ncRNA在诊断肝癌中的应用、肝癌诊断试剂、试剂盒以及诊断系统技术方案

本发明专利技术公开了ncRNA在诊断肝癌中的应用、肝癌诊断试剂、试剂盒以及诊断系统，属于生物医学领域。本发明专利技术公开了检测ncRNA表达水平的试剂在制备肝癌诊断试剂盒中的应用，该ncRNA包括SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
ncRNA在诊断肝癌中的应用、肝癌诊断试剂、试剂盒以及诊断系统


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体而言，涉及ncRNA在诊断肝癌中的应用、肝癌诊断试剂、试剂盒以及诊断系统。

技术介绍

[0002]肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种在全球范围内常见的实体恶性肿瘤，属于原发性肝癌的其中一种，约占所有原发性肝癌病例的90％。2016年中国新发肝细胞肝癌占全球55％，发病率位于全球第四，死亡率位居第三。2018年全球肝癌发病841080例，占同期癌症发病总数的4.7％；全球因肝癌死亡人数为781631例，占同期癌症死亡总数的8.2％，位居所有癌种第四。在中国，HCC发病率高于0.02％以上，而欧美大部分地区的发病率只有0.005％左右。
[0003]肝炎病毒感染是肝癌发生的最主要原因。临床调查资料显示，病毒性肝炎约有10％会发展成慢性活动性肝炎，而慢性活动性肝炎中有50％可发展成肝硬化，肝硬化发生肝癌的几率约9.9
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16.6％。其中以乙型肝炎为主，其次为丙型肝炎。因此，慢性病毒性肝炎和肝硬化是肝癌的常见诱因，其中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染为主要危险因素，二者联合所致肝癌占全部肝癌发病数的80％以上。据统计，2019年我国乙肝病毒携带者约9000万人，其中约2800万人为慢性乙肝患者。麦肯锡公司报告提到，每10万个人中，急性与慢性乙型病毒性肝炎的患病人数，中国有963例，美国有35例，中国是美国的28倍。
[0004]由于症状不明显，病毒性肝炎在人群中快速传播，也为肝癌留下巨大的前期病变空间。肝癌病程约两年半，由于早期症状不明显，两年内一般难以发现，导致许多患者在发现时已处于中晚期、错过最佳治疗期，同时也导致肝癌死亡率居高不下。据统计，中国肝癌早期病人占所有肝癌病患的23.2％，而中晚期占76.8％。
[0005]肝癌缺乏有效的早期诊断，同时，由于肝细胞肝癌对放疗和化疗均不敏感，预后总体较差。据统计，肝细胞肝癌患者的5年生存率约为7％，而肿瘤尺寸<2cm且采用外科手术切除的患者的5年生存率可达86％。在目前治疗尚无更好策略之际，对高危人群的有效筛选和肝癌的早期诊断，是提高生存率、降低病死率的有效途径。而对小肝癌的早期发现和诊断，生物标志物最具优势。
[0006]由于肝癌含血管十分丰富，在许多情况下均没有必要进行病理或穿刺活检。目前，α
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甲胎蛋白(AFP)是临床上用于诊断肝癌的血清标志物。然而，约30％～40％的确诊肝癌患者的AFP没有明显升高，AFP的肝癌诊断灵敏度仅为20％
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65％，而在约20～50％的慢性肝炎肝硬化患者中，AFP也会升高。导致AFP的诊断特异性偏低。因此，发现早期诊断肝癌的新的分子标志物以及开发灵敏的检测方法具有重要意义。中国卫健委医政管理局发布的2019年版原发性肝癌诊疗规范已提出，对血清AFP阴性人群，可借助AFP
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L3、PIVKAⅡ和血浆miRNA进行早期诊断。
[0007]非编码核糖核酸(non
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coding RNA，简称ncRNA)，是各种不编码蛋白质的RNA分子
的通称。非编码RNA除了在转录和转录后水平上发挥作用外，还在基因表达的表观遗传学调控中发挥重要作用。最近的研究显示，真核生物基因组中约90％的基因是转录基因，这些转录基因中只有1
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2％编码蛋白质；大多数转录为ncRNA。
[0008]ncRNA种类较多，包括tRNA、rRNA、snoRNA、snRNA、microRNA、piRNAs与lncRNA等等。U11 snRNA(small nuclear ribonucleic acid)就是体内存在的一个ncRNA，位于小剪切体蛋白复合物中。小剪切体蛋白复合物利用U11来识别信使RNA的5'剪切位点，这表明U11是真核生物RNA剪切系统的重要组成部分。microRNA(miRNA)是在真核生物中广泛存在的一类内源性的非编码RNA，长度约为22bp。Andrew Z.Fire和Craig C.Mello因发现这类小RNA的作用机制RNAi而获得2006年诺贝尔生理学或医学奖。miRNA广泛参与各种生命过程的调控，包括增殖、分化、凋亡及细胞周期调控等等。miRNA与人体的多种癌症发生有着极为密切的关系，其可作为一种新的致癌基因或抑癌基因，参与癌症的发生、发展、侵袭和转移。
[0009]miRNA不仅丰富而稳定地存在于血液等体液中，其表达水平与疾病、癌症密切相关，这些miRNA通常被称为循环miRNA。在疾病状态下，miRNA在体液中的表达谱与在组织细胞中一样，会发生特征性的改变，提示miRNA作为一种新的无创伤性生物标志物的可能性。自2008年以来已有大量学术文献报道血液miRNA可作为潜在的肿瘤标志物。胰腺癌综合诊治指南(2018版)中国抗癌协会胰腺癌专业委员会提到miRNA作为潜在biomarker。microRNA的优势主要有以下几点。(一)无创：采取血液样本进行检测，对病人的损伤较小，能够克服创伤性检测带来的风险。(二)稳定：在临床血清、血浆样本中，miRNA以抵抗RNA酶的RNP形式稳定存在。(三)早期：循环microRNA在肿瘤早期阶段(比如癌前状态、极低肿瘤负荷的时候)就已经表现出异常，因此可以用于肿瘤高危人群的预警或者肿瘤早期检测。(四)简便：研究蛋白型的诊断标志物需要制备抗体，而miRNA的研究方法相对简便，发现
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验证
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应用的周期相对更短。
[0010]多个研究小组早在2011年即发现hsa
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miR
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122是一个潜在的肝癌诊断标志物。另外，已有多项研究成果指出，hsa
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21能够用来区分对照与肝癌患者。在其中一项研究中，由hsa
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21、hsa
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miR
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122与has
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miR
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223三者组成的小panel表现出一定的肝癌诊断性能。
[0011]现已发现多个miRNA在对照与肝癌患者间存在含量差异，具有肝癌诊断潜力，其中包括has
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miR
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192，has
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miR
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221、has
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150，has
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26a，has
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27a等。另外，has
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1228被发现在对照与若干癌症组间含量稳定，可以作为一个候选内参，用来对多种癌症检测结果进行归一化处理。
[0012]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0013]本专利技术的目的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测ncRNA表达水平的试剂在制备肝癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述ncRNA包括：hsa
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miR
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122、U11、hsa
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miR
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26a、hsa
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miR
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27a、hsa
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miR
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192以及hsa
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miR
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223。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为检测所述ncRNA的CT值的试剂；优选的，所述试剂包括如下核酸组合1
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6中的至少一者：核酸组合1：其用于检测hsa
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miR
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122，其包括SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14以及SEQ ID NO.20所示的核酸；核酸组合2：其用于检测U11，其包括，SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.15以及SEQ ID NO.21所示的核酸；核酸组合3：其用于检测hsa
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miR
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26a，其包括SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.16以及SEQ ID NO.22所示的核酸；核酸组合4：其用于检测hsa
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miR
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27a，其包括SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.17以及SEQ ID NO.23所示的核酸；核酸组合5：其用于检测hsa
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miR
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192，其包括SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.18以及SEQ ID NO.24所示的核酸；以及核酸组合6：其用于检测hsa
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miR
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223，其包括SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.19以及SEQ ID NO.25所示的核酸。3.一种肝癌的诊断试剂或试剂盒，其特征在于，其包括：检测ncRNA表达水平的检测试剂；所述ncRNA包括：hsa
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122、U11、hsa
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miR
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26a、hsa
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miR
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27a、hsa
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miR
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192以及hsa
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miR
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22。4.根据权利要求3所述的肝癌的诊断试剂或试剂盒，其特征在于，所述检测试剂为检测所述ncRNA的CT值的试剂；优选的，所述检测试剂包括如下核酸组合1
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6中的至少一者：核酸组合1：其用于检测hsa
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miR
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122，其包括SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14以及SEQ ID NO.20所示的核酸；核酸组合2：其用于检测U11，其包括，SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.15以及SEQ ID NO.21所示的核酸；核酸组合3：其用于检测hsa
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miR
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26a，其包括SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.16以及SEQ ID NO.22所示的核酸；核酸组合4：其用于检测hsa
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miR
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27a，其包括SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.17以及SEQ ID NO.23所示的核酸；核酸组合5：其用于检测hsa
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192，其包括SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.18以及SEQ ID NO.24所示的核酸；以及核酸组合6：其用于检测hsa
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miR
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223，其包括SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.19以及SEQ ID NO.25所示的核酸。5.一种检测ncRNA表达水平的方法，其特征在于，所述ncRNA包括：hsa
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miR
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122、U11、hsa
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m...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾超，杜巧芳，王秋丽，张喆，郭林，
申请(专利权)人：武汉友芝友医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：