一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，选取正常健康人群粪便收集，以被移植人员亲属优先，以年轻人、儿童及伴侣优先，取样粪便放置塑料盒中进行保存；在500ml的三角瓶中放入225ml0.85％的氯化钠溶液，放入10

【技术实现步骤摘要】
一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及菌群移植
，具体为一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]在人体肠道内环境中，肠道菌群数量约1000至1500种，细菌数量达到10万亿个，肠道存在许多不同益生菌包括乳酸菌属、双歧杆菌属、梭状芽胞杆菌属、粪杆菌属等，共同维持肠道微生态平衡。
[0003]众多对人体肠道健康的研究表明，体魄强健的人肠道内有益菌的比例达到70％，普通人则是25％，便秘人群减少到15％，而癌症病人肠道内的益生菌的比例只有10％，所以肠道健康对维持机体正常运转起着重要作用。
[0004]本专利利用多种培养方式对取样菌种进行培养，选取最为合适菌群进行移植。

技术实现思路

[0005](一)解决的技术问题
[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，解决了菌种移植不合适的问题。
[0007](二)技术方案
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，包括以下步骤：
[0009]S1、选取正常健康人群粪便收集，以被移植人员亲属优先，以年轻人、儿童及伴侣优先，取样粪便放置塑料盒中进行保存；
[0010]S2、在500ml的三角瓶中放入225ml0.85％的氯化钠溶液，放入10-20颗玻璃珠后，进行密封，并放置在除菌箱中，以100℃-125℃环境进行除菌15-20min，完成后进行自然冷却；
[0011]S3、在冷却后的氯化钠溶液中倒入25g-35g取样粪便，使用均浆机进行摇匀，完成后使用医疗纱布进行过滤，取得混合菌悬浮液；
[0012]S4、将混合菌悬浮液放置在2000r/min-3000r/min的离心机作用下，离心操作10-20min，混合菌悬浮液离心后再次通过医疗纱布进行过滤；
[0013]S5、将混合菌悬浮液分成两份放置在不同培养皿中，将50℃-55℃的培养基取15ml-20ml倾注入两个培养皿中，并进行轻微摇晃，直到两个培养基进行凝固；
[0014]S6、将两个培养皿倒置在35℃-37℃培养箱中分别进行无氧和有氧培养；
[0015]S7、将过夜培养后的两份培养皿使用棉签进行取样，分别于抽取细胞中细胞质内DNA，并将此DNA与被移植人体内部DNA进行对比，选取匹配度较高的培养皿；
[0016]S8、将选取后的培养皿内部细菌，与各种微生物以肠道菌群进行组合，制成混合细菌制剂，并混合细菌制剂移植入被移植人肠道内部。
[0017]优选的，在步骤S1中，所述正常健康人群应为2-6月内没有使用过抗生素药剂的人群。
[0018]优选的，在步骤S2中，所述玻璃珠直径尺寸为0.8cm。
[0019]优选的，在步骤S5中，所述培养基为蛋白胨培养基。
[0020]优选的，在步骤S6中，所述有氧培养时，在培养箱中通入15％-20％氧气浓度。
[0021](三)有益效果
[0022]本专利技术提供了一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，具备的有益效果：该替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，通过除菌后的氯化钠溶液对粪便进行过滤，避免外部环境对粪便内部菌种的影响，利用医疗纱布和离心作用，起到充分过滤粪便内部杂质的作用，保证取得混合菌悬浮液纯净度的作用，利用无氧和有氧环境下的分别培养，方便取得匹配度较高混合菌的作用，保证制取的混合细菌制剂的移植效果。
具体实施方式
[0023]基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例一
[0025]本专利技术提供一种技术方案：一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，选取正常健康人群粪便收集，正常健康人群应为2-6月内没有使用过抗生素药剂的人群，以被移植人员亲属优先，以年轻人、儿童及伴侣优先，取样粪便放置塑料盒中进行保存；、在500ml的三角瓶中放入225ml0.85％的氯化钠溶液，放入20颗玻璃珠后，玻璃珠直径尺寸为0.8cm，进行密封，并放置在除菌箱中，以121℃环境进行除菌20min，完成后进行自然冷却；在冷却后的氯化钠溶液中倒入30g取样粪便，使用均浆机进行摇匀，完成后使用医疗纱布进行过滤，取得混合菌悬浮液；将混合菌悬浮液放置在3000r/min的离心机作用下，离心操作15min，混合菌悬浮液离心后再次通过医疗纱布进行过滤；将混合菌悬浮液分成两份放置在不同培养皿中，将55℃的培养基取20ml倾注入两个培养皿中，培养基为蛋白胨培养基，并进行轻微摇晃，直到两个培养基进行凝固；将两个培养皿倒置在37℃培养箱中分别进行无氧和有氧培养，有氧培养时，在培养箱中通入20％氧气浓度；将过夜培养后的两份培养皿使用棉签进行取样，分别于抽取细胞中细胞质内DNA，并将此DNA与被移植人体内部DNA进行对比，选取匹配度较高的培养皿；将选取后的培养皿内部细菌，与各种微生物以肠道菌群进行组合，制成混合细菌制剂，并混合细菌制剂移植入被移植人肠道内部。
[0026]实施例二
[0027]本专利技术提供一种技术方案：一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，选取正常健康人群粪便收集，正常健康人群应为2-6月内没有使用过抗生素药剂的人群，以被移植人员亲属优先，以年轻人、儿童及伴侣优先，取样粪便放置塑料盒中进行保存；在500ml的三角瓶中放入225ml0.85％的氯化钠溶液，放入10颗玻璃珠后，玻璃珠直径尺寸为0.8cm，进行密封，并放置在除菌箱中，以100℃环境进行除菌15min，完成后进行自然冷却；在冷却后的氯化钠溶液中倒入25g取样粪便，使用均浆机进行摇匀，完成后使用医疗纱布进行过滤，取得混合菌悬浮液；将混合菌悬浮液放置在2000r/min的离心机作用下，离心
操作10min，混合菌悬浮液离心后再次通过医疗纱布进行过滤；将混合菌悬浮液分成两份放置在不同培养皿中，将50℃的培养基取15ml倾注入两个培养皿中，培养基为蛋白胨培养基，并进行轻微摇晃，直到两个培养基进行凝固；将两个培养皿倒置在35℃培养箱中分别进行无氧和有氧培养，有氧培养时，在培养箱中通入15％氧气浓度；将过夜培养后的两份培养皿使用棉签进行取样，分别于抽取细胞中细胞质内DNA，并将此DNA与被移植人体内部DNA进行对比，选取匹配度较高的培养皿；将选取后的培养皿内部细菌，与各种微生物以肠道菌群进行组合，制成混合细菌制剂，并混合细菌制剂移植入被移植人肠道内部。
[0028]实施例三
[0029]本专利技术提供一种技术方案：一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，选取正常健康人群粪便收集，正常健康人群应为2-6月内没有使用过抗生素药剂的人群，以被移植人员亲属优先，以年轻人、儿童及伴侣优先，取样粪便放置塑料盒中进行保存；在500ml的三角瓶中放入225m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种替代天然菌群的肠壁移植优势菌的制备方法及其应用，其特征在于，包括以下步骤：S1、选取正常健康人群粪便收集，以被移植人员亲属优先，以年轻人、儿童及伴侣优先，取样粪便放置塑料盒中进行保存；S2、在500ml的三角瓶中放入225ml0.85％的氯化钠溶液，放入10-20颗玻璃珠后，进行密封，并放置在除菌箱中，以100℃-125℃环境进行除菌15-20min，完成后进行自然冷却；S3、在冷却后的氯化钠溶液中倒入25g-35g取样粪便，使用均浆机进行摇匀，完成后使用医疗纱布进行过滤，取得混合菌悬浮液；S4、将混合菌悬浮液放置在2000r/min-3000r/min的离心机作用下，离心操作10-20min，混合菌悬浮液离心后再次通过医疗纱布进行过滤；S5、将混合菌悬浮液分成两份放置在不同培养皿中，将50℃-55℃的培养基取15ml-20ml倾注入两个培养皿中，并进行轻微摇晃，直到两个培养基进行凝固；S6、将两个培养皿倒置在35℃-37℃培养箱中分别进行无氧和有...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正前，
申请(专利权)人：安徽燕婉健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：