一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法技术

本发明专利技术提供一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法，该一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法包括以下步骤：1)用多肽固相法合成化合物1：Boc‑Pyr‑His(Boc)‑Trp(Boc)‑Ser(tBu)‑Tyr(tBu)‑D‑Trp(Boc)‑Leu‑OH；2)用多肽液相法合成化合物2：Arg(pbf)‑Pro‑Gly‑NH

【技术实现步骤摘要】
一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法
本专利技术涉及医药
，特别是涉及一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法。
技术介绍
中文名∶曲普瑞林，英文名∶Triptorelin结构式∶pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2；分子量∶1311.5曲普瑞林临床用于治疗相关性激素病症，包括晚期前列腺癌、子宫内膜异位、中枢性性早熟症等。曲普瑞林是一种促性腺激素释放激素类似物，主要作用于垂体前叶，大剂量应用初期可以引起一过性黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)释放增多，后期则导致垂体敏感性降低，使LH、FSH和性激素分泌减少。醋酸曲普瑞林用于治疗相关性激素病症，包括：晚期前列腺癌、子宫内膜异位、中枢性性早熟症。1974年日本武田化工的FujinoMashiko等人首先专利技术促黄体激素释放激素的十肽酰胺类似物的合成工艺。并在日本、德国、美国等国家申请专利，专利号分别为∶JP1974002742、DE246005、US008209(液相法)。上述方法均存在着一定的缺陷，每一轮脱帽须用三氟醋酸，故接肽收率低，导致生产成本较高；三废污染多，并使用三氟醋酸进行纯化，污染环境，纯化收率一般在25％以下。因此目前的方法限制了醋酸曲普瑞林的大规模生产和使用。现有技术中，申请号为200710044419.7公开了一种固相多肽合成曲普瑞林的制备方法，包括如下步骤：以.RinkAmideAM树脂或.RinkAmidMBHA树脂起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂，其间依次脱去Fmoe-保护基团，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得粗品，粗品经C18(或C8)柱分离纯化，冻干后，制得曲普瑞林精品。现有技术中还公开了申请号为201310014882.2的涉及一种优良的曲普瑞林及其固相合成制备方法，其制法包括步骤∶1)、向树脂中加入Fmoc-Gly-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱进行偶联反应，形成Fmoc-Gly-树脂；2)、加入脱帽试剂进行反应；接着加入保护氮基酸Fmoc-Pro-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱，进行偶联反应形成Fmoc-Pro-Gly-树脂；3)、循环重复步骤(2)，并在每一循环操作的偶联反应中依次使用曲另外9个氨基酸以替换Fmoc-Pro-OH；4)、向所得十肽树脂中加入切割液进行切肽，使十肽切离树脂，任选地对曲普瑞林进行纯化。该方案选用哌啶为脱帽试剂，为易制毒试剂，价格较高，且不易储存。对于现有的合成方法而言，将上述现有技术进行工业化生产依然存在生产成本高的问题。
技术实现思路
基于此，有必要针对
技术介绍
中存在的问题，提供一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法。本专利技术的技术方案是构造一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法，包括以下步骤：1)用多肽固相法合成化合物1：Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH；2)用多肽液相法合成化合物2：Arg(pbf)-Pro-Gly-NH2；3)在液相中合成化合物3：Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH24)合成曲普瑞林粗品：Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。在其中一个实施例中，步骤1)中，化合物1可以通过固相法从C到N末端的顺序合成，其步骤包括：1)以CTC树脂为固相载体；Boc-Pyr-OH，Fmoc-His(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Leu-OH为氨基酸单体；缩合剂为HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一种；脱帽试剂为哌嗪溶液，溶剂为偶极非质子溶剂，哌嗪溶液的质量浓度为2-5％；从C到N末端依次合成：Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-CTC树脂；2)用三氟乙酸/二氯甲烷溶液切割，浓缩后用水析出，得到化合物1：Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH。在其中一个实施例中，步骤2)中，化合物2可以通过液相法合成：以Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Pro-OH，H-Gly-NH2·HCl为氨基酸单体；缩合剂为HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一种；活化剂为HOSu或HOBt；有机碱主要为DIEA或TEA；依次合成：1)Fmoc-Pro-Gly-NH2；2)H-Pro-Gly-NH2；3)Fmoc-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH2；4)H-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH2。在其中一个实施例中，步骤3)中，化合物3可以通过液相法合成：以化合物1和化合物2为合成片段；缩合剂为HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一种；活化剂为HOSu或HOBt；有机碱主要为DIEA或TEA；合成化合物3：Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH2；化合物1和化合物2的摩尔比为1：1.01～1：1.5，化合物2和缩合剂、活化剂及有机碱的摩尔比＝1：1：1：1。在其中一个实施例中，曲普瑞林粗品纯度可以达到90％以上，可以由化合物3溶于TFA溶液中进行反应得到，反应完成后浓缩，加入醚类试剂析出，过滤即得到曲普瑞林粗品。本专利技术的优点和有益效果如下：用CTC树脂合成片段，结合液相法合成戈那瑞林，CTC树脂合成片段可以方便自动化生产，CTC树脂可以回收重复利用，极大降低了用Rink树脂进行固相合成的成本，Rink树脂的价格要比CTC树脂高很多，并且不能回收再次使用；首次报道哌嗪替代了经典的哌啶作为脱帽试剂，哌啶为易制毒试剂，液体容易变质，难以管理，价格较高；适合大规模工业化生产，没有剧烈的化学反应，降低了生产成本。附图说明图1为本专利技术的化合物1的HPLC图。图2为本专利技术的化合物1去保护基样品的MS图。图3为本专利技术的Fmoc-Pro-Gly-NH2.HCl的HPLC图谱。图4为本专利技术的H-Pro-Gly-NH2的HPLC图谱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)用多肽固相法合成化合物1：/nBoc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH；/n2)用多肽液相法合成化合物2：Arg(pbf)-Pro-Gly-NH

【技术特征摘要】
1.一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用多肽固相法合成化合物1：
Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH；
2)用多肽液相法合成化合物2：Arg(pbf)-Pro-Gly-NH2；
3)在液相中合成化合物3：
Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH2
4)合成曲普瑞林粗品：Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。


2.根据权利要求1所述的一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法，其特征在于：步骤1)中，化合物1可以通过固相法从C到N末端的顺序合成，其步骤包括：
1)以CTC树脂为固相载体；
Boc-Pyr-OH，Fmoc-His(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Leu-OH为氨基酸单体；
缩合剂为HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一种；
脱帽试剂为哌嗪溶液，溶剂为偶极非质子溶剂，哌嗪溶液的质量浓度为2-5％；
从C到N末端依次合成：
Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-CTC树脂；
2)用三氟乙酸/二氯甲烷溶液切割，浓缩后用水析出，得到化合物1：
Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH。


3.根据权利要求1所述的一种多肽固液组合合成曲普瑞林的方法，其特征在于：步骤2)中，化合物2可以通过液相法合成：
以Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Pro-OH，H-Gly-NH2为氨基酸单体；
缩合剂为HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一种；
活化剂为HOSu或HOBt；
有机碱主要为DIEA或TEA；
依次合成：
1)Fmoc-Pro-Gly-NH2；
2)H-...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙鹏程，梁振纲，
申请(专利权)人：湖南津安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43