一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗制造技术

本公开涉及例如由包括嵌合多肽表位的乳头瘤病毒(例如人类乳头瘤病毒，或者BPV)L1主要衣壳蛋白组装而成的类病毒颗粒(VLP)组合物，所述乳头瘤病毒L1主要衣壳蛋白中插入了新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
一种使用乳头瘤病毒类病毒颗粒递呈抗原的新型冠状病毒多肽疫苗


[0001]本公开涉及生物
，尤其涉及一种使用乳头瘤病毒(PV)类病 毒颗粒(VLP)递呈抗原的新型冠状病毒(SARS-COV-2)多肽疫苗。

技术介绍

[0002]COVID-19的病原体SARS-COV-2属于冠状病毒(Coronaviruses,CoVs) 家族成员。冠状病毒是一类包膜正链单链RNA病毒，可感染人和动物。 它们可进一步基于基因型和血清特点，细分为四个属类：α-、β-、γ
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和δ-冠状病毒。迄今，所有已确认可感染人的冠状病毒都属于前两种属， 即Alpha-和Beta-冠状病毒。其中，Beta-冠状病毒尤其引起人们注意， 因为Beta-冠状病毒家族成员在过去20年内已经引发了三次大流行，包 括2003年爆发的SARS(由SARS-CoV引起)，2012年流行的MERS(由 MERS-CoV引起)，以及当前肆虐全球的COVID-19(由SARS-CoV-2导致)。 SARS-CoV-2在基因序列上与2003年发现的SARS-CoV高度相似，也很可 能源于蝙蝠，但应该在跳跃至人宿主前经历了某一中间宿主的适应过程。
[0003][0004]综合当前全球流行病学数据来看，大部分COVID-19病患无明显症状 或仅呈现轻度至中度病理状态，在大约20％的病例中发生重症现象。 COVID-19导致的病死率(Case fatality rate,CFR)和年龄相关，年长者， 尤其是65岁以上的老人更容易因COVID-19死亡。COVID-19总体病死率 大概在1％～3％之间。当前尚无针对COVID-19的抗病毒药物或者疫苗获得 监管批准。
[0005]疫苗是当代医学最伟大的专利技术之一，也是人类对抗病毒和病毒引发 疾病最经济、最有效的武器。因为疫苗的使用，人类已成功消灭了天花， 基本根除了脊髓灰质炎，及成功控制了绝大多数曾经折磨人类的疾病， 比如结核、麻疹、白喉和破伤风等。自COVID-19爆发以来，各国实验室 纷纷开启了新冠疫苗的研发工作。当前新冠疫苗主要围绕5种技术路线 展开，包括灭活病毒疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗及重 组蛋白(多肽)疫苗。据WHO统计，目前已有48种疫苗进入临床研究阶段， 150多种疫苗仍然处于临床前研究中。部分疫苗的研发充分借鉴了 SARS-CoV和MERS-CoV等病毒疫苗的研发经验。
[0006]SARS-CoV-2的表面刺突蛋白(Spike)是I类融合蛋白(Class I fusionprotein)，介导了病毒附着并侵染宿主细胞的过程，是冠状病毒疫苗研 发的主要抗原靶标。在研亚单位疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗和重组 蛋白(多肽)疫苗均主要是以SARS-CoV-2的表面刺突蛋白为目标抗原。然 而此前SARS-CoV病毒疫苗研究表明，以表面刺突蛋白整个蛋白做抗原制 备的疫苗或者用化学方法灭活的全病毒疫苗在小鼠和雪貂等动物模型中 诱发了抗体依赖的感染增强效应(Antibody-dependent enhancement)。 同时，另有针对SARS-CoV病毒表面刺突蛋白的多肽疫苗研究结果显示， 刺突蛋白中的S
597-603
多肽可在细胞水平和猕猴中诱发ADE反应，提示多肽 S
597-603
可能通过表位序列依赖(Epitope-sequence dependent,ESD)机制 诱导ADE效应。
[0007]因此，若能通过设计针对SARS-CoV-2表面刺突蛋白抗原表位的多肽 疫苗来规避某些可能触发ADE效应的区域，同时能诱导抗病毒感染的有 效中和抗体，那么人类将拥有一项安全有效的抗新型冠状病毒 SARS-CoV-2利器。本专利申请的研究主要集中在开发一种使用乳头瘤病 毒(PV)类病毒颗粒(VLP)递呈抗原的新型冠状病毒(SARS-COV-2)多肽疫 苗。

技术实现思路

[0008]本公开的一个目的为：提供多个来自SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽， 例如SARS-CoV-2表面刺突蛋白的S
485-517
、S
618-639
和S
1182-1209
。当插入乳头瘤 病毒(PV)L1蛋白的DE/BC/FG/HI表面环中时，形成重组嵌合蛋白并组装 成VLP；当这些嵌合表面刺突蛋白多肽的VLP接种动物时，可诱导针对新 型冠状病毒SARS-CoV-2的中和抗体应答。
[0009]本公开提供了一种由含嵌合多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成 的类病毒颗粒VLP组合物，其中该乳头瘤病毒L1蛋白中嵌合了新型冠 状病毒SARS-COV-2刺突蛋白(Spike)表位多肽，所述新型冠状病毒 SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽选自由以下序列组成的组：
[0010]a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或
[0011]b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或
[0012]c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或
[0013]d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、 90％或者95％同一性的序列。
[0014]SARS-CoV-2刺突蛋白表位多肽和/或乳头瘤病毒L1蛋白中插入的相 应表位多肽的位点，是有助于本专利技术所述VLP诱导强烈持久抗病毒中和 反应的因素。
[0015]在一个优选的实施方案中，所述表面刺突蛋白多肽插入至乳头瘤 病毒L1蛋白的DE环、BC环、FG环或者HI环中。
[0016]在一个优选的实施方案中，
[0017]所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中的氨基酸第137-138位之间 (SEQ ID NO:4)；或
[0018]所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环中的氨基酸第56-57位之间 (SEQ ID NO:5)；或
[0019]所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环中的氨基酸第280-281位之间 (SEQ ID NO:6)；或
[0020]所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽 插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环中的氨基酸第350-351位之间 (SEQ ID NO:7)。
[0021]在一个优选的实施方案中，
[0022]SEQ ID NO:4：SAYAANAGV
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HPV16-L1(aa.133-141)；
[0023]SEQ ID NO:5：FPIKKPNNNKILVPK
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HPV16-L1(aa.5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种由含嵌合多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中该乳头瘤病毒L1蛋白中嵌合了新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白(Spike)表位多肽，所述新型冠状病毒SARS-COV-2刺突蛋白表位多肽选自由以下序列组成的组：a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。2.根据权利要求1所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环、BC环、FG环或者HI环中。3.根据权利要求1所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中的氨基酸第137-138位之间(SEQ ID NO:4)；或所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环中的氨基酸第56-57位之间(SEQ ID NO:5)；或所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环中的氨基酸第280-281位之间(SEQ ID NO:6)；或所述乳头瘤病毒L1蛋白来自HPV16，并且所述刺突蛋白表位多肽插入至所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环中的氨基酸第350-351位之间(SEQ ID NO:7)。4.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的DE环中插入由以下序列组成的肽：a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。5.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的BC环中插入由以下序列组成的肽：a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。6.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的FG环中插入由以下序列组成的肽：a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一
性的序列。7.一种由嵌合新型冠状病毒刺突蛋白表位多肽的乳头瘤病毒L1蛋白组装而成的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述乳头瘤病毒L1蛋白的HI环中插入由以下序列组成的肽：a)SEQ ID NO:1:GFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFEL，或b)SEQ ID NO:2:TEVPVAIHADQLTPTWRVYSTG，或c)SEQ ID NO:3:EIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQY，或d)与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3有至少80％、85％、90％或者95％同一性的序列。8.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒颗粒VLP组合物，其中所述的乳头瘤病毒L1蛋白来自人乳头瘤病毒HPV16。9.根据权利要求1或4-7任一项所述的类病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋敦泉，伍树明，刘永江，张海江，张士彬，陈晓，王学红，银飞，
申请(专利权)人：北京康乐卫士生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：