本发明专利技术属于肿瘤学领域，具体涉及氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA circMAPK14编码产生的多肽在制备抗癌药物中的应用；该多肽由circMAPK14编码翻译产生，能够在体内外环境下抑制结直肠癌的增殖和转移能力，可有效抑制结直肠癌细胞的恶性生物学行为，可应用于结直肠癌的靶向治疗药物中。
【技术实现步骤摘要】
环状RNAcircMAPK14编码的多肽在制备抗癌药物中的应用
本专利技术属于肿瘤学领域，具体涉及环状RNAcircMAPK14编码产生的多肽在制备抗癌药物中的应用。
技术介绍
在世界范围内，结直肠癌的发病率位居所有恶性肿瘤第三位，致死率则高居第二位。2018年全球有超过1800，000结直肠癌新发病例和881，000死亡病例。不同国家和地区情况不同，且患病个体之间存在明显的异质性。在我国，近年来,随着人们生活水平的提高和生活方式及饮食结构的改变,结直肠癌的发病率及死亡率呈上升趋势。根据中国癌症中心发布的最新2015年中国癌症数据报告显示，结直肠癌的发病率和致死率在所有恶性肿瘤当中均位列第五位。在中国，每年结直肠癌发病人数超过37万人，且仍以4.2％的速度快速增长，每年死亡人数接近20万，年增速超过1.2％。尽管随着早期诊断及治疗等有效手段技术的不断提高，但其仍成为严重威胁人类生命的消化道恶性肿瘤。结直肠癌是一种高度复杂的疾病,其发生是包括肠上皮细胞增殖、分化、凋亡等机制发生紊乱的一个复杂多级过程，其发病机制尚未明确。因此探究结直肠癌的发病机制以及寻找一种有效的早期诊断及靶向治疗手段，从而提高患者的总体生存率，对结直肠癌的治疗及预防具有重要的意义。环状RNA(circRNA)作为一种新发现的内源性非编码RNA。它们最初被认为是丰度低，生物学功能有限的异常剪接的副产物。近些年来，随着高通量测序技术的不断发展，研究人员已经在病毒，真菌，植物和动物中鉴定出数千种circRNA。环状RNA通常来源于前体mRNA的反向剪接，其3'剪接供体序列与下游5'剪接受体序列相连接。环状RNA具有共价闭合的连续环状结构，没有5'帽或3'聚腺苷酸尾巴，并且它们对RNase的消化不敏感。因此，环状RNA比线性RNA更保守和稳定。根据其形成机理，环状RNA可以分为外显子circRNA，内含子circRNA和外显子-内含子circRNA)三类。大量研究表明，环状RNA参与了多种恶性肿瘤细胞的各种生理和病理过程，包括增殖、凋亡、侵袭和转移。circAGFG1可以充当miR-195-5p的miRNA海绵，以减轻miR-195-5p对于其靶基因CCNE1的抑制作用，从而在体内促进三阴性乳腺癌细胞的增殖，迁移和侵袭。CircPVT1充当miR-497的ceRNA，间接调节Bcl-2在非小细胞肺癌细胞中的表达，从而促进了非小细胞肺癌的发展。重要的是，环状RNA在唾液，血液和外泌体中稳定表达，这使其成为诊断，预后和诊断有希望的生物标志物。目前的研究表明，环状RNA主要通过ceRNA机制发挥miRNA海绵的作用以及通过RNA结合蛋白(RBP)来调节基因的表达。近期的研究表明一些含有翻译起始元件的环状RNA可以翻译为功能性蛋白质和多肽，从而发挥生物学作用。目前结直肠癌临床药物治疗主要依靠奥沙利铂、5-氟尿嘧啶等化疗药物，虽然化疗方案可以延长结直肠癌患者的生存期，但总体中位生存期仍然较短。随着分子生物学的发展，肿瘤的靶向治疗逐步成为结直肠癌治疗的研究热点。目前结直肠癌靶向药研究主要集中在抗血管生成药(如贝伐单抗)、抗表皮生长因子受体药(如西妥昔单抗)、酪氨酸激酶抑制剂(如瑞格非尼)，环状RNAcircMAPK14在肿瘤中尚未有研究报道。
技术实现思路
针对上述问题，本申请提供一种由环状RNAcircMAPK14编码产生的多肽，并用以制备抑制结直肠癌细胞增殖及转移药物，为抗结直肠癌药物研发提供进行的靶向。具体而言，本申请是通过如下技术方案实现的：一种环状RNAcircMAPK14编码的多肽在制备抗癌药物中的应用，所述多肽由175个氨基酸组成，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。该抗癌药物还可包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物制剂(如粉末剂、颗粒剂、片剂等)；其可通过制药领域中已知的任何方法制备。药物制剂可适于通过任何适当的途径施用，例如通过经口、经直肠、经鼻、局部(包括经颊、舌下或透皮)、经阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或真皮内注射或输注)途径。进一步而言，上述抗癌药物利优选抑制结直肠癌细胞增殖及转移的药物，特别是结直肠癌靶向药。本申请首次发现环状RNAcircMAPK14编码产生的175个氨基酸多肽，在体内及体内外环境中可以有效抑制结直肠癌的增殖和转移，具有应用于制备结直肠癌靶向药物的前景。附图说明图1环状RNAcircMAPK14在结直肠癌组织和细胞中低表达结果示意图；其中，A为测序以及生物信息学分析结果示意图；筛选出circMAPK14在结直肠癌组织中低表达并具备翻译潜能；B为qRT-PCR验证circMAPK14在72例结直肠癌组织中表达下调结果示意图；C为qRT-PCR验证circMAPK14在结直肠癌细胞系中表达下调结果示意图。图2为circMAPK14的成环验证及亚细胞定位结果示意图，验证circMAPK14是由4号外显子和10号外显子反向剪接形成。图3为sanger测序验证circMAPK14的剪接序列结果示意图。图4为琼脂糖凝胶电泳验证circMAPK14的成环性结果示意图。图5为RnaseR消化实验验证circMAPK14的稳定性结果示意图。图6为荧光原位杂交实验结果示意图；验证circMAPK14主要定位在细胞质中。图7为核质分离PCR结果示意图；验证circMAPK14主要表达在细胞质中。图8为体外环境下环状RNAcircMAPK14集落形成实验，验证circMAPK14能够抑制结直肠癌细胞的增殖；图9为体外环境下环状RNAcircMAPK14的Transwell实验，验证circMAPK14能够抑制结直肠癌细胞的侵袭迁移。图10circMAPK14产生的多肽质谱检测结果示意图，验证环状RNAcircMAPK14能够编码产生175个氨基酸的多肽。图11为结直肠癌细胞系中验证结果示意图。图12为4对结直肠癌组织中验证结果示意图。图13为circMAPK14编码潜能的示意图。图14为circMAPK14编码产生的多肽的氨基酸序列位于MAPK14抗体的氨基酸识别区域示意图。图15为集落形成实验结果示意图，验证circMAPK14是通过编码产生的175个氨基酸的多肽从而发挥抑制结直肠癌细胞的增殖能力。图16为Transwell实验检测结果示意图，验证circMAPK14是通过编码产生的175个氨基酸的多肽从而发挥抑制结直肠癌细胞的侵袭迁移能力。图17为裸鼠皮下成瘤实验检测结果，该体内验证circMAPK14是通过编码产生多肽从而抑制结直肠癌细胞的进展。具体实施方式下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。应理解，这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.环状RNA circMAPK14编码的多肽在制备抗癌药物中的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n
【技术特征摘要】
1.环状RNAcircMAPK14编码的多肽在制备抗癌药物中的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.如权利要求1所述的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙跃明，汪陆，周嘉晖，唐俊伟，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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