一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，包括：蔗糖70

【技术实现步骤摘要】
一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]玻尿酸，又名透明质酸，是一种生物大分子粘性多糖物质，具有在体内发挥保水、维持细胞外空间、调节渗透压、润滑、促进细胞修复的特性，可以起到抗皱保湿、提供营养和修复损伤的作用，在食品、医药和化妆品等领域有着广泛的用途。
[0003]目前，玻尿酸的生产方法主要分为两大类：动物组织提取法和细菌发酵法。其中，动物组织提取法的原料资源有限，含量低，工艺复杂，且提取的玻尿酸分子量低，品质相对较差。而细菌发酵法具有原料来源广泛、工艺简单、产量高的优点，适合大规模生产。国内外主要采用非致病性的马链球菌和兽疫链球菌发酵生产玻尿酸。由于链球菌的生长状况以及玻尿酸分子量、生产效率受到发酵环境的影响很大，使玻尿酸的产量以及质量与发酵培养基的组分以及发酵工艺参数的选择具有密切的关系。因此，为了提高玻尿酸的产量和质量，对发酵培养基以及发酵工艺作出优化是一条可行的途径。

技术实现思路

[0004]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养基及培养方法。
[0005]本专利技术提出的一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，包括：蔗糖70
‑
90g/L、木薯淀粉水解液10
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20g/L、酵母粉10
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15g/L、玉米浆水解液3
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5g/L、硫酸镁1.5
‑
2.5g/L、磷酸二氢钾2
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3g/L、磷酸氢二钠4
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6g/L、氯化钙10
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20mg/L、硫酸铜1
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1.5mg/L、硫酸锰6
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15mg/L、消泡剂0.1
‑
1g/L，余量为水。
[0006]优选地，所述木薯淀粉水解液是将木薯淀粉浆料糊化后用淀粉酶水解得到。
[0007]优选地，所述木薯淀粉水解液的制备方法为：先将木薯淀粉加入pH为6
‑
6.5的缓冲液中得到固含量为6
‑
15％的木薯淀粉浆料，然后加入氯化钙直至钙离子浓度为0.005
‑
0.01mol/L，在90
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95℃下加热糊化，冷却至50
‑
55℃，然后加入β
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淀粉酶酶解15
‑
20h，高温灭酶后过滤，收集上清液，即得；优选地，所述β
‑
淀粉酶的用量为木薯淀粉质量的0.3
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0.8％。
[0008]优选地，所述玉米浆水解液是由浓硫酸对玉米浆进行高温水解得到。
[0009]优选地，所述玉米浆水解液的制备方法为：将玉米浆与硫酸溶液按体积比为1：(1
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3)混合均匀，然后在110
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120℃下水解10
‑
15h，然后将pH调至6
‑
7，过滤，收集上清液，即得；优选地，所述玉米浆的固含量为40
‑
50％，所述硫酸溶液的质量浓度为20
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30％。
[0010]一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养方法，包括下述步骤：
[0011]S1、取适量保藏的兽疫链球菌菌种接种到斜面培养基中进行活化培养；
[0012]S2、取适量活化后的兽疫链球菌菌种接种到种子培养基中进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液；
[0013]S3、将兽疫链球菌种子培养液接种到权利要求1
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5任一项所述的发酵培养基中进行发酵，发酵时间为20
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30h，在发酵开始后第4
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6h时添加一次槐糖脂，发酵结束后，得到含玻尿酸的发酵液。
[0014]优选地，S1中，培养温度为35
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37℃，培养时间为15
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18h；S1中，斜面培养基包括：蔗糖1.5
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2g/L、酵母粉5
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12g/L、磷酸氢二钾3
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5g/L、硫酸镁0.5
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1g/L、琼脂18
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20g/L。
[0015]优选地，S2中，培养温度为35
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37℃，转速为150
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180r/min，培养时间为15
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18h；S2中，种子培养基包括：蔗糖15
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30g/L、酵母粉25
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40g/L磷酸氢二钾3
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5g/L、硫酸镁0.5
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1g/L、谷氨酸1
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1.5g/L。
[0016]优选地，S3中，槐糖脂的添加量为所述发酵培养基质量的0.05
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0.1％。
[0017]优选地，S3中，兽疫链球菌种子培养液的接种量为4
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6％；S3中，发酵温度为34
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36℃，转速为300
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400r/min，通气量为0.6
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1vvm。
[0018]本专利技术的有益效果如下：
[0019]本专利技术优化了链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基配方，通过以蔗糖和木薯淀粉水解液配合作为碳源，酵母粉和玉米浆水解液配合作为氮源，既能使营养成分更加丰富，提供适合玻尿酸合成的生长因子，促进玻尿酸的合成和分子量增长，而且可以对培养基的粘度、渗透压产生影响，减少以蔗糖作为单一碳源、酵母粉作为单一氮源导致的培养基环境对链球菌菌株生长的抑制，从而显著提高玻尿酸的产量，并在一定程度上提高产物的分子量；特别地，本专利技术还在发酵过程中，在合适的时间段加入槐糖脂，槐糖脂具有表面活性，能促进链球菌表面荚膜脱落，从而促进玻尿酸的合成，而且槐糖脂性质温和，对链球菌的生长抑制作用较弱，在发酵前期即可加入，能更显著地提高玻尿酸的产量。
具体实施方式
[0020]下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。
[0021]实施例1
[0022]一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，包括：蔗糖80g/L、木薯淀粉水解液15g/L、酵母粉12g/L、玉米浆水解液4g/L、硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、磷酸氢二钠5g/L、氯化钙15mg/L、硫酸铜1.4mg/L、硫酸锰10mg/L、消泡剂0.5g/L，余量为水。
[0023]木薯淀粉水解液的制备方法为：先将木薯淀粉加入pH为6.5的磷酸氢二钠
‑
磷酸二氢钠缓冲液中得到固含量为10％的木薯淀粉浆料，然后加入氯化钙直至钙离子浓度为0.01mol/L，在90℃下加热糊化，冷却至50℃，然后加入β
‑
淀粉酶酶解18h，高温灭酶后过滤，收集上清液，即得，其中β
‑
淀粉酶的用量为木薯淀粉质量的0.5％。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，包括：蔗糖70
‑
90g/L、木薯淀粉水解液10
‑
20g/L、酵母粉10
‑
15g/L、玉米浆水解液3
‑
5g/L、硫酸镁1.5
‑
2.5g/L、磷酸二氢钾2
‑
3g/L、磷酸氢二钠4
‑
6g/L、氯化钙10
‑
20mg/L、硫酸铜1
‑
1.5mg/L、硫酸锰6
‑
15mg/L、消泡剂0.1
‑
1g/L，余量为水。2.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述木薯淀粉水解液是将木薯淀粉浆料糊化后用淀粉酶水解得到。3.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述木薯淀粉水解液的制备方法为：先将木薯淀粉加入pH为6
‑
6.5的缓冲液中得到固含量为6
‑
15％的木薯淀粉浆料，然后加入氯化钙直至钙离子浓度为0.005
‑
0.01mol/L，在90
‑
95℃下加热糊化，冷却至50
‑
55℃，然后加入β
‑
淀粉酶酶解15
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20h，高温灭酶后过滤，收集上清液，即得；优选地，所述β
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淀粉酶的用量为木薯淀粉质量的0.3
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0.8％。4.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述玉米浆水解液是由浓硫酸对玉米浆进行高温水解得到。5.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述玉米浆水解液的制备方法为：将玉米浆与硫酸溶液按体积比为1：(1
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3)混合均匀，然后在110
‑
120℃下水解10
‑
15h，然后将pH调至6
‑
7，过滤，收集上清液，即得；优选地，所述玉米浆的固含量为40
‑
50％，所述硫酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正前，
申请(专利权)人：安徽燕婉健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：