玉米淀粉合成酶SSⅢ的多克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了玉米淀粉合成酶SSⅢ多克隆抗体的的制备方法，用SEQ ID No.1所示氨基酸序列的蛋白免疫动物，然后从动物体内分离得到多克隆抗体。本发明专利技术制备的多克隆抗体效价高、亲和力强、特异性好，可与玉米淀粉合成酶SSⅢ发生特异性结合反应，且制备成本低，得率高。本发明专利技术制备的多克隆抗体，可对玉米在不同发育时期、不同生长条件下的表达情况进行检测，可以在玉米一切与淀粉合成酶SSⅢ蛋白作用相关的研究中得到应用，为SSⅢ蛋白的功能和作用机理提供了检测与验证技术支持，从而为解析淀粉的合成和调控机制有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
玉米淀粉合成酶SSⅢ的多克隆抗体的制备方法
本专利技术涉及生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种利用玉米淀粉合成酶SSⅢC端序列制备多克隆抗体的方法。
技术介绍
淀粉生物合成是一个高度复杂的代谢过程，需要多种酶的协同作用。这些酶包括ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)，淀粉合酶(SS)，淀粉分支酶(SBE)和淀粉脱支酶(DBE)等。淀粉合成关键酶被组装成良好的机械复合物，其中SSⅢ与其他酶的物理缔合在调节相互作用中起关键作用。淀粉合成酶(starchsynthase,SS)主要存在于可溶性的质体基质中，催化形成α-1,4糖苷键，进而形成直链淀粉或延伸支链淀粉的分支链,主要负责合成支链淀粉。在正在发育的玉米或水稻胚乳中,淀粉合成酶总活性中占28％，其活性水平仅次于SSI，是第二大主要SS同工酶。前人的研究表明，SSIII是淀粉正常结晶和防止植物糖原积累所必需的，主要作用是催化形成高度有序的支链淀粉。对水稻和大麦SSⅢa缺失突变体研究发现，SSⅢa催化中长链合成支链淀粉聚合度大于30的长链。玉米SSIII的缺失突变体表面颜色暗沉、内核缩本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于制备玉米淀粉合成酶SSⅢ的多克隆抗体的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.用于制备玉米淀粉合成酶SSⅢ的多克隆抗体的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


2.玉米淀粉合成酶SSⅢ的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，用SEQIDNo.1所示氨基酸序列的蛋白免疫动物，然后从动物体内分离得到多克隆抗体。


3.根据权利要求2所述的玉米淀粉合成酶SSⅢ的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)目的核酸片段的扩增：提取玉米胚乳RNA，反转录成cDNA，以cDNA为模板，以SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示的引物对为引物进行PCR扩增，得到玉米淀粉合成酶SSⅢC段1200位-1675位氨基酸对应的核酸片段，所述核酸片段序列如SEQIDNo.4所示；
(2)原核表达载体的构建；
(3)重组表达菌株的构建；
(4)蛋白的诱导表达及纯化；
(5)动...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄玉碧，余国武，杨炜潇，胡育峰，蒋梦，李炀平，张军杰，刘汉梅，刘应红，黄焕焕，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51