替考拉宁的提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种替考拉宁的提纯方法，属于微生物制药技术领域，该提纯方法包括以下步骤：通过强酸、强碱型Q‑F层析填料来对替考拉宁粗品进行层析，层析后使用乙醇和氯化钠溶液作为洗脱液进行两次洗脱，合并两次洗脱的洗脱液依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。本发明专利技术提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的纯化效率。

【技术实现步骤摘要】
替考拉宁的提纯方法
本专利技术属于微生物制药
，具体涉及一种替考拉宁的提纯方法。
技术介绍
替考拉宁，又名太古霉素，是游动放线菌(Actinoplanesteichomyceticus)经发酵、提取后得到的一种万古霉素族糖肽类抗生素，为多个化学结构非常相似的化合物组成的抗生素混合物。替考拉宁对革兰阳性菌如葡萄球菌、链球菌、肠球菌和大多厌氧性阳性菌敏感，临床上主要用于金葡菌及链球菌属等敏感菌所致的严重感染，如心内膜炎、骨髓炎、败血症及呼吸道、泌尿道、皮肤、软组织等的感染。替考拉宁EP9.8标准是替考拉宁最新的最高标准，现有技术通过丙酮除杂，碳脱结晶的方法得到的产品，其各个单组分的纯度已经无法达到替考拉宁EP9.8的标准。而通过凝胶层析、大孔树脂分离等方法进行提纯时，多数只能控制其中部分单组分的纯度，也无法达到替考拉宁EP9.8标准。如申请号为200710107185.6的中国专利技术专利，根据其步骤能够控制A2组比例，但未提及到对其他组分的比例控制。如何得到满足替考拉宁EP9.8标准的替考拉宁成品成为了目前亟待解决的问题。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是：如何通过对提纯方法的改进，在不使用有毒溶剂的前提下制备得到符合替考拉宁EP9.8标准的替考拉宁。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；所述洗脱剂由0.5mol/L的氯化钠溶液和30％的乙醇溶液组成；步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的纯化(提纯)效率。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。本专利技术提供一种替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％的乙醇配制成的30％的乙醇溶液；步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，利用强酸、强碱型Q-F层析填料进行吸附，在于预洗中去除大量杂质，在洗脱中除去剩余一部分未去除的杂质，解吸得到替考拉宁，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化仅需层析、洗脱、过滤浓缩和冻干几个步骤，过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的提纯效率。进一步的，所述强酸、强碱型Q-F层析填料为QFocurose6FF。进一步的，所述步骤3中使用10％的乙醇溶液预洗3bv。进一步的，所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩。进一步的，所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24H，第二阶段为20℃，时间为40H。温度低只对冷冻时间有影响，温度高会导致组分A2-2转变为A3，无法满足替考拉宁EP9.8标准。实施例1：替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至QFocurose6FF的色谱柱中进行层析；步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％的乙醇配制成的30％的乙醇溶液；步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品；所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩；所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24H，第二阶段为20℃，时间为40H。对比例1：对比例1与实施例1的不同在于，使用HZ-S-02为填料进行层析。步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至HZ-S-02层析填料的色谱柱中进行层析；步骤3、层析后使用20％的乙醇溶液预洗5bv，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；所述洗脱剂为50％的乙醇pH10溶液；步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。对比例2：对比例2与实施例1的不同在于，对比例2使用C18为填料进行层析。步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至C18层析填料的色谱柱中进行层析；步骤3、层析后使用20％的乙醇溶液预洗5bv，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；所述洗脱剂为45％的乙醇pH9.0溶液；步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。其中，实施例1和对比例1-2使用的替考拉宁粗品为同一批次产品。对实施例1、对比例1-2，以及一种市售的替考拉宁成品样品进行测定，并与替考拉宁EP9.8标准对比，结果见表1所示。表1从表1中可以看出，对比例1的结果当中A3系和A2-1系及RS2不满足EP9.8的要求，对比例2结果当中Z10和I3不满足要求，而本专利技术提供的方法制备得到的替考拉能成品能够满足替考拉宁EP9.8标准。综上所述，本专利技术提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化仅需层析、洗脱、过滤浓缩和冻干几个步骤，过程简单易本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.替考拉宁的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；/n步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；/n步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；/n所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％乙醇配制成的30％的乙醇溶液；/n步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。/n

【技术特征摘要】
1.替考拉宁的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％乙醇配制成的30％的乙醇溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。


2.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：林东态，徐文灿，刘文锋，何鹏，王为民，
申请(专利权)人：丽珠集团福州福兴医药有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35