一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法，适用于工业化生产。首先对A40926发酵液进行脱酰化处理，经大孔碱性吸附上样后酸性解析；大孔解析合并液通过疏水的聚合物微球层析，大极性杂质优先被洗脱，结构差异杂质最后被洗脱，组分与杂质分离度好，保留组分的同时有效清除杂质、色素等，并通过收集、合并对A40926的各组分含量及组分间的比例进行有效控制，聚合物微球层析合并液通过浓缩、沉淀、干燥，获得有效组分(组分A0、A1、B0、B1、B2)HPLC纯度高于95％、含量高于85％的A40926产品，极大的满足了达巴万星对关键中间体A40926的质量要求。

【技术实现步骤摘要】
一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法
本专利技术属于生物药物分离
，具体涉及达巴万星关键中间体多组分A40926的制备方法。
技术介绍
达巴万星(Dalbavancin)，也称作道古霉素，是一种新型第二代半合成糖肽类抗生素，为A40926的衍生物，达巴万星最先由美国VicuronPharmaceuticals公司开发并进入临床实验，后来此公司被辉瑞公司收购，于2014年5月23日获得FDA批准在美国上市的多组分抗生素。达巴万星作用机制与万古霉素和替考拉宁相同，抑制G+菌细胞壁的生物合成，被广泛用作治疗急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(ABSSSI)。体内、外试验表明，达巴万星对于G+菌包括耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡球菌(MSSA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)、链球菌等具有抗菌活性。对耐G+病原菌包括耐青霉素和头孢曲松肺炎链球菌、替考拉宁不敏感CoNS、非vanA型肠球菌具有活性；对G+厌氧菌也具有活性。达巴万星是首个也是唯一一个被批准用于ABSSSI治疗的双剂量方案的静脉注射用抗生素。达巴万星关键中间体A40926是由野野村放线菌ATCC39727发酵生物合成获得的多组分产物，发酵产物包含有效组分A0、A1、B0、B1、B2，前体物质PA、PB及少量的C(C0、C1)、D(D0、D1)组分，也包含其他的杂质(工艺杂质、降解杂质、无机杂质、发酵残留物等)。组分和前体物质的结构式如下：A40926经酯化、酰胺化、水解获得达巴万星，但A40926为多组分的发酵产物，其有效组分A0、A1、B0、B1、B2的结构和性质相似，且各有效组分的含量及组分间比例要求高，同时需要严格控制工艺杂质、降解杂质等的限度，故对高质量多组分A40926的分离带来了很大困难，已成为盐酸达巴万星制备工艺的关键所在。美国专利US8143212、CN107365357A中公开了一种A40926的制备方法，其发酵液脱酰化后进行陶瓷膜过滤，目标产物截留率高，需使用大量的水顶洗，导致后续层析上样体积极大；分离使用的聚酰胺树脂(SC-6)溶胀系数高，柱床填料易发生形变，影响分离效果；聚酰胺树脂上样吸附量低，虽然对色素性杂质清除较好，但对工艺杂质和降解杂质清除弱，上样完成后使用4种pH缓冲溶液洗涤、解析，操作繁琐。中国专利CN110940763A中公开了一种A40926的精分方法，其使用高压层析，填料、设备价格高昂，且使用了乙腈作为层析溶剂，价格高、毒性大，不适用于工业化生产；目前原研上市产品为多组分(A0、A1、B0、B1、B2)的盐酸达巴万星，该专利工艺制备高纯度的A40926单一B0组分对制备达巴万星意义不大。中国专利CN110156876A中公开的A40926制备方法，其发酵液脱酰化后进行陶瓷膜过滤，目标产物截留率高，需使用大量的水顶洗透过，不利于工业化生产；使用了酸沉淀操作，酸沉淀对溶液体系有要求，且酸沉淀样品形态不好、颗粒絮、颗粒小，难过滤，需添加助滤剂；制备的是A40926为单一B0组分产品，作为目前已上市的多组分达巴万星关键中间体并不合适。中国专利CN110183519A中公开的A40926制备方法，发酵液水解后也采用了陶瓷膜过滤，使用了大量的水顶洗透过，目标产物依然有截留；XR910S树脂吸附上样后洗涤、解析操作复杂，且溶剂使用量大；XR3SP吸附上样，上样流出液有样品漏吸，会影响分离效果，使用高浓度的甲醇溶液洗涤、解析，工业化生产对人体伤害大，分离前后未介绍具体杂质的清除情况，A组分作为有效组分也被当做杂质进行清除，而目前已上市的多组分达巴万星对A40926的A、B组分均有严格要求，制备的A40926产品并未说明质量情况，若作为达巴万星关键中间体有待考量。因此急需对A40926的制备工艺进行优化，保留有效组分，严格控制各有效组分的含量及组分间的比例；同时需要降低生产成本，简化工艺，保障产品质量及批间产品质量稳定。
技术实现思路
本专利技术克服了现有技术的不足，提供了一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法，以期望可以简化达巴万星关键中间体A40926的工业化生产方法，获得高质量的A40926。为达到上述目的，本专利技术提供了一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法，它包括以下步骤：步骤一、A40926发酵液经脱酰化、板框过滤，得到脱酰化滤液；步骤二、所述的脱酰化滤液经大孔树脂碱性吸附上样，酸性洗涤、解析，得到大孔解析合并液；步骤三、所述的大孔解析合并液加水稀释，加氯化钠，调pH，过滤后通入聚合物微球填料吸附上样，解析后得到聚合物微球层析合并液；步骤四、所述的聚合物微球层析合并液回调pH，经纳滤浓缩、沉淀、干燥，得到达巴万星关键中间体A40926。所述的达巴万星关键中间体A40926是高质量多组分的A40926，高质量是指有效组分HPLC纯度95％以上、含量85％以上，多组分是指包含有效组分A0、A1、B0、B1、B2。步骤一所述的脱酰化是指向A40926发酵液中加入碱性溶液调节pH值为10.5～11.5，同时控制溶液温度为20～30℃，搅拌2～3h完成脱酰化。所述的碱性溶液是指2～20％氢氧化钠溶液、5～25％氨水和5～15％碳酸钠溶液中的任意一种。优选的，所用的脱酰化碱性溶液为4％氢氧化钠溶液，脱酰化pH为11.0～11.5，脱酰化温度为20～30℃，脱酰化时间为2～3h，脱酰化步骤需要使前体杂质PA、PB脱酰化完全，目标产物(A0、A1、B0、B1、B2)稳定，杂质IsoB0的含量不得超过2.0％。步骤二所述的大孔树脂是HZ-818、XR901CS中的任意一种，树脂粒径为0.3～1.2mm，上样量为15～25g/L。选择的大孔树脂都具有对目标产物吸附选择性高而达到高载样量，树脂粒径使层析阻力小，对设备要求低，树脂价格相对低且耐用，便于产业化放大。步骤二所述的酸性洗涤采用的洗涤剂为浓度0.05～0.5mol/L的硫酸水溶液或者0.1～1mol/L的盐酸水溶液，洗涤3～5BV；步骤二所述的解析采用的解析剂为60～80％乙醇溶液，水相含0.1～1mol/L硫酸或者0.2～2mol/L盐酸，解析2～4BV。采用酸性洗涤，流出液呈酸性，保障目标产物pH转换完全；在用乙醇溶液解析时，水相中加入一定浓度的盐酸或者硫酸，目标产物解析率高，且得到了高效富集，而吸附的色素性杂质、大分子有机杂质解析流出少。步骤三所述的加水稀释是指向大孔解析合并液中加入3～5倍体积的水稀释作为层析上样液，加入所述的氯化钠后所述的层析上样液中氯化钠浓度为0.5～5％，步骤三所述的调pH是指用2～20％氢氧化钠溶液、5～25％氨水或者5～15％碳酸钠溶液调节所述的层析上样液的pH值为8～9。本步骤加入氯化钠的目的是保障高上样量，调节pH的目的是层析对杂质的有效清除。步骤三所述的聚合物微球填料是UniPMM40-500、PS30-300中的任意一种，优选的，聚合物微球填料是UniPMM40-500，填料材质为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：/n步骤一、A40926发酵液经脱酰化、板框过滤，得到脱酰化滤液；/n步骤二、所述的脱酰化滤液经大孔树脂碱性吸附上样，酸性洗涤、解析，得到大孔解析合并液；/n步骤三、所述的大孔解析合并液加水稀释，加氯化钠，调pH，过滤后通入聚合物微球填料吸附上样，解析后得到聚合物微球层析合并液；/n步骤四、所述的聚合物微球层析合并液回调pH，经纳滤浓缩、沉淀、干燥，得到达巴万星关键中间体A40926。/n

【技术特征摘要】
1.一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：
步骤一、A40926发酵液经脱酰化、板框过滤，得到脱酰化滤液；
步骤二、所述的脱酰化滤液经大孔树脂碱性吸附上样，酸性洗涤、解析，得到大孔解析合并液；
步骤三、所述的大孔解析合并液加水稀释，加氯化钠，调pH，过滤后通入聚合物微球填料吸附上样，解析后得到聚合物微球层析合并液；
步骤四、所述的聚合物微球层析合并液回调pH，经纳滤浓缩、沉淀、干燥，得到达巴万星关键中间体A40926。


2.根据权利要求1所述的达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其特征在于步骤一所述的脱酰化是指向A40926发酵液中加入碱性溶液调节pH值为10.5～11.5，同时控制溶液温度为20～30℃，搅拌2～3h完成脱酰化。


3.根据权利要求2所述的达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其特征在于所述的碱性溶液是指2～20％氢氧化钠溶液、5～25％氨水和5～15％碳酸钠溶液中的任意一种。


4.根据权利要求1所述的达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其特征在于步骤二所述的大孔树脂是HZ-818、XR901CS中的任意一种，树脂粒径为0.3～1.2mm，上样量为15～25g/L。


5.根据权利要求1所述的达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其特征在于步骤二所述的酸性洗涤采用的洗涤剂为0.05～0.5mol/L的硫酸水溶液或者0.1～1mol/L的盐酸水溶液，洗涤3～5BV；步骤二所述的解析采用的解析剂为60～80％乙醇溶液，水相含0.1～1mol/L硫酸或者0.2～2mol/L盐酸，解析2～4BV...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱辉，张鹏，曹艳茹，彭云，曹源湘，黄莉，陈静柳，莫洪，庞雪，
申请(专利权)人：成都雅途生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51