一种包载sigma-1受体的外泌体在制备抗抑郁药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药，具体为一种包载sigma

【技术实现步骤摘要】
一种包载sigma-1受体的外泌体在制备抗抑郁药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药，具体涉及包载sigma-1受体的外泌体的制备方法，以及包载sigma-1受体的外泌体在制备抗抑郁药物中的应用。

技术介绍

[0002]作为一种最为常见的精神类疾病，抑郁症严重危害人类健康，也造成了巨大的经济、社会负担。其核心症状表现为情绪低落、快感缺乏、易激惹、注意力下降及食欲不正常和睡眠障碍等。抑郁症具有高致残率甚至致死率，是美国首位、欧洲第三位的致残因素；全世界每年有1000万到2000万人有自杀企图，其中大约70%患有抑郁症。
[0003]以氟西汀、氟伏沙明等为代表的单胺类递质（如5-HT、NA、DA）再摄取抑制剂是临床常用抗抑郁药物。然而临床实践中发现，此类抗抑郁症药物常会引起恶心、头痛、性功能障碍、体重异常等副作用。并且只有30%-50%的病人对首次服用的抗抑郁药物起效；即使抗抑郁药物能达到临床治疗效果，也需要较长时间（一般为数周甚至更久）。因此，寻找高效、安全、低成本的治疗靶点成为抗抑郁药物研发的新方向。
[0004]Sigma-1受体是由223个氨基酸组成的多肽，在哺乳动物中具有超过90%的氨基酸同源性，被认为是一种具有伴侣活性的受体蛋白。正常情况下，sigma-1受体主要位于内质网-线粒体接触面，并且因为与Bip蛋白相结合而不表现出活性。当受到激动剂或者其他因素刺激后，sigma-1受体可以和Bip蛋白相分离，进而从内质网-线粒体接触面脱落变为游离的sigma-1受体，即激活状态。游离的sigma-1受体可以分布到细胞质、细胞核周围、细胞膜等区域，结合多种胞浆蛋白、膜蛋白、离子通道等，发挥生物学活性（Schmidt HR et al. Trends Pharmacol Sci. 2019, 40(9):636-654.）。近来研究表明sigma-1受体可能是抗抑郁治疗的新靶点。研究证实敲除sigma-1受体后，小鼠表现出抑郁样症状（Valentina Sabino et al. Behav Brain Res. 2009, 198(2):472-476）；采用激动剂等化合物，或者腺相关病毒过表达等方式激活sigma-1受体后能改善小鼠抑郁样症状，表现出较好的抗抑郁作用（Wang Y et al. CNS Neurosci Ther. 2016, 22(5):368-377; Wang Y et al. Glia. 2020, 68(11):2415-2426.）。但是，目前sigma-1受体激动剂的抗抑郁起效时间仍然较长，治疗效果有待改善；采用外源性输送sigma-1受体多肽的方式则面临着难以通过血脑屏障、容易被机体降解以及产生免疫反应等缺点；而采用病毒等方式过表达sigma-1受体也受限于血脑屏障、免疫反应、起效时间等问题，均不能很好的发挥sigma-1受体的功能。
[0005]外泌体是由多种类型细胞分泌的直径约为30-160 nm的胞外囊泡，含有核酸、蛋白质和脂质等具有生物学活性的物质，可以传递细胞间的信号，调节细胞功能；外泌体是一种天然的药物载体，可以有效的装载“货物”转运至目的细胞中。而且外泌体具有较高的生物稳定性和免疫相容性，因此，相较于传统的递送载体，采用外泌体装载多肽更具有优势。然而能否以外泌体的形式装载sigma-1受体从而发挥其活性、产生抗抑郁作用，目前未见报道。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了制备包载sigma-1受体的外泌体的方法，以及包载sigma-1受体的外泌体在抗抑郁药物制备中的应用。
[0007]在第一方面，提供了制备包载sigma-1受体的外泌体的方法。包载sigma-1受体的外泌体可以从外周血中分离制备获得，也可以通过工程化外泌体合成制备获得。
[0008]进一步地，所述外周血指来自抑郁症模型小鼠的血浆或血清，其中的外泌体是经商品化外泌体提取试剂盒提取后取得。
[0009]正常情况下sigma-1受体主要位于内质网-线粒体接触面，不能游离在细胞质，因此正常小鼠血提取的外泌体基本不含sigma-1受体。当受到应激等因素的刺激后（Hayashi T et al. Cell. 2007, 131(3): 596-610.）sigma-1受体会从内质网-线粒体接触面游离至细胞质，因此抑郁症小鼠血中提取的外泌体可以包含sigma-1受体。
[0010]为达到上述目的，本专利技术采用下列技术方案：一种包载sigma-1受体的外泌体在制备抗抑郁药物中的应用。
[0011]所述的应用，其特征在于，包载sigma-1受体的外泌体为抑郁症模型小鼠的外周血中提取获得，或通过工程化外泌体合成制备获得。
[0012]所述的应用，其特征在于，抑郁症模型制作方法为脂多糖诱导、慢性束缚应激、慢性不可预知性温和刺激或慢性皮质酮给药。
[0013]所述的应用，其特征在于工程化外泌体合成制备方法为构建含有sigma-1受体的质粒，将其导入细胞中表达，提取外泌体。
[0014]所述的应用，其特征在于，所述质粒含有sigma-1受体的基因序列是人源或者小鼠源。
[0015]所述的应用，其特征在于构建包装含人源sigma-1受体的慢病毒，感染HEK293T细胞，经嘌呤霉素筛选后，制作稳定高表达sigma-1受体的HEK293T细胞系， 从HEK293T细胞培养基中提取包载sigma-1受体的外泌体。
[0016]所述的应用，其特征在于，包载sigma-1受体的外泌体为含有包载sigma-1受体的外泌体和一种或多种药学上可接受的或辅料形成的复合物。
[0017]具体而言：（1）建立抑郁症模型。优选地，本专利技术以文献中常见的两种抑郁症模型为例，但并不特指仅限此两种模型：采用脂多糖（LPS），按照0.83 mg/kg进行小鼠腹腔注射，24 h后进行抑郁症指标评价。或者采用慢性束缚应激方法，每日将小鼠束缚2-4小时，连续2-3周，直至小鼠出现抑郁症状。
[0018]（2）提取外周血外泌体。取步骤（1）造模成功的小鼠血清或血浆，使用0.22 μm滤膜过滤，采用外泌体商品试剂盒（美国 Invitrogen 公司）按ExoQuick法提取。沉淀采用100 μL无菌 PBS重悬沉淀，采用BCA法测定蛋白浓度。
[0019]（3）经上述方法提取后的外泌体含有sigma-1受体，即为包载sigma-1受体的外泌体。
[0020]进一步地，除上述采用外周血制备包载sigma-1受体的外泌体，工程化制作包载sigma-1受体的外泌体也是本
技术实现思路
。
[0021]目前认为采用工程化外泌体对目标“货物”的装载方式主要有两种，即外源货物装
载和内源货物装载。其中，外源货物装载主要是通过电转、超声、冻融、挤出及转染等方法使外源目标“货物”包载进外泌体中；内源货物装载主要是借助外泌体自然形成过程，使得目标“货物”装载到外泌体中，再进行提取。相比之下，内源性方式更容易保留了目标蛋白质的天然构象及外泌体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包载sigma-1受体的外泌体在制备抗抑郁药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包载sigma-1受体的外泌体为抑郁症模型小鼠的外周血中提取获得，或通过工程化外泌体合成制备获得。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，抑郁症模型制作方法为脂多糖诱导、慢性束缚应激、慢性不可预知性温和刺激或慢性皮质酮给药。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于工程化外泌体合成制备方法为构建含有sigma-1受体的质粒，将其导入细胞中表达，提取外泌体。5.根据权利要求4所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：王允，郭琳，高策，高天宇，赵璐，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：