防御素DLP4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，具体涉及防御素DLP4在治疗仔猪渗出性皮炎中的应用。本发明专利技术中发现防御素DLP4对多重耐药猪葡萄球菌具有高效的体外杀菌活性，且表现出迅速高效、不易反弹的杀菌特点。针对感染了猪葡萄球菌的仔猪渗出性皮炎，防御素DLP4能够显著缓解皮炎症状，促进皮肤恢复，调节炎性因子，降低脏器荷菌量，保护脏器免受器质性损伤，从而达到治疗渗出性皮炎的目的。出性皮炎的目的。

【技术实现步骤摘要】
activities of insect defensins-DLP2 and DLP4 against multidrug-resistant Staphylococcus aureus.Scientific Reports 2017,7(1):12124)。
[0005]猪葡萄球菌属于革兰氏阳性球状菌，根据其是否含有毒素基因分为毒力型和非毒力型，毒力型根据含有的毒素基因的不同，又分为ExhA、ExhB、ExhC、ExhD、ShetA及ShetB型，一般条件下，猪葡萄球菌为皮肤正常菌群，只有在宿主免疫力低下，或者有伤口存在时才容易致病(Olivry T,Linder KE:Dermatoses affecting desmosomes in animals:a mechanistic review of acantholytic blistering skin diseases.Veterinary Dermatology 2009,20(5-6):313-326)。猪葡萄球菌是仔猪渗出性皮炎的主要病原菌，其中毒素被认为是其致病性的主要因素，感染幼龄仔猪死亡率高，成年猪形成“僵猪”，生长缓慢，给养殖业带来巨大经济损失(Fudaba Y,etc.:Staphylococcus hyicus exfoliative toxins selectively digest porcine desmoglein 1.Microbial Pathogenesis2005,39(5-6):171-176；Foster AP:Staphylococcal skin disease in livestock.Veterinary Dermatology 2012,23(4):342-e363)。抗生素是治疗和预防动物疾病的主要手段，但长期大规模的不合理使用，造成抗生素耐药性日益严重，尤其对于养猪业，长期投入抗生素产品用于预防治疗各种细菌感染和进促生长，造成抗生素药物残留及多重耐药菌的出现，对人类的食品安全和身体健康造成严重危害，寻找新型抗菌药物以缓解抗生素耐药性压力，防治猪葡萄球菌感染迫在眉睫。目前尚未有防御素DLP4对多重耐药猪葡萄球菌体外抗菌活性及对其感染引起仔猪渗出性皮炎治疗效果的相关报道。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术对猪葡萄球菌的抑菌方法进行了探究，偶然发现防御素DLP4对猪葡萄球菌具有很好的抑菌效果。
[0007]基于上述发现，本专利技术首先提供防御素DLP4在制备预防或治疗仔猪渗出性皮炎的药物中的应用，所述仔猪渗出性皮炎的致病菌包括猪葡萄球菌。
[0008]此外，在试验中还发现，防御素DLP4对具有多重耐药性的猪葡萄球菌也具有很好的抑菌效果。
[0009]本专利技术还发现，在使用防御素DLP4治疗仔猪渗出性皮炎时，至少具有以下效果：
[0010](1)抑制猪葡萄球菌的生长；
[0011](2)增强仔猪的免疫功能；
[0012](3)保护仔猪的脏器免受损伤。
[0013]因此，在治疗仔猪渗出性皮炎时，若施用目的包括以上至少一种时，均可以使用防御素DLP4。
[0014]本专利技术进一步提供一种预防或治疗仔猪渗出性皮炎的药物，所述药物的活性成分中含有防御素DLP4。
[0015]作为优选，所述活性成分中还含有用于治疗仔猪渗出性皮炎的抗生素。
[0016]作为优选，所述抗生素选自头孢曲松钠、青霉素、阿莫西林、氧氟沙星中的一种或多种。
[0017]其中，DLP4与头孢曲松钠、青霉素、阿莫西林联合使用时均具有协同作用，与氧氟沙星联合使用时表现为相加作用。
[0018]本专利技术中的“防御素DLP4”的氨基酸序列(SEQ ID No.1)为：ATCDLLSPFKVGHAACAAHCIARGKRGGWCDKRAVCNCRK。其可通过重组毕赤酵母进行高效表达，包含40个氨基酸残基，分子量为4269Da，等电点为9.38，净电荷为6。
[0019]本专利技术中的“猪葡萄球菌”指可引起仔猪渗出性皮炎的猪葡萄球菌，至少包括猪葡萄球菌NCTC10350(源于英国国家菌种保藏中心)和猪葡萄球菌437-2(由天津畜牧兽医研究所从渗出性皮炎仔猪中分离)。
[0020]本专利技术的有益效果在于：
[0021]本专利技术中发现防御素DLP4对多重耐药猪葡萄球菌具有高效的体外杀菌活性，且表现出迅速高效、不易反弹的杀菌特点。将防御素DLP4与抗生素头孢曲松钠、阿莫西林、青霉素和氧氟沙星联合用药时，均表现为协同或者相加作用，无拮抗作用。此外，针对感染了猪葡萄球菌的仔猪渗出性皮炎，防御素DLP4能够显著缓解皮炎症状，促进皮肤恢复，调节炎性因子，降低脏器荷菌量，保护脏器免受器质性损伤，从而达到治疗渗出性皮炎的目的。
附图说明
[0022]图1是防御素DLP4和抗生素对猪葡萄球菌437-2杀菌动力曲线的对比图。
[0023]图2是防御素DLP4对猪葡萄球菌感染引起的仔猪渗出性皮炎临床症状的缓解。图中，(A):未处理组仔猪感染猪葡萄球菌437-2 3d后的典型临床症状；(B，C)未处理组仔猪感染猪葡萄球菌437-2 9d后的典型临床症状；(D):比较处理组临床症状；(E):DLP4连续治疗5天后，感染仔猪的临床症状缓解。红色箭头:未治疗仔猪的症状；黄色箭头:治疗组仔猪皮肤愈合症状。
[0024]图3为防御素DLP4对猪葡萄球菌感染引起的仔猪渗出性皮炎免疫因子的影响。
[0025]图4防御素DLP4对猪葡萄球菌感染引起的仔猪渗出性皮炎脏器荷菌量和脏器组织切片的影响；图中，A为组织切片，+表示皮肤损伤程度；B为脏器菌落计数。
具体实施方式
[0026]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0027]在以下实施例中，MH(B)培养基的配方为：MH(A)培养基，琼脂粉。
[0028]以下实施例中所提到的头孢曲松钠、头孢噻呋钠、阿莫西林、青霉素和氧氟沙星购自中国兽医药品监察所。
[0029]以下实施例中涉及到的受试菌株概述于表1：
[0030]表1.受试菌株及来源
[0031][0032]注：NCTC是National Collection of Type Cultures的缩写，指英国国家菌种保藏中心。
[0033]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购
买得到的常规产品。
[0034]实施例1防御素DLP4对多重耐药菌株猪葡萄球菌的MIC测定
[0035]分别挑取猪葡萄球菌NCTC10350，437-2单菌落于MH(B)培养基，37℃过夜活化，1％转接至10mL MH(B)培养基的三角瓶中，培养至对数生长期，用培养基稀释至1
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105CFU/mL备用，同时将防御素DLP4冻干粉和常用抗生素头孢曲松钠、氧氟沙星、阿莫西林、头孢噻呋钠分别溶解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.防御素DLP4在制备预防或治疗仔猪渗出性皮炎的药物中的应用，所述仔猪渗出性皮炎的致病菌包括猪葡萄球菌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述猪葡萄球菌具有多重耐药性。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物的施用目的包括：抑制猪葡萄球菌的生长。4.根据权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的施用目的包括：增强仔猪的免疫功能。5.根据权利要求1～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，马炫炫，滕达，毛若雨，杨娜，郝娅，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：