肝细胞癌辅助诊断的血液分子标志物及其引物和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种辅助诊断肝细胞癌的血液分子标志物及其引物和应用，属于生物医学检测领域。本发明专利技术将LINC00221作为一种有效的肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物，其血浆表达水平对于肝细胞癌患者具有较高的诊断价值，且其与血浆AFP的联合使用可提高肝细胞癌患者的检出率。同时利用检测此肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物表达水平的引物可制备肝细胞癌辅助诊断的试剂盒，检测此肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物的表达水平，从而使肝细胞癌的诊断更加方便易行。使用本发明专利技术的血液分子标志物辅助诊断肝细胞癌，其灵敏度、特异度均达到80％以上。上。上。

【技术实现步骤摘要】
肝细胞癌辅助诊断的血液分子标志物及其引物和应用


[0001]本专利技术属于生物医学检测领域，具体涉及一种肝细胞癌辅助诊断的血液分子标志物及其引物和应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌是世界范围内常见的恶性疾病，其发病率居恶性肿瘤第六位，死亡率居癌症相关死亡率的第二位。肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是原发性肝癌的主要病理类型。由于早期诊断率低，HCC往往在晚期才被发现，对人类生命构成极大威胁。北美HCC患者的5年生存率约为19％，在中国HCC患者的5年生存率为12％，目前迫切需要一种可靠的HCC早期诊断方法。近年研究表明，广泛用于HCC诊断的生物标志物
‑
甲胎蛋白(α
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fetoprotein,AFP)在预测早期肝癌方面存在一定不足。因此，识别新型的生物标志物对于肝癌的及时、早期诊断非常重要。
[0003]随着基因组学的发展，越来越多的非编码RNA(non
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coding RNAs,ncRNAs)，尤其是长链非编码RNA(long non
‑
coding RNAs,lncRNAs)，已被证实参与肿瘤发生发展的各种生物学过程，在辅助HCC的早期诊断中有广泛的应用前景，可作为非侵入性的血液分子标志物。
[0004]本专利技术发现HCC患者的血浆lncRNA LINC00221表达水平显著高于癌前病变患者和正常对照者，且血浆LINC00221具有较高的诊断价值，可作为HCC辅助诊断的新型血液分子标志物。

技术实现思路

[0005]针对目前肝细胞癌诊断的现状，本专利技术的目的是提供一种肝细胞癌辅助诊断的血液分子标志物及其引物和应用，即是血浆分子标志物LINC00221在肝细胞癌患者诊断中的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术的第一方面，提供了一种新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物，所述标志物为LINC00221。
[0008]本专利技术的第二方面，提供了一种上述新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物在制备用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒中的应用。所述标志物LINC00221的表达水平升高，提示患者患有肝细胞癌。
[0009]本专利技术的第三方面，提供了上述新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物与AFP联用在制备用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒中的应用。
[0010]本专利技术的第四方面，提供了一种检测上述新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物表达水平的引物。进一步地，所述的引物序列如SEQ NO.1和SEQ NO.2所示。SEQ NO.1为GCAGTAACTGTTGGTTGGGATG，SEQ NO.2为CAGGCTTACAAGTGTCTTAGTCCAG。
[0011]本专利技术的第五方面，提供了一种上述检测新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物
表达水平的引物在制备用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒中的应用。
[0012]进一步地，所述用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒，用于检测所述新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物的表达水平。更进一步地，利用所述序列如SEQ NO:1和SEQ NO:2所示的引物制备用于HCC辅助诊断的试剂盒，检测LINC00221在HCC患者中的表达水平。
[0013]更进一步地，所述用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒包含：检测上述新型肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物表达水平的引物；还可以包含以下成分中的一种或多种：
[0014](1)血浆标本RNA提取所需的试剂；
[0015](2)逆转录反应所需的试剂；
[0016](3)实时荧光定量PCR所需的试剂。
[0017]其中，上述血浆标本RNA提取所需的试剂来自血浆RNA提取试剂盒；上述逆转录反应所需的试剂来自逆转录试剂盒；上述实时荧光定量PCR所需的试剂包含内参GAPDH上游引物和下游引物、SYBR染料和无酶水等。
[0018]更进一步地，所述用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒，还可以包含检测AFP表达水平的试剂。
[0019]与目前肝细胞癌诊断技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0020]本专利技术通过开展实验首次发现血浆LINC00221的表达与HCC的发生密切相关。研究结果表明，从健康者到癌前病变患者(包括乙肝患者和肝硬化患者)到进一步发展为HCC患者，血浆LINC00221的表达水平逐渐升高，血浆LINC00221的表达水平可用于区分HCC患者与健康对照者，具有较高的诊断价值，且血浆LINC00221与血浆AFP的联合使用可提高HCC患者的检出率，进一步证明了LINC00221可作为一种有效的HCC辅助诊断血液分子标志物。同时本专利技术将该HCC辅助诊断血液分子标志物的引物用于制备HCC辅助诊断的试剂盒中，检测HCC辅助诊断血液分子标志物—LINC00221的表达水平，从而使HCC的诊断更加方便易行。具体如下：
[0021]1、本专利技术将LINC00221作为一种有效的肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物，其血浆表达水平与HCC的发生发展密切相关；
[0022]2、本专利技术将血浆LINC00221的表达水平用于辅助诊断肝细胞癌患者，其与血浆AFP的联合使用可提高肝细胞癌患者的检出率。
[0023]3、本专利技术提供检测肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物LINC00221表达水平的引物，利用所述引物可检测患者血浆中LINC00221的表达水平，从而使肝细胞癌的诊断更加方便易行。
[0024]4、本专利技术提供检测肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物LINC00221表达水平的引物的应用，利用所述引物可制备肝细胞癌辅助诊断的试剂盒，从而快速方便的检测LINC00221在患者血浆中的表达水平。
[0025]单独检测血浆LINC00221的表达水平区分肝细胞癌患者和正常对照者，灵敏度、特异度均达到80％以上；联合检测血浆LINC00221的表达水平和AFP的水平区分肝细胞癌患者和正常对照者，灵敏度达到90％以上，特异度接近90％。
附图说明
[0026]图1为本专利技术实施例中健康对照者、癌前病变患者(包括乙肝患者和肝硬化患者)
及肝细胞癌患者血浆LINC00221的表达水平比较。
[0027]图2为本专利技术实施例中血浆LINC00221及血浆AFP单独及联合使用在鉴别健康对照者与肝细胞癌患者时的ROC曲线；
[0028]图3为本专利技术实施例中血浆LINC00221及血浆AFP单独及联合使用在鉴别癌前病变患者(包括乙肝患者和肝硬化患者)与肝细胞癌患者时的ROC曲线。
[0029]图4为本专利技术实施例中血浆LINC00221及血浆AFP单独及联合使用在鉴别健康对照者与癌前病变患者(包括乙肝患者和肝硬化患者)时的ROC曲线。
具体实施方式
[0030]通过以下实施例的详细说明并结合附图可以帮助深入理解本专利技术的特点和优点。所提供的实施例仅是对本专利技术方法的说明，而不以任何方式限制本专利技术揭示的其余内容。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物，其特征在于：所述的标志物为LINC00221。2.权利要求1所述的肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物在制备用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒中的应用。3.根据权利要求2所述的肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物在肝细胞癌辅助诊断试剂盒中的应用，其特征在于：与健康对照者相比，所述标志物LINC00221的表达水平升高，提示患者患有肝细胞癌。4.权利要求1所述的肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物与AFP联用在制备用于肝细胞癌辅助诊断的试剂盒中的应用。5.一种引物，其特征在于：所述的引物用于检测权利要求1所述的肝细胞癌辅助诊断血液分子标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂建成，冯艳林，欧卡，朱心雨，刘雪芳，伯古，梁纯子，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：