The invention belongs to the field of bioengineering and discloses a breeding method of high rapamycin-producing streptomyces. Aiming at the problems of random mutagenesis method, difficult direction control and difficult screening of ideal individuals in the breeding method of high rapamycin-producing Streptomyces in the existing technology, the technical scheme of the invention is: mutagenesis of Streptomyces by ambient temperature and pressure plasma (ARTP)/ultraviolet radiation compound, and mutagenesis of streptomyces. The strains with high rapamycin production level were screened by mutation breeding of rapamycin resistance. Methods ARTP/UV mutagenesis and streptomycin resistance screening were involved, including screening of initial strains, strain mutagenesis and shaking flask culture. The excellent strains obtained by the combination of mutagenesis and resistance screening showed good genetic stability.
【技术实现步骤摘要】
一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法
本专利技术属于生物工程领域,特别是涉及一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法。
技术介绍
雷帕霉素作为新型大环内酯类的抗排斥药物,是目前世界上最新的强效免疫抑制剂,临床上用于器官移植的抗排斥反应。另外,雷帕霉素也可用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫性疾病的药物,并具有发展为基因治疗药和抗肿瘤药物的潜力,从而具有广阔的应用前景。但是,国内外文献报道的吸水链霉菌发酵生产的水平都较低,大多在200mg/L左右。雷帕霉素是由吸水链霉菌发酵过程中产生的。为了提高雷帕霉素产量,国内外学者进行了大量研究工作,主要包括菌种选育、发酵方法优化两方面。据文献报道,多年来,通过运用多种不同的诱变方法进行了雷帕霉素生产菌株的选育,获得了一些高产菌株。但诱变方法仍以传统的物理诱变和化学诱变居多,存在诱变方法随机、方向不易掌握、理想个体筛选困难等局限性。近年来,出现了一些新的手段,如钴离子、氮离子注入,其是集物理诱变和化学诱变为一体的综合诱变方法,可使遗传物质在基因水平上发生改变或缺失,显著提高生物的变异率,但这类设备昂贵,不易操作,从而使其受到了限制。
技术实现思路
针对现有技术中高产雷帕霉素链霉菌的选育方法中存在的诱变方法随机、方向不易掌握、理想个体筛选困难的问题,本专利技术提供一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法,其目的在于:采用常温常压等离子体诱变(ARTP)和紫外复合诱变,链霉素抗性筛选的选育方式,获得具有遗传稳定性的高产雷帕霉素菌株。本专利技术采用的技术方案如下:一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法,包括如下步骤:[1]起始菌株的筛选:选择高产雷帕 ...
【技术保护点】
1.一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法,其特征在于,包括如下步骤:[1]起始菌株的筛选:选择高产雷帕霉素水平高的菌株作为诱变出发菌株;[2]菌种诱变:依次通过常温常压等离子体诱变、紫外诱变和复合诱变对步骤[1]得到的诱变出发菌株进行诱变;所述复合诱变为先进行紫外诱变,然后进行常温常压等离子体诱变;[3]结合链霉素抗性对经过步骤[2]诱变的菌株进行抗性筛选,通过摇瓶验证复筛,筛选出高产菌株,制备冷冻管,进行菌种保藏。
【技术特征摘要】
1.一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法,其特征在于,包括如下步骤:[1]起始菌株的筛选:选择高产雷帕霉素水平高的菌株作为诱变出发菌株;[2]菌种诱变:依次通过常温常压等离子体诱变、紫外诱变和复合诱变对步骤[1]得到的诱变出发菌株进行诱变;所述复合诱变为先进行紫外诱变,然后进行常温常压等离子体诱变;[3]结合链霉素抗性对经过步骤[2]诱变的菌株进行抗性筛选,通过摇瓶验证复筛,筛选出高产菌株,制备冷冻管,进行菌种保藏。2.按照权利要求1所述的一种高产雷帕霉素链霉菌的选育方法,其特征在于,在经过步骤[3]的处理后,还进行步骤[4]:进行传代验证,将筛选出的高产菌株进行连续斜面传代,连续传代5次,摇瓶验证发酵产雷帕霉素的能力。3.按照权利要求1所述的一种高产雷帕霉素链霉菌的...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱辉,曹艳茹,莫洪,张翠英,邓涛,庞雪,韩晓彤,石蕊,
申请(专利权)人:成都雅途生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:四川,51
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