一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，属于微生物技术领域。包括采集生物样品与生理盐水进行混合得到第一样品；将第一样品接种在第一固态培养基中；挑选出相应的第一单菌落；将第一单菌落接种到第一液体培养基上，得到第二单菌落；将第二单菌落在第二液体培养基上进行扩大培养，得到动物双歧杆菌乳亚种菌体；将动物双歧杆菌乳亚种菌体与保护剂得到乳化液；进行微包埋处理，得到包埋混合物；将包埋混合物进行喷雾干燥处理，得到动物双歧杆菌乳亚种菌剂。本发明专利技术提供一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其进一步提升了菌体的贮存存活率，使其能在常温条件进行，降低了菌体因温度对其菌体造成的损伤，可以更好地发挥其益生作用。其益生作用。

【技术实现步骤摘要】
一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，属于微生物


技术介绍

[0002]双歧杆菌(Bifidobacterium)的首次发现源于HenryTissier在1899年从母乳喂养的婴儿粪便中将其分离出来。双歧杆菌属于革兰氏阳性杆菌，对氧十分敏感，对低PH耐性差，在低PH环境下极易失活；其最适PH为6.5～7.0，最适生长温度37～42℃。双歧杆菌广泛存在于人和动物的消化道、阴道和口腔等生境中，是人和动物肠道菌群的重要组成成员之一。已经发现，双歧杆菌有32个亚型，含有双歧杆菌的生物制剂多达70种。
[0003]双歧杆菌是既不产生内、外毒素，也不产生致病物质和有害气体的益生菌，这对维护机体的健康具有重要意义。双歧杆菌能有效地维持肠道正常菌群平衡，同时在抗腹泻、抗便秘、抗感染、抗肿瘤等方面也有独特的生理功能。双歧杆菌在维持机体肠道微生态平衡、抑制致病菌入侵和定植、调节机体免疫能力、降低胆固醇含量等机体健康方面发挥重要作用，因此拥有广泛的应用前景。
[0004]现有的双歧杆菌无法实现常温或储存期限较长情况下的保存，其培育工艺较为复杂，药物组合物包括的原料种类较多，经济成本较高。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其进一步提升了菌体的贮存存活率，使其能在常温条件进行，降低了菌体因高温或者低温干燥对其菌体造成的损伤，工艺步骤简单，具有更好的模拟消化液存活率，可以更好地发挥其益生作用。
[0006]本专利技术提供一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其包括以下步骤：
[0007]1)采集生物样品，将样品与生理盐水进行混合得到第一样品；
[0008]2)将第一样品接种在第一固态培养基中，37℃厌氧培养20h，如此传代培养2次得到活化菌种；
[0009]3)观察菌落生长情况，根据标准双歧杆菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的第一单菌落；
[0010]4)配置第一液体培养基，将第一单菌落培养物划线接种到第一液体培养基上，T37℃环境下厌氧环境培养48h，得到第二单菌落；
[0011]5)配置第二液体培养基，将第二单菌落在第二液体培养基上进行扩大培养，得到动物双歧杆菌乳亚种菌体；
[0012]6)将动物双歧杆菌乳亚种菌体与保护剂得到乳化液；
[0013]7)将乳化液和包埋壁材混合，进行微包埋处理，得到包埋混合物；
[0014]8)将包埋混合物进行喷雾干燥处理，得到动物双歧杆菌乳亚种菌剂。
[0015]优选的，所述步骤1)中生物样品为健康婴儿或幼儿肠道粪便。
[0016]优选的，所述步骤3中第一单菌落为乳白色，呈半圆形凸起，表面光滑、湿润，边缘
整齐。
[0017]优选的，所述第一固态培养基包括以下组分：
[0018]优选的，酪蛋白胨8
‑
15份、牛肉膏12
‑
25份、乳糖10
‑
18份、葡萄糖8
‑
16份、乙酸钠5
‑
12份、酵母粉3
‑
8份、K2PO4
·
3H2O8
‑
12份、MgSO4
·
7H2O10
‑
20份、MnSO45
‑
12份、琼脂3
‑
6份、硫酸镁5
‑
8份。
[0019]优选的，所述第一固态培养基包括以下制备步骤：
[0020]1)将酪蛋白胨、牛肉膏、乳糖1、葡萄糖、乙酸钠、酵母粉、
[0021]K2PO4
·
3H2O、MgSO4
·
7H2O、MnSO4、琼脂、硫酸镁按照比例进行混合通过去离子水溶解得到第一混合物；
[0022]2)调节第一混合物pH值为7，121℃下灭菌15min；
[0023]3)灭菌后冷却至45℃即得第一固态培养基。
[0024]优选的，所述第一液体培养基包括以下组分：
[0025]乙酸钠12
‑
20份、柠檬酸二胺10
‑
15份、酵母膏8
‑
18份、葡萄糖5
‑
12份、无水乙酸钠3
‑
10份、磷酸氢二钾10
‑
15份、大豆蛋白胨12
‑
25份、蒸馏水18
‑
30份。
[0026]优选的，所述第二液体培养基包括以下组分：
[0027]碳酸钙10
‑
18份、水解酪蛋白12
‑
15份、植物胨8
‑
18份、磷酸氢二钾10
‑
15份、氯化铁8
‑
20份、K2HPO410
‑
18份、MgSO4
·
7H2O5
‑
12份、MnSO4
·
7H2O10
‑
15份、半胱氨酸5
‑
12份。
[0028]本专利技术的有益效果：
[0029]本专利技术提供一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其进一步提升了菌体的贮存存活率，使其能在常温条件进行，降低了菌体因高温或者低温干燥对其菌体造成的损伤，工艺步骤简单，具有更好的模拟消化液存活率，可以更好地发挥其益生作用。
具体实施方式
[0030]下面将对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。
[0031]实施例一：
[0032]本专利技术提供一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其包括以下步骤：
[0033]1)采集健康婴儿或幼儿肠道粪便，将与生理盐水进行混合得到第一样品；
[0034]2)将第一样品接种在第一固态培养基中，37℃厌氧培养20h，如此传代培养2次得到活化菌种；
[0035]3)观察菌落生长情况，根据标准双歧杆菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出为乳白色，呈半圆形凸起，表面光滑、湿润，边缘整齐的第一单菌落；
[0036]4)配置第一液体培养基，将第一单菌落培养物划线接种到第一液体培养基上，T37℃环境下厌氧环境培养48h，得到第二单菌落；
[0037]5)配置第二液体培养基，将第二单菌落在第二液体培养基上进行扩大培养，得到动物双歧杆菌乳亚种菌体；
[0038]6)将动物双歧杆菌乳亚种菌体与保护剂得到乳化液；
[0039]7)将乳化液和包埋壁材混合，进行微包埋处理，得到包埋混合物；
[0040]8)将包埋混合物进行喷雾干燥处理，得到动物双歧杆菌乳亚种菌剂。
[0041]本专利技术中第一固态培养基包括以下组分：
[0042]酪蛋白胨8份、牛肉膏12份、乳糖10份、葡萄糖8份、乙酸钠5份、酵母粉3份、K2PO4
·
3H2O8份、MgSO4
·<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：1)采集生物样品，将样品与生理盐水进行混合得到第一样品；2)将第一样品接种在第一固态培养基中，37℃厌氧培养20h，如此传代培养2次得到活化菌种；3)观察菌落生长情况，根据标准双歧杆菌的菌落特征以及参考相关文献图片，挑选出相应的第一单菌落；4)配置第一液体培养基，将第一单菌落培养物划线接种到第一液体培养基上，T37℃环境下厌氧环境培养48h，得到第二单菌落；5)配置第二液体培养基，将第二单菌落在第二液体培养基上进行扩大培养，得到动物双歧杆菌乳亚种菌体；6)将动物双歧杆菌乳亚种菌体与保护剂得到乳化液；7)将乳化液和包埋壁材混合，进行微包埋处理，得到包埋混合物；8)将包埋混合物进行喷雾干燥处理，得到动物双歧杆菌乳亚种菌剂。2.根据权利要求1所述的一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中生物样品为健康婴儿或幼儿肠道粪便。3.根据权利要求1所述的一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤3中第一单菌落为乳白色，呈半圆形凸起，表面光滑、湿润，边缘整齐。4.根据权利要求1所述的一种动物双歧杆菌乳亚种菌剂的制备方法，其特征在于，所述第一固态培养基包括以下组分：酪蛋白胨8
‑
15份、牛肉膏12
‑
25份、乳糖10
‑
18份、葡萄糖8
‑
16份、乙酸钠5
‑
12份、酵母粉3
‑
8份、K2PO4
·
3H2O8
‑
12份、MgSO4
·
7H2O10
‑
20份、MnSO45
‑
12份、琼脂3
‑
6份、硫...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宝林，
申请(专利权)人：安徽燕婉健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：