含有重组蛋白酶抑制剂的组合物及其生产方法和用途技术

本文提供了用于口服施用治疗性蛋白和肽的组合物，该组合物含有分离的重组表达的Bowman

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有重组蛋白酶抑制剂的组合物及其生产方法和用途


[0001]本文提供了用于施用治疗性蛋白的口服组合物，其含有提供改进的持续活性的重组蛋白酶抑制剂。

技术介绍

[0002]基于蛋白/肽的药物通常易于在胃肠道中降解和/或无法高效地以生物活性形式从小肠吸收到血流中。已经开发了基于蛋白的药物如胰岛素、艾塞那肽(exenatide)、其他激素等的口服递送制剂。
[0003]源自大豆(Glycine max)的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制剂容易获得，且认为可安全用于人类食用。这种抑制剂的一个实例称为SBTI(大豆胰蛋白酶抑制剂)，其由抑制胰蛋白酶的KTI(Kunitz胰蛋白酶抑制剂)和抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的BBI(Bowman-Birk抑制剂)组成。SBTI已知有许多商业来源，并且用于分离活性成分的改进方法已描述于例如PCT国际申请公开号WO/2013/114369中，其全部通过引用以其全文并入本文。
[0004]在提供用于口服递送基于肽的治疗剂，特别是用于靶向代谢疾病的治疗剂的平台技术方面，已经取得了巨大的进步和成功，因此似乎很难想象能够对其进行改进以超越当前的技术水平。
[0005]专利技术概述
[0006]令人惊讶的是，现已证明，包含基于肽/蛋白的治疗剂、增强剂/稳定剂、omega-3脂肪酸和已证明在口服制剂中提供可持续功效的蛋白酶抑制剂的稳定口服组合物在所述蛋白酶抑制剂源自重组来源时可以得到改进。
[0007]经化学提取而分别获得纯化KTI和纯化BBI的单独制备物的SBTI，其具有已知量的BBI和KTI，当包含在口服制剂中时具有已知的纯度和活性，且已用于制备有效治疗已知疾病的含有蛋白治疗剂的口服制剂。例如，在PCT国际申请公开号WO/2013/114369(其通过引用以其全文并入本文)中，开发出了改进的SBTI纯化方法，在该方法中，每种产品根据自身的高活性水平的规格而制备，高分子量(MW)-污染物的水平最小化，并且获得了高纯度的工业产率的制备物。
[0008]令人惊讶的是，现已发现，当蛋白酶抑制剂制备自/源自重组异源生产手段时，即便化学纯化蛋白酶和重组表达蛋白酶间具有共同的下游纯化步骤，所得治疗性蛋白/肽在使用重组来源作为初始蛋白酶生产来源时的活性更大且持续更长时间。
[0009]本专利技术提供了一种口服药物组合物，其包含高达100千道尔顿的治疗性肽或治疗性蛋白、二价阳离子螯合剂和分离的重组表达的BBI。
[0010]在一些实施方案中，重组表达的BBI具有与SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少95％同一性的核苷酸序列，或在一些实施方案中，重组表达的BBI具有与SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少97％同一性的核苷酸序列，或在一些实施方案中，重组表达的BBI具有与SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少99％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，重组表达的BBI具有SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列。
[0011]在一些实施方案中，重组表达的BBI在酵母表达系统中表达，该酵母表达系统在一些实施方案中是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统。
[0012]在一些实施方案中，重组表达的BBI在异源表达系统中表达，其中根据用作这种异源表达系统的生物体中的密码子使用，对编码该BBI的核苷酸序列进行优化。
[0013]在一些实施方案中，制剂进一步包含除所述BBI之外的胰蛋白酶抑制剂，在一些实施方案中其是KTI3，在一些实施方案中其被化学纯化，在一些实施方案中其是重组表达的。
[0014]在一些实施方案中，治疗性蛋白可用于治疗患有代谢疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，治疗性肽或治疗性蛋白选自由以下组成的组：胰岛素、流感血凝素、流感神经氨酸酶、胰高血糖素、干扰素γ、干扰素β、干扰素α、生长激素、促红细胞生成素、GLP-1、GLP-1类似物、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肾素、生长激素释放因子、甲状旁腺激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、降钙素、黄体生成素、胰高血糖素、凝血因子、抗凝因子、心钠素(atrial natriuretic factor)、表面活性蛋白A(SP-A)、表面活性蛋白B(SP-B)、表面活性蛋白C(SP-C)、表面活性蛋白D(SP-D)、纤溶酶原激活剂、铃蟾肽(bombesin)、造血生长因子(集落刺激因子，多种)、肿瘤坏死因子(TNF)蛋白、脑啡肽酶、RANTES(调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子)、人巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1-α)、血清白蛋白、苗勒抑制物质(Mullerian-inhibiting substance)、松弛素、小鼠促性腺素释放激素、DNase、抑制素、激活素、血管内皮生长因子(VEGF)、神经营养因子、神经营养蛋白-3、-4、-5或-6(NT-3、NT-4、NT-5或NT-6)、神经生长因子、血小板衍生生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子、转化生长因子(TGF)、胰岛素样生长因子-I和-II(IGF-I和IGF-II)、des(1-3)-IGF-1(脑IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5、IGFBP-6、角质形成细胞生长因子、骨诱导因子、骨形态发生蛋白(BMP)-2、BMP-7、集落刺激因子(CSF)、白细胞介素(IL)、超氧化物歧化酶、衰变加速因子(decay accelerating factor)、趋化因子家族成员和补体因子。在一些实施方案中，治疗性肽或治疗性蛋白选自由胰岛素和GLP-1类似物组成的组。在一些实施方案中，治疗性肽或治疗性蛋白选自由以下组成的组：胰岛素和GLP-1类似物、瘦素(Leptin)、包括BMP-4的骨形态发生蛋白和包括NGF-1的神经生长因子。
[0015]在一些实施方案中，治疗性肽或治疗性蛋白是免疫调节的，并且在一些实施方案中，治疗性肽或治疗性蛋白是醋酸格拉替雷(Glatiramer acetate)。在一些实施方案中，提供治疗性肽或治疗性蛋白以提高对与自身免疫疾病有关的变应原或抗原的自身耐受。
[0016]在一些实施方案中，治疗性肽或治疗性蛋白可用于治疗、减轻、消除代谢疾病或病症，减少其发病率或严重性。
[0017]在一些实施方案中，本专利技术提供了如本文所述的口服药物组合物，用作用于向受试者口服施用治疗性肽或治疗性蛋白的药物。
[0018]在一些方面，本专利技术的口服药物组合物防止受试者中治疗性肽或治疗性蛋白的快速降解，或在一些实施方案中，提高受试者中口服施用的治疗性肽或治疗性蛋白的持续活性，或在一些实施方案中，提高受试者中口服施用的治疗性肽或治疗性蛋白的持续生物利用度。根据这个方面并且在一些实施方案中，口服施用的治疗性肽或治疗性蛋白的持续活性或持续生物利用度超过了使用包含化学纯化的BBI而不是所述分离的重组表达的BBI而其他方面相同的口服制剂后获得的持续活性或生物利用度。
[0019]在一些实施方案中，本专利技术提供了如本文本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种口服药物组合物，其包含高达100千道尔顿的治疗性肽或治疗性蛋白、二价阳离子螯合剂和分离的重组表达的Bowman-Birk抑制剂(BBI)。2.如权利要求1所述的口服药物组合物，其中所述重组表达的BBI具有与SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少95％同一性的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的口服药物组合物，其中所述重组表达的BBI具有与SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少97％同一性的核苷酸序列。4.如权利要求1所述的口服药物组合物，其中所述重组表达的BBI具有与SEQ ID NO:1中所示核苷酸序列有至少99％同一性的核苷酸序列。5.如权利要求1所述的口服药物组合物，其中所述重组表达的BBI具有SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列。6.如权利要求1所述的口服药物组合物，其中所述重组表达的BBI在酵母表达系统中表达。7.如权利要求6所述的口服药物组合物，其中所述酵母表达系统是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。8.如权利要求1所述的口服药物组合物，其中所述制剂进一步包含除所述BBI以外的胰蛋白酶抑制剂。9.如权利要求8所述的口服药物组合物，其中所述胰蛋白酶抑制剂是KTI3。10.如权利要求9所述的口服药物组合物，其中所述KTI3已被化学分离并纯化至通过SDS-PAGE测得的纯度是至少85％，或者其中所述KTI3已被纯化至通过BCA测定测得的蛋白含量大于95％。11.如权利要求9所述的口服药物组合物，其中所述KTI3已被重组表达。12.如权利要求1至11任一项所述的口服药物组合物，其中所述治疗性蛋白可用于治疗患有代谢性疾病或病症的受试者。13.如权利要求1至11任一项所述的口服药物组合物，其中所述治疗性肽或治疗性蛋白选自由以下组成的组：胰岛素、流感血凝素、流感神经氨酸酶、胰高血糖素、干扰素γ、干扰素β、干扰素α、生长激素、促红细胞生成素、GLP-1、GLP-1类似物、瘦素、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肾素、生长激素释放因子、甲状旁腺激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、降钙素、促黄体激素、胰高血糖素、凝血因子、抗凝血因子、心钠素、表面活性蛋白A(SP-A)、表面活性蛋白B(SP-B)、表面活性蛋白C(SP-C)、表面活性蛋白D(SP-D)、纤溶酶原激活剂、铃蟾肽、造血生长因子(集落刺激因子，多种)、肿瘤坏死因子(TNF)蛋白、脑啡肽酶、RANTES(调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子)、人巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1-α)、血清白蛋白、苗勒抑制物质、松弛素、小鼠促性腺素释放激素、DNase、抑制素、激活素、血管内皮生长因子(VEGF)、神经营养因子、神经营养蛋白-3、-4、-5或-6(NT-3、NT-4、NT-5或NT-6)、神经生长因子、血小板衍生生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、转化生长因子(TGF)、胰岛素样生长因子-I和-II(IGF-I和IGF-II)、des(1-3)-IGF-1(脑IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5、IGFBP-6、角质形成细胞生长因子、骨诱导因子、骨形态发生蛋白(BMP)-2、BMP-4、BMP-7、集落刺激因子(CSF)、白细胞介素(IL)、超氧化物歧化酶、衰变加速因子、趋化因子家族成员和补体因子。14.如权利要求13所述的口服药物组合物，其中所述治疗性肽或治疗性蛋白选自由胰
岛素和GLP-1类似物组成的组。15.如权利要求13所述的口服药物组合物，其中所述治疗性肽或治疗性蛋白是免疫调节物。16.如权利要求15所述的口服药物组合物，其中所述治疗性肽或治疗性蛋白是醋酸格拉替雷。17.如权利要求1至16任一项所述的口服药物组合物，其中所述螯合剂是EDTA。18.如权利要求1至17任一项所述的口服药物组合物，其中所述制剂是基于油的液体制剂。19.如权利要求18所述的口服药物组合物，其进一步包含单甘油酯、二甘油酯、三甘油酯或其混合物的聚乙二醇(PEG)酯。20.如权利要求19所述的口服药物组合物，其中所述PEG酯作为以下的混合物提供：(a)单酰基甘油、二酰基甘油、三酰基甘油或其混合物；和(b)脂肪酸的聚乙二醇(PEG)酯。21.如权利要求20所述的口服药物组合物，其中所述混合物的(a)部分包含C
8-C
18
单酰基甘油、二酰基甘油和三酰基甘油。22.如权利要求20所述的口服药物组合物，其中所述混合物的(b)部分包含在遗传学上结合有多肽标签的C
8-C
18
脂肪酸混合物的PEG单酯和二酯，或其组合。23.如权利要求20所述的口服药物组合物，其中所述混合物的(a)部分包含C
8-C
18
单酰基甘油、二酰基甘油和三酰基甘油；所述混合物的(b)部分包含C
8-C
18
脂肪酸混合物的PEG-32单酯和二酯；所述基于油的液体制剂进一步包含(c)游离的PEG-32；并且所述混合物的(a)部分与所述混合物的(b)和(c)部分之和的重量/重量比在10:90和30:70之间，包含端值。24.如权利要求23所述的口服药物组合物，其中(a)、(b)和(c)共占所述基于油的液体制剂的8-16％重量/重量，包括端值。25.如权利要求18所述的口服药物组合物，其中所述基于油的液体制剂进一步包含游离的PEG。26.如权利要求1至17任一项所述的口服药物组合物，其中所述制剂包含明胶和甘油。27.如权利要求18至26任一项所述的口服药物组合物，其进一步包含非离子型洗涤剂。28.如权利要求27所述的口服药物组合物，其中所述非离子型洗涤剂是基于聚山梨酸酯的洗涤剂。29.如权利要求28所述的口服药物组合物，其中所述基于聚山梨酸酯的洗涤剂是聚山梨酸酯80。30.如权利要求29所述的口服药物组合物，其中所述聚山梨酸酯80占所述基于油的液体制剂的3-10％重量/重量，包含端值。31.如权利要求1至30任一项所述的口服药物组合物，其中所述油是鱼油。32.如权利要求1至31任一项所述的口服药物组合物，其中所述基于油的液体制剂是无水的。33.如权利要求1至32任一项所述的口服药物组合物，其进一步包含抵抗胃中降解的包衣。34.如权利要求33所述的口服药物组合物，其中所述包衣是pH敏感的胶囊。
35.如权利要求33所述的口服药物组合物，其中所述包衣是软胶囊。36.如权利要求1至35任一项所述的口服药物组合物，用于向受试者口服施用治疗性蛋白。37.权利要求36所述的口服药物组合物，其中所述口服药物组合物防止所述受试者中所述治疗性肽或治疗性蛋白的快速降解。38.权利要求36所述口服药物组合物，其中所述口服药物组合物提高所述受试者中口服施用的治疗性肽或治疗性蛋白的持续活性，或其中所述口服药物组合物提高所述受试者中口服施用的治疗性肽或治疗性蛋白的持续生物利用度。39.权利要求38所述的口服药物组合物，其中所述口服施用的治疗性肽或治疗性蛋白的所述持续活性或所述持续生物利用度超过在使用包含化学纯化的BBI而不是所述分离的重组表达BBI而其他方面相同的口服制剂后获得的持续活性或持续生物利用度。40.权利要求36所述的口服药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：米丽娅姆，
申请(专利权)人：奥拉姆德有限公司，
类型：发明
国别省市：