人sDR5-Fc重组融合蛋白在制备防治肝脏缺血再灌注损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人sDR5-Fc重组融合蛋白在制备防治肝脏缺血再灌注损伤药物中的应用，其中编码sDR5-Fc重组融合蛋白的核苷酸序列具有：a)SEQ ID NO：1所示的碱基序列；或b)与SEQ ID NO：1的互补配对序列；或c)与a或b的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与a或b的核苷酸序列不同的序列；或sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，且有一个或多个氨基酸被取代，但生物活性不改变的sDR5-Fc重组融合蛋白；或sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、或SEQ ID NO：6所示。6所示。6所示。

【技术实现步骤摘要】
型跨膜蛋白，其中1～55位氨基酸是信号肽，84～179位氨基酸是含有2个富含半胱氨酸的重复功能区的链状结合区，184～206位氨基酸为跨膜区，胞内区含有死亡结构域。
[0009]可溶性DR5(soluble DR5,sDR5)为DR5不含跨膜区域的可溶性形式，因缺乏跨膜区域不能在细胞膜上表达而被分泌至细胞外。sDR5虽然保持与TRAIL配体相结合的活性，但不能向细胞内传导凋亡信号，可阻断TRAIL-DR5介导的细胞凋亡反应。因此，作为与TRAIL亲和力最高的受体，DR5具有可以作为肝脏缺血再灌注损伤治疗靶点的潜力。
[0010]sDR5-Fc融合蛋白通过与TRAIL分子结合，中和TRAIL可以阻断内源性TRAIL与DR5的结合，从而起到延迟肝细胞凋亡的作用，延长治疗时间窗。并且sDR5是人体自身蛋白，具有毒性小、无免疫原性的优点，因此sDR5-Fc融合蛋白药物作为一个全新的靶点治疗肝脏缺血再灌注损伤，作用机理明确新颖，作用效果独特，弥补了目前药物的短板，疗效显著，安全性高，极具开发潜力。
[0011]本专利技术涉及一种人可溶性死亡受体5(soluble death receptor 5，简称sDR5-Fc抗体融合蛋白(sDR5-Fc)的药用用途，尤其是人sDR5-Fc抗体融合蛋白作为肝脏缺血再灌注损伤治疗药物的应用。本专利技术经实验证实，所述的人sDR5-Fc抗体融合蛋白在小鼠、大鼠肝脏缺血再灌注损伤中用药后损伤减弱，改善肝脏病理损伤。本专利技术作为治疗肝脏缺血再灌注损伤的一种新型候选药物，作用特异且迅速，疗效显著，安全性高，极具开发潜力。

技术实现思路

[0012]为了解决上述
技术介绍
中所提出的问题，本专利技术的目的在于提供一种人sDR5-Fc重组融合蛋白及其编码核苷酸序列的应用，该sDR5-Fc重组融合蛋白生物活性高，稳定性好。
[0013]具体技术方案如下：
[0014]人sDR5-Fc重组融合蛋白在制备防治肝脏缺血再灌注损伤和联合用药的药物中的应用，其中编码sDR5-Fc重组融合蛋白的核苷酸序列具有：a)SEQ ID NO：1所示的碱基序列；或b)与SEQ ID NO：1的互补配对序列；或c)与a或b的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与a或b的核苷酸序列不同的序列；
[0015]或sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，且有一个或多个氨基酸被取代，但生物活性不改变的sDR5-Fc重组融合蛋白；
[0016]或sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、或SEQ ID NO：6所示。
[0017]其中遗传密码的简并性：是指编码同一氨基酸的几个三联体遗传密码中一二位碱基大多是相同的只是第三位不同例如ACU,ACC,ACA,ACG都是苏氨酸的密码子，UGU,UGC,UGA,UGG都是缬氨酸的密码子，这样如果密码子第三位碱基出现了点突变并不影响所翻译出的氨基酸种类。
[0018]进一步地，联合用药包括甘草酸。
[0019]进一步地，编码sDR5-Fc重组融合蛋白的核苷酸序列为如SEQ ID NO：1所示的碱基序列；所述sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0020]人sDR5-Fc抗体融合蛋白的蛋白序列、序列修饰及相关生物工程产品在制备治疗肝脏缺血再灌注损伤药物中的应用。
[0021]上述人sDR5-Fc重组融合蛋白在制备防治肝脏缺血再灌注损伤药物中的应用，所述药物的给药途径包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射和透皮给药等任何能达到治疗效果的途径，给药剂量取决于疾病的严重程度、患者年龄、体重、给药方式和给药频率。
[0022]本专利技术的另一目的在于提供一种防治肝脏缺血再灌注损伤的药物组合物。
[0023]具体技术方案如下：
[0024]一种防治肝脏缺血再灌注损伤的药物组合物，其活性成分包括有以下至少之一的sDR5-Fc重组融合蛋白，所述sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，且有一个或多个氨基酸被取代，但生物活性不改变的sDR5-Fc重组融合蛋白；或氨基酸序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、或SEQ ID NO：6所示。
[0025]在其中一些实施例中，所述药物组合物的剂型为注射剂。
[0026]本专利技术的有益效果：(1)人sDR5-Fc重组融合蛋白作用机理明确新颖，作用效果独特，疗效显著，安全性高。(2)肝脏缺血再灌注损伤是一个常见的临床问题，它是在包括肝叶切除术和肝移植术在内的外科手术过程中引起肝脏损伤的重要原因，它可导致10％的早期肝脏移植后肝功能衰竭，45％急慢性组织排异现象和器官损伤，极大阻碍了肝脏手术的应用和救治效果。长久以来，肝IR损伤缺乏有效的疗法和用药目标。本专利技术人sDR5-Fc抗体融合蛋白能阻断胞凋亡的核心信号通路，TRAIL-DR5凋亡信号通路广泛存在于多种因素导致的肝脏缺血再灌注损伤，因此人sDR5-Fc抗体融合蛋白在治疗肝脏缺血再灌注损伤中具有广泛性。同时，人sDR5-Fc抗体融合蛋白来源于人体自身的蛋白，代谢产物为氨基酸，因此安全性较其它治疗药物更优，且能够安全的与其它治疗药物联用，增强疗效，促进康复。因此，人sDR5-Fc抗体融合蛋白在肝脏缺血再灌注损伤领域具有广阔的应用前景。(3)本专利技术所述sDR5-Fc蛋白具有在多种原因导致的肝脏缺血再灌注中治疗作用，治疗后损伤减轻。
附图说明
[0027]图1为sDR5-Fc的基因琼脂糖凝胶电泳图；
[0028]图2为DR5-Fc重组融合蛋白(ZJ501-5)Dot Blot检测图；
[0029]图3为8％SDS-PAGE非还原电泳图；
[0030]图4为ZJ501-5纯化后的SEC-HPLC分析图；
[0031]图5为ZJ501-5经还原后的TIC图；
[0032]图6为ZJ501-5的数据用Biopharmalynx软件处理后的质谱图；
[0033]图7为商品化Trail杀伤活性检测标准曲线；
[0034]图8为商品化DR5-Fc融合蛋白生物检测标准曲线；
[0035]图9为ZJ501-5生物活性检测标准曲线；
[0036]图10为实施例4中人sDR5-Fc重组融合蛋白阻断TRAIL诱导的肝细胞凋亡结果示意图；其中：A为不同浓度TRAIL诱导HepG2细胞凋亡结果；B为不同浓度人sDR5-Fc重组融合蛋白阻断TRAIL诱导HepG2细胞凋亡结果；C为TRAIL诱导的凋亡的HepG2细胞形态图；D为人sDR5-Fc重组融合蛋白阻断TRAIL诱导凋亡的HepG2细胞形态图；
[0037]图11为实施例5中人sDR5-Fc抗体融合蛋白治疗大鼠肝脏缺血再灌注损伤血清ALT、AST检测结果图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人sDR5-Fc重组融合蛋白在制备防治肝脏缺血再灌注损伤和联合用药的药物中的应用，其中编码sDR5-Fc重组融合蛋白的核苷酸序列具有：a)SEQ ID NO：1所示的碱基序列；或b)与SEQ ID NO：1的互补配对序列；或c)与a或b的核苷酸序列编码相同序列的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与a或b的核苷酸序列不同的序列；或sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，且有一个或多个氨基酸被取代，但生物活性不改变的sDR5-Fc重组融合蛋白；或sDR5-Fc重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、或SEQ ID NO：6所示。2.根据权利要求1所述的应用，所述联合用药...

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，沈恩允，张青梅，陈倩，胡永强，
申请(专利权)人：深圳市中科艾深医药有限公司，
类型：发明
国别省市：