一种肾透明细胞癌SCNN1引物、诊断试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供的用于快速诊断肾透明细胞癌的SCNN1引物包括内参引物对为GAPDH，具有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的SCNN1A基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的SCNN1B基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的SCNN1G基因的mRNA序列正向引物和反向引物，以人的GAPDH为内参对照，具有SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列的正向引物和反向引物。还制备了相应的试剂盒。该试剂盒含有以下试剂：组织裂解液Trizol、SYBRGreen Master Mix反应液、逆转录反应液、阴性对照和阳性对照。本发明专利技术能消除临床样本检测的假阴性和假阳性，且安全、可靠、准确性高，适合临床推广。广。广。

【技术实现步骤摘要】
一种肾透明细胞癌SCNN1引物、诊断试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属生物
，具体涉及一种肾透明细胞癌SCNN1引物、诊断试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]肾细胞癌是泌尿系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一，起源于肾小管细胞，其中肾透明细胞癌(clear cell nuclear cell carcinoma，ccRCC)占85％，在泌尿系恶性肿瘤居第2位。随着肿瘤检测手段与治疗方法的进步，肾透明细胞癌患者的存活率得到显著提高，但总体生存期以及无进展生存期仍然较低。肾透明细胞癌是一种发展相对较慢的肿瘤，其早期症状常缺乏特异性，很多肾透明细胞癌发现时已属中晚期，且超过1/3的病人在诊断时已经发生了转移。因此对于肾透明细胞癌的治疗还是应注重早期发现早期诊断和早期治疗。此外，肾透明细胞癌对化疗和放疗均不敏感，手术切除是唯一治愈的方法，临床上常选用免疫治疗和靶向药物治疗作为术后的辅助治疗，然而，近30％的患者术后肿瘤复发。因此，如果能够通过有效的早期诊断肾透明细胞癌或者判断患者预后，预测肿瘤复发，可降低复发转移率，延长患者的生存期。而筛选出可靠的诊断或预测肾透明细胞癌的分子标志物是需要迫切解决的问题，对于诊断肾透明细胞癌、降低复发转移率，延长患者的生存时间有重要的临床意义。
[0003]SCNN1家族，包括SCNN1A,SCNN1B,SCNN1G，分别编码上皮细胞钠离子通道(EnaC)的α、β和γ亚基，在阳离子转运中发挥重要作用。ENaC主要存在于肾、肺、结肠等上皮细胞表面，负责将Na+转运至细胞。ENaC在许多肿瘤的发生发展中起着重要的作用，研究发现胶质瘤中， SCNN1家族调节迁移和细胞周期进展；另有研究表明，SCNN1B与胃癌患者、非小细胞肺癌患者不良的疾病特异性和生存率显著相关。
[0004]现如今，RT
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PCR技术常被用于肿瘤检测，敏感性比IHC提高10
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100倍，在基因表达水平分析和定量检测等方面得到广泛应用。实时荧光定量RT
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PCR是在实时RT
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PCR基础上发展起来的一项新技术，其探针特异地同目的模板结合，与其他RT
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PCR技术相比，实时RT
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PCR 对mRNA的检测和定量能提供更多的信息，耗时更少，灵敏性、特异性、准确性都大大提高。
[0005]目前尚无SCNN1家族在肾透明细胞癌中相关的研究报道，SCNN1家族在肾透明细胞癌发生发展中的分子机制仍不清楚。并且目前还未见SCNN1家族在制备肾透明细胞癌诊断或预测肾透明细胞癌患者预后的应用的研究报道。

技术实现思路

[0006]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种能为肾透明细胞癌的早期诊断和预后治疗提供重要辅助指标的一种肾透明细胞癌SCNN1引物、诊断试剂盒及其应用，具体方案如下：
[0007]用于快速诊断肾透明细胞癌的SCNN1引物，包括内参引物对为GAPDH，具有SEQ ID NO:1 和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的SCNN1A基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有
SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的SCNN1B基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有 SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的SCNN1G基因的mRNA序列正向引物和反向引物，以人的GAPDH为内参对照，具有SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列的正向引物和反向引物。
[0008]一种肾透明细胞癌SCNN1快速诊断试剂盒，所述试剂盒含有内参引物对为GAPDH，具有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的SCNN1A基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的SCNN1B基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的SCNN1G基因的mRNA序列正向引物和反向引物，以人的GAPDH为内参对照，具有SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列的正向引物和反向引物。
[0009]进一步地，该试剂盒含有以下试剂：组织裂解液Trizol、SYBRGreen Master Mix反应液、逆转录反应液、阴性对照和阳性对照。
[0010]进一步地，所述逆转录反应液包括Oligo(dT)引物、无RNA酶水、逆转录预混液、RNA酶抑制剂和DNA聚合酶。
[0011]进一步地，所述阴性对照为不含有SCNN1mRNA的RNA样本，阳性对照为含有SCNN1mRNA 的RNA样品。
[0012]所述的SCNN1引物在PCR扩增中的应用。
[0013]进一步地，所述PCR扩增中的反应条件：95℃10min，1个循环；95℃15s，60℃1min，共40个循环。
[0014]所述用于快速诊断肾透明细胞癌SCNN1引物在制备快速诊断试剂盒中的应用。
[0015]本专利技术的优点
[0016](1)以本专利技术标记物为基础，构建肾透明细胞癌的诊断模型，该诊断模型特异性好，检测基因在肾透明细胞癌中几乎不表达，与正常组织有极为显著的对比，不仅能使用目前市场上存在的所有类型的荧光定量仪器，更重要的是能快速对肾透明细胞癌诊断的新标志基因SCNN1A、 SCNN1B、SCNN1G进行定量检测，为肾透明细胞癌的早期诊断和预后治疗的提供重要辅助指标。 (2)能对肿瘤的良性和恶性进行初步鉴别，AUC能达到0.997，诊断效果快速且良好。
[0017](3)本专利技术的检测方法改进现有荧光定量RT—PCR技术，并建立了一套完整的质量控制方法，使之具有灵敏、稳定、操作简便等的特点，消除了SCNN1A、SCNN1B、SCNN1G基因mRNA 荧光定量RT
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PCR检测的假阳性和假阴性，使之成为一种肾透明细胞癌临床诊断的实用性诊断方法。
[0018](4)耗时短，仅需要4小时左右完成测试，需要检测的样品量极少。
[0019](5)该检测方法建立了质控品，为严格对PCR检测进行定量控制提供了必要条件，在量化处理肾透明细胞癌临床诊断结果方面，为消除SCNN1A/B/G基因荧光定量RT
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PCR检测的假阳性和假阴性打下了基础。
[0020](6)该检测方法建立了一套完整的质量控制方法，重点在消除临床样本检测的假阴性和假阳性，这一套完整的质量控制方法是互相联系，不可分割的，具有可靠性和安全性，不仅对于肾透明细胞癌临床样本检测的准确性有较大很高，而具有广泛的实用性，能在临床上推广，对于其它mRNA荧光定量RT
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PCR检测的实用性，临床上推广也具有重要参考价
值。
附图说明
[0021]图1为根据TCGA数据库中522例肾透明细胞癌患者癌组织及癌旁正常组织中SCNN1A、 SCNN1B、SCN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于快速诊断肾透明细胞癌的SCNN1引物，其特征于，包括内参引物对为GAPDH，具有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的SCNN1A基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的SCNN1B基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的SCNN1G基因的mRNA序列正向引物和反向引物，以人的GAPDH为内参对照，具有SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列的正向引物和反向引物。2.一种肾透明细胞癌SCNN1快速诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有内参引物对为GAPDH，具有SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的SCNN1A基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的SCNN1B基因的mRNA序列正向引物和反向引物、具有SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的SCNN1G基因的mRNA序列正向引...

【专利技术属性】
技术研发人员：王怡方，郑倩，周晓慧，周晓莹，肖雪，张哲，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：