一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，具体公开了一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及制备方法与应用。所述抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体为杂交瘤细胞株5A9分泌的单克隆抗体；所述的杂交瘤细胞株5A9由猪流行性腹泻病毒nsp13重组蛋白免疫原多次免疫小鼠而得到；所述的杂交瘤细胞株5A9于2020年09月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，细胞株保藏编号为CCTCC NO:C2020148；所述免疫原，由重组表达载体转化入E.coli BL21感受态中进行诱导表达而得到；所述的重组表达载体包含一对扩增nsp13基因全长的引物，所述nsp13基因的核苷酸序列组成如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术所提供的抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，可制备成猪流行性腹泻病毒nsp13的WesternBlot检测试剂等。

【技术实现步骤摘要】
一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及应用
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及制备方法与应用。
技术介绍
猪流行性腹泻于1971年首次在英国报道并将其病原体命名为“猪流行性腹泻病毒”，中国在1976第一次报道了此病。猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病，以水样腹泻、呕吐和脱水为主要症状，各年龄阶段的猪均易感。哺乳仔猪、断奶仔猪和育肥猪的发病率可达100％，成年母猪发病率约为15％-20％，哺乳仔猪群受害最为严重，病死率平均50％左右。猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒，基因组全长约为28kb，为有囊膜、不分节段的单股正链RNA病毒，PEDV病毒全基因组从5’-3’基因结构依次为5’端非编码区(Untranslatedregion，UTR)、16个非结构蛋白(nonstructuralprotein，nsp)、纤突(Spike，S)蛋白、开放性阅读框(Openreadingframe本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体为杂交瘤细胞株5A9所分泌；所述的杂交瘤细胞株5A9由猪流行性腹泻病毒重组nsp13蛋白免疫原多次免疫小鼠而得到；所述的杂交瘤细胞株5A9于2020年09月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏编号为CCTCC NO:C2020148。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体为杂交瘤细胞株5A9所分泌；所述的杂交瘤细胞株5A9由猪流行性腹泻病毒重组nsp13蛋白免疫原多次免疫小鼠而得到；所述的杂交瘤细胞株5A9于2020年09月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏编号为CCTCCNO:C2020148。


2.根据权利要求1所述的一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述的猪流行性腹泻病毒重组nsp13蛋白免疫原，由重组表达载体转化入E.coliBL21感受态中进行诱导表达而得到；所述重组nsp13蛋白免疫原的氨基酸序列组成如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求2所述的一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述的重组表达载体，包含一对扩增nsp13基因全长的引物；所述nsp13基因全长为1791bp，其核苷酸序列组成如SEQIDNO.2所示。


4.根据权利要求3所述的一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述引物包含上游引物nsp13-F和下游引物nsp13-R；所述nsp13-F序列为5’-TTTCTCGAGtctgcagggctttgtgttgt-3',酶切位点为XhoI；所述nsp13-R序列为5’-CCGGAATTCttactgcaaatcagac-3'，酶切位点为EcoRI。


5.根据权利要求1-4任一所述的一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体的制备，其特征在于，包含以下制备步骤：
S1、构建重组表达载体：设计引物，扩增得到nsp13目的基因，将其克隆到pET-28a原核载体上，得到重组表达载体pET-28a-nsp13；
S2、获得免疫原：将上述S1步骤得到的pET-28a-nsp13重组表达载体，转入E.coliBL21感受态中进行诱导表达，得到猪流行性腹泻病毒重组nsp13包涵体蛋白，再经SKL溶解透析复性得到可溶性重组蛋白nsp13，作为后续单克隆抗体的免疫原；
S3、获得单克隆杂交瘤细胞株：将所述S2步骤得到的的免疫原多次免疫小鼠，取免疫的小鼠脾脏细胞，与SP2/0瘤细胞融合，筛选获得分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株；
S...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁珍，唐玉新，陈君，彭琪，吴琼，宋德平，叶昱，黄冬艳，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西;36