GOLM1在制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了高尔基蛋白73(GOLM1)基因在防治急性化学性肝损伤的应用。本发明专利技术首次确定了GOLM1基因和急性化学性肝损伤的关系，GOLM1基因过表达可以减轻脂多糖和D

【技术实现步骤摘要】
GOLM1在制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物治疗技术和基因工程药物
，特别涉及一种GOLM1在制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物中的应用。

技术介绍

[0002]临床由药物引起的肝损伤发病率在逐年增加，肝脏是人体新陈代谢的主要场所,也是药物代谢的重要器官。由于它具有清除病原微生物和毒素的能力，因此在宿主的防御反应中起着关键作用。但是，肝脏也是此类攻击的主要受害者，导致宿主免疫细胞的活化，从而引发炎症。急性肝损伤是一种严重的综合症，可导致高死亡率。它可能是由许多危险因素引起的，例如病毒，毒素，药物和酒精，临床表现的特点是急性肝坏死，脑水肿和临床多器官功能衰竭。急性肝损伤发展的潜在分子机制包括许多方面，包括炎症激活的失控，凋亡诱导的失调和活性氧(ROS)的过量产生。
[0003]GOLM1(高尔基蛋白73)是一种分子量为73kDa的Ⅱ型跨膜糖蛋白。GOLM1通常由多种组织的上皮细胞表达，正常肝脏中的GOLM1信号主要来自胆管上皮细胞的组成性表达，肝细胞中无表达或仅有少量表达。目前发现其与病毒感染相关，并具有影响肝癌细胞侵袭和迁移的能力，GP73通过激活肝癌细胞中的转化生长因子-β/Smads信号来促进上皮细胞转化，并且GP73在癌细胞中被特异性上调，以便在轻度缺氧的微环境中提供足够的氧气并促进转移，但是GP73与急性化学性肝损伤的关系尚未有文献记载。

技术实现思路

[0004]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种GOLM1在制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物中的应用，第一目的是确定GOLM1表达与急性化学性肝损伤的关系，提供GOLM1在制备预防、缓解或/和治疗急性化学性肝损伤药物中的应用；第二目的是提供GOLM1基因在作为筛选预防、缓解和/或治疗急性化学性肝损伤药物的药物靶标中的应用；第三目的是提供GOLM1作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解和/或治疗急性化学性肝损伤的药物和/或生物学制剂中的应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
[0006]GOLM1可应用在制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物中，所述急性化学性肝损伤包括四氯化碳、D-氨基半乳糖联合脂多糖、二甲基亚硝胺、α-萘基异硫氰酸酯或硫代乙酰胺等诱导的肝细胞坏死和肝功能障碍。
[0007]所述药物包括有效量的GOLM1重组蛋白，以及药学上可接受的辅料。
[0008]所述药物的剂型为注射给药剂型、注射给药剂型、皮肤给药剂型、皮肤给药剂型或腔道给药剂型。
[0009]GOLM1基因可作为筛选预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤药物的药物靶标，所述药物包括小分子化合物和大分子化合物。
[0010]GOLM1还可作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物或生物学制剂，所述药物或生物学制剂包括GOLM1的激活剂。
[0011]与现有技术相比，本专利技术首次确定了GOLM1基因和急性化学性肝损伤的关系，GOLM1过表达具有强大的抗凋亡作用，可以减轻脂多糖和D-氨基半乳糖诱导的急性化学性肝损伤，这表明GOLM1基因在急性化学性肝损伤中的功能，主要体现在GOLM1具有改善/预防/治疗肝损伤的作用。针对GOLM1基因的上述功能，GOLM1可作为药物，用于预防、缓解和/或治疗急性化学性肝损伤；GOLM1可作为药物靶点，用于筛选预防、缓解和/或治疗急性化学性肝损伤的药物；GOLM1也可以作为基因治疗中的靶基因，用于设计和制备预防、缓解和/或治疗急性化学性肝损伤和/或生物学制剂。
附图说明
[0012]图1为急性化学性肝损伤对小鼠肝脏GOLM1 mRNA表达水平的影响。
[0013]图2为急性化学性肝损伤对小鼠肝脏GOLM1蛋白表达水平的影响。
[0014]图3为实验各组小鼠肝脏IHC染色图片。
[0015]图4为GOLM1过表达对急性化学性肝损伤小鼠存活率的影响。
[0016]图5为实验各组小鼠肝脏大体图片。
[0017]图6为实验各组小鼠肝脏HE染色图片。
[0018]图7为GOLM1过表达对急性化学性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平的影响。
[0019]图8为GOLM1过表达对急性化学性肝损伤小鼠肝脏炎症因子mRNA表达水平的影响。
[0020]图9为GOLM1过表达对急性化学性肝损伤小鼠血清炎症因子水平的影响。
[0021]图10为GOLM1过表达对急性化学性肝损伤小鼠肝细胞凋亡相关分子蛋白表达水平的影响。
[0022]图11为实验各组小鼠肝脏TUNEL染色图片。
[0023]图12为体外GOLM1的沉默对肝细胞凋亡相关分子蛋白表达水平的影响。
具体实施方式
[0024]下面结合附图和实施例详细说明本专利技术的实施方式。
[0025]本实施例的实验内容包括：
[0026]一、急性化学性肝损伤小鼠肝脏GOLM1 mRNA表达水平下降，并具有时间依赖性。
[0027]八周龄雄性C57BL/6小鼠腹腔注射D-GaIN(700mg/kg)和LPS(10μg/kg)。在LPS/D-GalN处理后0、3、6小时处死小鼠，将小鼠仰卧位固定于解剖板上，75％消毒酒精表面消毒手术剪下肝脏组织，取部分组织于4％多聚甲醛中固定，剩余组织保存于-80℃。切取冻存-80℃冰箱的组织(30-40mg)，研磨后加入800μL Trizol试剂，充分裂解，收集至1.5mL无酶EP管中。加入160μL三氯甲烷，充分混匀，室温静置3min后，4℃12000g离心15min。吸取200μL上层水相至新的1.5mL无酶EP管中，加入200μL异丙醇，用移液枪混匀，室温静置10min，4℃12000g离心10min，管底可见白色沉淀。弃上清，向沉淀中加入800μL 75％乙醇，用移液枪吹吸几次。4℃7500g离心5min，弃上清，将沉淀置室温风干，加入适量DEPC水，将沉淀溶解并混匀，立即使用或-80℃保存。根据制造商的反转录试剂说明书合成cDNA，并进行荧光定量PCR
检测。
[0028]结果如附图1所示，在LPS/D-GalN处理后，野生型C57BL/6小鼠肝脏GOLM1 mRNA表达以时间依赖性方式降低。
[0029]二、急性化学性肝损伤小鼠肝脏GOLM1蛋白表达水平下降，并具有时间依赖性。
[0030]八周龄雄性C57BL/6小鼠腹腔注射D-GaIN(700mg/kg)和LPS(10μg/kg)。在LPS/D-GalN处理后0、3、6小时处死小鼠，将小鼠仰卧位固定于解剖板上，75％消毒酒精表面消毒手术剪下肝脏组织，取部分组织于4％多聚甲醛中固定，剩余组织保存于-80℃。切取冻存-80℃冰箱的组织，加入适量配制好的裂解液(含RIPA与cocktail的体积比为9:1)，冰上裂解15min,30-50W超声破碎3min，4℃12000rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.GOLM1在制备预防、缓解或治疗急性化学性肝损伤的药物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述急性化学性肝损伤包括四氯化碳、D-氨基半乳糖联合脂多糖、二甲基亚硝胺、α-萘基异硫氰酸酯或硫代乙酰胺诱导的肝细胞坏死和肝功能障碍。3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物包括有效量的GOLM1重组蛋白，以及药学上可接受的辅料。4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射给药剂型、注射给...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈婷瑶，柯梦云，周长林，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：