一种PBMC细胞永生化的培养方法技术

技术编号:40977355 阅读:27 留言:0更新日期:2024-04-18 21:24
本发明专利技术公开了一种PBMC细胞永生化的培养方法,所述培养方法为:配制包括EBV、PBMC和永生化培养基的EBV感染体系,在培养过程中至少一次部分更换培养基直至永生化成功,其中所述培养基以RPMI‑1640为基础培养基,补加10‑30%FBS、1%青链霉素混合液、15mM HEPES、1%GlutaMAX、1‑50ng/mL EGF、1‑50ng/mL bFGF、0.1‑5μg/mL氢化可的松、1‑5μg/mL PHA和0.1‑2μg/mL cyclosporin A。本发明专利技术的培养方法可显著缩短B淋巴细胞永生化时间并提高永生化成功概率,且适用于冻存全血,为永生化细胞的持续获得与传播提供了新的技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞永生化,具体涉及一种pbmc细胞永生化的培养方法。


技术介绍

1、人外周血单核细胞(pbmc)是免疫学中最常用的一种生物样本,其中包含约70%t淋巴细胞、15%b淋巴细胞、5%单核细胞、1%树突状细胞和10%自然杀伤细胞。永生化人外周血样本中的b淋巴细胞,从而保留人类遗传资源,可以为出生缺陷及其它罕见疾病的遗传流行病学、临床遗传学、分子生物学等研究提供永久性实验材料。

2、细胞永生化的方式众多,其中eb病毒(epstein-barr virus,ebv)转化外周血b淋巴细胞因具有取样方便、操作简单、基因型保存良好等优点而最为常用。eb病毒可通过结合b淋巴细胞表面的eb病毒受体感染b淋巴细胞,使其永生化,成为一种能连续分裂、无限增殖的类淋巴母细胞系(b lymphoblastoid cell lines,lcls),且每一株永生化细胞系均保存原血液提供者个体的完整基因组及其生化与分子生物学特性。目前,该方法仍存在永生化成功率较低以及培养时间长达1个月以上等问题。


技术实现思路>

1、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种PBMC细胞永生化的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,步骤S2更换永生化培养基的同时补加EBV。

3.根据权利要求1或2所述的培养方法,其特征在于,步骤S2更换永生化培养基的同时补加FBS。

4.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,步骤S1包括以下步骤:

5.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于,所述PBMC来源于新鲜血液时,步骤S2包括以下步骤:

6.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于,所述PBMC来源于冻存血液时,步骤S2包括以下步骤:

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【技术特征摘要】

1.一种pbmc细胞永生化的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,步骤s2更换永生化培养基的同时补加ebv。

3.根据权利要求1或2所述的培养方法,其特征在于,步骤s2更换永生化培养基的同时补加fbs。

4.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,步骤s1包括以下步骤:

5.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于,所述pbmc来源于新鲜血液时,步骤s2包括以下步骤:

6.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:郭静黄学朋魏亮王晓明佘靖陈念嘉
申请(专利权)人:武汉友芝友医疗科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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