本发明专利技术提供了伊立替康个体化用药基因的指导方法及试剂盒，具体的本发明专利技术考虑不同癌症患者用药疗效的差异性，筛选出与伊立替康个体化用药相关基因的SNP位点的组合，利用核酸质谱仪对伊立替康相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过本发明专利技术的方法检出成功率高、技术重现性好、性价比高，可实现单个小样本多基因的检测，满足小样本最大化使用；本发明专利技术的方法具有高准确性、高灵敏性的技术优势，检测结果稳定，提高了检测阳性率。检测阳性率。
【技术实现步骤摘要】
伊立替康个体化用药基因的指导方法及试剂盒
[0001]本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种用于伊立替康个体化用药基因的指导方法及试剂盒。
技术介绍
[0002]单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNPs)是一种遗传标记，是指基因组水平上由于单核苷酸的变异，而引起的DNA序列的多态性。在人群中的发生频率大于1％，包括单碱基的转换、颠倒以及单碱基的插入或缺失等形式表现，是一种新的遗传标志，可以为疾病的预测、诊断、治疗以及新型药物的研制提供可靠的有效的科学根据。
[0003]SNP发生在编码区，能够影响蛋白功能，从而影响人体健康或药物代谢，主要表现在疾病易感性方面的个体差异、同一药物治疗疗效的个体差异、同一药物的不良反应的个体差异。药物遗传学或药物基因组学方法对于解决药物疗效的个体差异非常重要，尤其是在精密医学时代。
[0004]伊立替康是喜树碱的一种半合成衍生物，属于第一个特异性拓扑异构酶Ⅰ抑制剂。伊立替康是近年来治疗多种恶性肿瘤的新型化疗药物，主要用于晚期转移性大肠癌的一线治疗，也可用于其他肿瘤的辅助治疗，如：非小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌、宫颈癌和卵巢癌等。研究表明，约20％
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30％患者在接受已伊立替康为基础的联合化疗时发生3
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4级迟发性腹泻和中性粒细胞减少，导致患者生活质量下降而延迟治疗，严重者导致死亡。美国FDA已经在伊立替康药品说明书上加入警示，在使用伊立替康前需检测患者是否携带有UGT1A1突变。UGT1A1*6可以作为生物标志物，预测伊立替康的重症不良反应，若该位点突变则严重的中性粒细胞减少症在伊立替康高、中、低剂量组均会发生。因此，研究伊立替康在临床用药中用药指导方法以及确认其使用安全性具有重要的意义。目前临床指导伊立替康用药的检测方法和指标比较单一，因此亟需建立一种高灵敏，经济，简单的分子技术筛查方法，预测毒性，推荐合理起始剂量，有效缩短剂量调整周期，规避严重不良反应发生风险。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种伊立替康个体化用药基因的指导方法及试剂盒。
[0006]本专利技术的第一方面，提供了一种伊立替康个体化用药基因的指导试剂盒，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs6072249、rs9351963、rs2032582、rs1128503、rs1045642、rs1801133、rs4148323、rs2306283、rs1051266、rs562和rs425215。
[0007]在另一优选例中，所述试剂盒基于多重PCR飞行时间质谱检测伊立替康个体化用药基因SNP基因突变位点。
[0008]在另一优选例中，所述试剂盒还包括单碱基延伸引物组。
[0009]在另一优选例中，所述PCR扩增引物对组中，特异性扩增rs6072249的引物对如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示。
NO.32所示。
[0030]在另一优选例中，所述单碱基延伸引物组中，针对rs425215的延伸引物如SEQ ID NO.33所示。
[0031]在另一优选例中，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内含有所述PCR扩增引物对组。
[0032]在另一优选例中，所述试剂盒包括第二容器，所述第二容器内含有所述单碱基延伸引物组。
[0033]在另一优选例中，所述试剂盒包括第三容器，所述第三容器内含有PCR预混液，所述PCR预混液主要包括热启动Taq酶、dNTPs、MgCl2、PCR缓冲液。
[0034]在另一优选例中，所述试剂盒包括第四容器，所述第四容器内含有虾碱性磷酸酶(SAP Enzyme)。
[0035]在另一优选例中，所述试剂盒包括第五容器，所述第五容器内含有SAP缓冲液。
[0036]在另一优选例中，所述试剂盒包括第六容器，所述第六容器内含有延伸酶(iPLEX Enzyme)。
[0037]在另一优选例中，所述试剂盒包括第七容器，所述第七容器内含ddNTPs。
[0038]在另一优选例中，所述试剂盒包括第八容器，所述第八容器内含延伸反应缓冲液。
[0039]在另一优选例中，所述试剂盒还包括纯水。
[0040]本专利技术的第二方面，提供了一种基于多重PCR飞行时间质谱检测伊立替康个体化用药基因SNP基因突变位点的方法，包括以下步骤：
[0041](1)以待测样品外周血基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得扩增产物；
[0042](2)应用虾碱式磷酸酶对步骤(1)的扩增产物进行SAP处理；
[0043](3)使用延伸引物对步骤(2)纯化后的产物进行单碱基延伸反应，得延伸产物；
[0044](4)脱盐树脂纯化延伸产物；
[0045](5)质谱平台检测分析，判断是否存在基因变异。
[0046]在另一优选例中，所述步骤(1)中，PCR扩增过程中，特异性扩增选自下组的SNP位点：rs6072249、rs9351963、rs2032582、rs1128503、rs1045642、rs1801133、rs4148323、rs2306283、rs1051266、rs562、rs425215。
[0047]在另一优选例中，所述步骤(1)中，PCR扩增过程中，使用所述扩增引物对组进行PCR扩增。
[0048]在另一优选例中，所述步骤(3)中，使用所述单碱基延伸引物组进行单碱基延伸反应。
[0049]本专利技术的第三方面，提供了PCR扩增引物对组的用途，用于制备检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测伊立替康个体化用药基因SNP基因突变位点；
[0050]所述引物对组包括序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.22所示的引物。
[0051]本专利技术的第四方面，提供了单碱基延伸引物组的用途，用于制备检测试剂盒，所述检测试剂盒用于检测伊立替康个体化用药基因SNP基因突变位点；
[0052]所述单碱基延伸引物组包括序列如SEQ ID NO.23至SEQ ID NO.33所示的延伸引物。
[0053]应理解，在本专利技术范围内，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体
描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
[0054]本专利技术提供了一种伊立替康个体化用药基因的指导方法及试剂盒，本专利技术通过对比不同癌症患者用药疗效的差异性，筛选出与伊立替康个体化用药相关基因的11个SNP位点，进而能够利用核酸质谱仪对伊立替康相关的遗传学标识进行广泛(高通量检测位点、高通量检测样本)筛查和检验。通过多轮筛选，获得了能够对该11个SNP位点进行高效多重扩增，且适合MassARRAY核酸质谱检测的多重PCR扩增引物对，并筛选获得了适合的延伸引物，因而实现了对该11个SNP位点的高准确性、本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种伊立替康个体化用药基因的指导试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR扩增引物对组，所述PCR扩增引物对组包括特异性扩增选自下组的SNP位点的引物对：rs6072249、rs9351963、rs2032582、rs1128503、rs1045642、rs1801133、rs4148323、rs2306283、rs1051266、rs562和rs425215。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括单碱基延伸引物组。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增引物对组中：特异性扩增rs6072249的引物对如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示；特异性扩增rs9351963的引物对如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示；特异性扩增rs2032582的引物对如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示；特异性扩增rs1128503的引物对如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示；特异性扩增rs1045642的引物对如SEQ ID NO.9至SEQ ID NO.10所示；特异性扩增rs1801133的引物对如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.12所示；特异性扩增rs4148323的引物对如SEQ ID NO.13至SEQ ID NO.14所示；特异性扩增rs2306283的引物对如SEQ ID NO.15至SEQ ID NO.16所示；特异性扩增rs1051266的引物对如SEQ ID NO.17至SEQ ID NO.18所示；特异性扩增rs562的引物对如SEQ ID NO.19至SEQ ID NO.20所示；和/或特异性扩增rs425215的引物对如SEQ ID NO.21至SEQ ID NO.22所示。4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸引物组中：针对rs6072249的延伸引物如SEQ ID NO.23所示；针对rs9351963的延伸引物如SEQ ID NO.24所示；针对rs2032582的延伸引物如SEQ ID NO.25所示；针对rs1128503的延伸引物如SEQ ID NO.26所示；针对rs1045642的延伸引物如SEQ ID NO.27所示...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，张静，袁昕昕，林金飞，
申请(专利权)人：广东南芯医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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