-10％(NaCl计)的盐分，同时具备产生可降解餐厨垃及主要成分蛋白质、纤维素、淀粉、油脂等物质的水解胞外酶，可以加快有机大分子的降解速率，加快堆肥进程，缩短堆肥周期，提高堆肥产品品质；其次，通过添加本专利技术耐盐微生物复合菌剂进行餐厨垃圾好氧堆肥，能够更快进入高温期，在高温期保持时间更长，堆体发酵效果更好，最快达到堆肥腐熟标准。可以缩短堆肥周期，节约生产成本；同时，处理过后的餐厨垃圾堆肥电导率下降较多，发酵后堆肥电导率数值远远低于肥料施用于土壤电导率不得大于4ms/cm的标准，减轻高盐分堆肥对于土壤的损害。附图说明图1为本专利技术制备方法流程图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明。实施例1一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：S1、提供菌种原料和培养基：所述菌种原料包括短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌，所述培养基包括LB琼脂培养基和LB液体培养基；所述LB琼脂培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，琼脂粉15g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/LNaOH调节pH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌20min；所述LB液体培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/LNaOH调节pH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌20min。S2、斜面培养：无菌下，将本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、提供菌种原料和培养基：所述菌种原料包括短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌，所述培养基包括LB琼脂培养基和LB液体培养基；/nS2、斜面培养：无菌下，将短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌接种于LB琼脂培养基中培养；/nS3、一级种子培养液：无菌下，将S2培养得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基中培养，制得一级种子液；/nS4、二级种子培养液：无菌下，将S3所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌一级种子液接种于LB液体培养基中培养，制得二级种子液；/nS5、混合发酵培养液：将S4所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌二级种子液等数量级混合接种于LB液体培养基进行混合培养，得到混合发酵培养液。/n

【技术特征摘要】
1.一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、提供菌种原料和培养基：所述菌种原料包括短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌，所述培养基包括LB琼脂培养基和LB液体培养基；
S2、斜面培养：无菌下，将短短芽孢杆菌和枝芽孢杆菌接种于LB琼脂培养基中培养；
S3、一级种子培养液：无菌下，将S2培养得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基中培养，制得一级种子液；
S4、二级种子培养液：无菌下，将S3所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌一级种子液接种于LB液体培养基中培养，制得二级种子液；
S5、混合发酵培养液：将S4所制得的短短芽孢杆菌、枝芽孢杆菌二级种子液等数量级混合接种于LB液体培养基进行混合培养，得到混合发酵培养液。


2.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述短短芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.21234。


3.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述枝芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.21233。


4.根据权利要求1所述的好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：
S1中所述LB琼脂培养基制备方法为：称取试剂胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，琼脂粉15～20g，加入1000ml去离子水搅拌至溶质溶解，用5mol/LNaOH调节PH至7.0，用去离子水定容至1L，在高压下121℃蒸汽灭菌2...

【专利技术属性】
技术研发人员：李季，丁国春，陈彦廷，
申请(专利权)人：中农新科苏州有机循环研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32