本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了用于抑制细胞对炎性因子刺激的应答的生物制剂，所述生物制剂包括PRD肽段和/或TAD肽段，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明专利技术通过分子生物学分析方法，找到了PRD肽段是YAP1蛋白中抑制炎性刺激应答的正向调控区域，TAD肽段是YAP1蛋白中抑制炎性刺激应答的负向调控区域；两者均可以抑制TNF‑α、IL‑1β、LPS的信号通路，该发现为PRD肽段和/或TAD肽段可用于由于细胞因子过量产生导致的疾病中，从而为免疫治疗提供了新的途径。
【技术实现步骤摘要】
用于抑制细胞对炎性因子刺激的应答的生物制剂
本专利技术涉及生物医药
，更具体地，涉及用于抑制细胞对炎性因子刺激的应答的生物制剂。
技术介绍
人体细胞在受到微生物感染时，一些基因的转录增加，从而翻译出有助于清除病原体的蛋白。这些基因中，有些基因的产物为细胞因子或趋化因子，它们对于对抗病原体至关重要。来自革兰阴性菌的脂多糖LPS是目前已知可引起上述基因表达上调的最强刺激，被上调的基因包括TNFα和IL-1β，而它们又可以再诱导其他细胞因子和趋化因子的产生，因此TNF-α和IL-1β本身又可以加重感染导致的炎症。然而，有些基因的过渡激活会损伤人体。败血症我们并不陌生，这是一种十分严重、可危及生命的急性全身性感染，它就是由于人体针对病原体感染产生了过多的细胞因子，如IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-18、TNF-α等，这在临床中被称为“细胞因子风暴”。但是细胞因子风暴并不仅限于细菌感染，COVID-19新型冠状病毒肺炎是由于一种冠状病毒的感染，新冠病人的“细胞因子风暴”就与死亡率上升密切相关。在T细胞免疫治疗中细胞因子风暴也可能发生，被称为细胞因子释放综合征。在慢性炎症疾病如类风湿性关节炎(RA)及炎症性肠炎(IBD)等疾病中，这类细胞因子会一直持续产生。肿瘤坏死因子α是一种涉及到系统性炎症的细胞因子，主要由巨噬细胞分泌，其主要功能是调节免疫细胞，作为一种内源性致热源，可以导致发热、引起细胞凋亡，组织肿瘤发生和病毒复制，其功能失调被认为和很多疾病相关，比如阿尔兹海默症，银屑病，癌症，重度抑郁，肠炎等；TNF的受体可以向细胞内传导生存和死亡的信号，对于细胞的繁殖、分化、凋亡以及免疫反应的调控和炎症的诱导等起着重要的作用，因此在许多疾病中，TNF-α已经被称为治疗靶点之一。现有技术关于TNF-α的抑制剂种类较少，因此有必要开发新的以TNF-α为治疗靶点的药物，以满足治疗不同病症的需求。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术缺乏抑制炎性刺激的药物的技术缺陷，在现有技术的理论基础上，首先提供了一种用于抑制细胞对炎性刺激应答的药物。本专利技术的第二个目的是提供PRD肽段和/或TAD肽段在制备抑制细胞对炎性刺激应答的药物方面的应用。本专利技术的第三个目的是提供PRD肽段和/或TAD肽段在制备治疗细胞因子风暴介导进程的疾病的药物的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：一种用于抑制细胞对炎性刺激应答的药物，所述药物包括PRD肽段和/或TAD肽段，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术的研究构思：相关研究表明YAP1(yes关联蛋白1)是转录因子，激活与细胞增殖及抑制凋亡相关的基因的转录，目前对于YAP1的研究主要着重于它可以作为转录因子，已经发现其对于肿瘤坏死因子TNF-α的信号通路有抑制作用，但是具体的抑制机制还不是很明确，本专利技术则在现有研究的基础上发现：在人类的成纤维关节滑膜细胞(FLS)中，YAP1也抑制了TNF-α诱导的基因表达。通过YAP1敲减实验发现：当YAP1蛋白含量下降时，TNF-α诱导的基因表达上调；在其他细胞系，例如上皮细胞HCT-8细胞，人单核细胞系THP-1以及人外周血单核细胞PBMC中，均发现了类似的现象，在此基础上，本专利技术通过YAP1敲除实验，发现YAP1敲除和YAP1敲减所导致的实验结果相似，且YAP1敲除细胞中YAP1蛋白表达水平与未敲除的细胞中表达水平并无明显差异，在后续的实验中，通过克隆分析信使RNA，找到PRD肽段是YAP1蛋白中抑制炎性刺激应答的关键作用区域。虽然YAP1之前被广泛研究，其主要作用被定义为抑制肿瘤坏死因子TNF信号，但是YAP1抑制TNF信号的具体机制仍不完全明确，既有的可能机制也均与本专利技术研究发现的完全不同，在此之前，YAP1主要均作为共转录因子为人所知，尤其是在炎症刺激通路中，YAP1除转录因子之外的作用尚未被揭示。而且YAP1不同亚型的功能一直以来被认为是一样的，本专利技术首次通过实验以及研究数据揭示，YAP1作为非转录因子抑制炎症信号通路，YAP1的不同亚型由于不同区域的片段增减，可能行使完全相反的功能，并且表明了YAP1通过两个区域的肽段实现抑制。因此，若合成PRD和TAD肽，其均可模拟YAP1的功能，抑制炎性因子刺激引起的反应。另外，在找到PRD肽段的基础上，本专利技术通过过表达YAP1以及对YAP1蛋白不同亚型的结构以及功能验证分析，发现YAP1蛋白上的反式激活区段(TAD)也可以抑制TNF-α、IL-1β、LPS的信号通路。优选地，上述药物中所述细胞包括成纤维细胞、单核细胞、上皮细胞；具体地，所述成纤维细胞为成纤维关节滑膜细胞FLS，所述单核细胞为人单核细胞系THP-1或者人外周血单核细胞PBMC，所述上皮细胞为HCT-8。优选地，所述炎性刺激包括TNF-α刺激、IL-1β刺激和/或LPS刺激。优选地，所述药物能够抑制炎性刺激诱导的基因表达；所述基因包括IL-6、IL-8、CXCL10、IL-32、CCL2、CCL20、COX-2。更优选地，所述PRD肽段或/和TAD肽段均能够抑制TNF-α刺激、IL-1β刺激或者LPS刺激诱导的基因IL-8的表达。因此，本专利技术还提供PRD肽段和/或TAD肽段在制备抑制细胞对炎性刺激应答的药物方面的应用，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。优选地，所述细胞包括成纤维细胞、单核细胞、上皮细胞；所述炎性刺激包括TNF-α刺激、IL-1β刺激或者LPS刺激。优选地，所述药物能够抑制炎性刺激诱导的基因表达；所述基因包括IL-6、IL-8、CXCL10、IL-32、CCL2、CCL20、COX-2。更优选地，所述PRD肽段或/和TAD肽段均能够抑制TNF-α刺激、IL-1β刺激或者LPS刺激诱导的基因IL-8的表达。本领域技术人员知道，TNF-α刺激、IL-1β刺激或者LPS刺激会再诱导体内其他细胞因子和趋化因子的产生，这些细胞因子和趋化因子的而过渡激活导致“细胞因子风暴”，从而会损伤人体，由于本专利技术的能够抑制炎性刺激诱导的基因表达，因此也可以用于治疗细胞因子风暴介导进程的疾病。因此，本专利技术还提供PRD肽段和/或TAD肽段在制备治疗细胞因子风暴介导进程的疾病的药物的应用，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。优选地，所述细胞因子风暴介导进程的疾病包括免疫性疾病、细菌或病毒感染、肿瘤免疫治疗引起的细胞因子释放综合征。例如，在制备有关自身免疫疾病、在肿瘤免疫治疗和COVID-19中的细胞因子释放综合征的药物中的应用。更优选地，所述疾病包括败血症、新型冠状病毒肺炎、炎症性肠病、类风湿性关节炎。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于抑制细胞对炎性刺激应答的药物，其特征在于，所述药物包括PRD肽段和/或TAD肽段，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于抑制细胞对炎性刺激应答的药物，其特征在于，所述药物包括PRD肽段和/或TAD肽段，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。
2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述细胞包括成纤维细胞、单核细胞、上皮细胞。
3.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述炎性刺激包括TNF-α刺激、IL-1β刺激和/或LPS刺激。
4.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物能够抑制炎性刺激诱导的基因表达；所述基因包括IL-6、IL-8、CXCL10、IL-32、CCL2、CCL20、COX-2。
5.PRD肽段和/或TAD肽段在制备抑制细胞对炎性刺激应答的药物方面的应用，其特征在于，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述PRD肽段的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。
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【专利技术属性】
技术研发人员：李钟大，杨丰源，沈丽亚，范登霞，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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