用于疾病和病症治疗和预防的抗-肾酶抗体制造技术

本发明专利技术涉及用于结合和抑制肾酶的组合物和方法。在一个实施方式中，肾酶结合分子抑制肾酶活性。因此，在其中肾酶活性降低是有益的疾病和病况的情况下，这些抑制性肾酶结合分子可以起到治疗剂的作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于疾病和病症治疗和预防的抗-肾酶抗体相关申请的交叉引用本专利技术申请主张2017年12月29日提交的美国临时专利申请No.62/611,609的优先权，该专利申请以其全部内容作为参考并入本文。
技术介绍
肾酶(RNLS)是主要在肾、心脏、骨骼肌、精巢并且在较小程度上在其它组织中产生的蛋白(Xu等人,2005JClinInvest.115(5):1275-80和Wang等人,2008MolBiolRep.35(4):613-20)。已描述了两种肾酶的同工型变体，肾酶-1和肾酶-2。由于最终外显子的差异剪接，这两种肾酶形式是不同的。已将肾酶描述为新型含-黄素腺嘌呤二核苷酸的单胺氧化酶，其具有使儿茶酚胺、肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺选择性脱氨基的活性。与健康个体相比，已描述了患有晚期肾病的患者血浆中肾酶的缺乏。儿茶酚胺通过影响心输出量和血管阻力在维持和调节血压中，包括在疾病中起重要作用。向大鼠输注重组形式的肾酶导致心肌收缩力、心率和血压降低。肾衰竭患者的特征在于循环儿茶酚胺水平升高，这与高血压和通过心血管并发症的更高的死亡率相关。因此，蛋白肾酶可以在控制和维持儿茶酚胺-引起的血压变化中起作用，并且肾病患者中所观察到的肾酶缺乏可以对结局有害。与健康个体相比，已描述了患有晚期肾病的患者血浆中肾酶的缺乏。肾衰竭患者的特征在于循环儿茶酚胺水平升高，这与高血压和通过心血管并发症的更高的死亡率相关。因此，蛋白肾酶可以在控制和维持儿茶酚胺-引起的血压变化中起作用，并且肾病患者中所观察到的肾酶缺乏可以对结局有害。然而，对于肾酶在癌症中的作用知之甚少。癌症的基本特征在于细胞衰老和死亡的调控异常。肾酶(RNLS)是通过经由质膜钙ATP酶PMCA4b的信号转导以激活PI3K/AKT和MAPK途径来保护缺血性和毒性细胞损伤的分泌的黄素蛋白。皮肤癌是常见的人恶性肿瘤，并且其发病率在发达国家中不断升高(Gray-Schopfer等人,2007Nature.445:851-7；Lowe等人,2014MayoClinicProceedings.89:52-9；Lesinski等人,2013Futureoncology.9:925-7)。黑素瘤是最致命的皮肤癌形式，一旦其不可切除，则存活率较低(Lowe等人,2014MayoClinicProceedings.89:52-9)它是分子异质性疾病，并且已鉴别了参与疾病发生和发展的信号通路中的一些关键变化。Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路在黑素瘤的病理发生中起重要作用(Gray-Schopfer等人,2007Nature.445:851-7；Lesinski等人,2013Futureoncology.9:925-7；Yajima等人,2012Dermatologyresearchandpractice.2012:354191)。Ras、Raf、PI3K或PTEN(PI3K抑制剂)中的突变可以导致ERK和AKT的持续激活，这反过来促进细胞存活和增殖。Dankort等人通过小鼠中BRafV600E的条件性黑素细胞-特异性表达对其进行了很好地证实，其中无小鼠发生黑素瘤，然而，当与Pten肿瘤抑制基因的沉默结合时，显示了100％的黑素瘤发生的外显率(Dankort等人,2009Naturegenetics.41:544-52)。这些病原性途径的阐明有利于开发靶向超激活的激酶的特异性抑制剂。尽管已在患有转移性黑素瘤的选择性患者组的治疗中证实了这些试剂的有效性，但是它们的有益作用通常是短暂的，因此急需鉴别其它治疗性靶标。在黑素瘤肿瘤，并且具体地在CD163+肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中，RNLS表达显著增加。在患有原发性黑素瘤的患者群组中，疾病-特异性存活与肿瘤块中RNLS的表达负相关，这表明了RNLS的病原性作用。使用siRNA、抗-RNLS抗体或RNLS来源的抑制肽的RNLS信号转导的抑制显著降低了黑素瘤细胞的体外存活。在异种移植小鼠模型中，使用单克隆抗体的抗-RNLS疗法显著抑制了黑素瘤肿瘤的生长。使用m28-RNLS(先前也称为1D-28-4)的治疗在CD163+TAM中导致内源RNLS表达以及总的和磷酸化的STAT3显著降低。肿瘤细胞中细胞凋亡的升高与p38MAPK介导的B细胞淋巴瘤2相关蛋白Bax的激活暂时相关。细胞周期抑制剂p21的表达升高，并且记录了细胞周期阻滞。这些结果表明通过CD163+TAM的RNLS产生的增加有利于通过激活STAT3的黑素瘤生长，并且RNLS信号转导的抑制在黑素瘤控制中具有潜在的治疗应用。用于体液和组织中肾酶检测的改善方法可以帮助肾病、心血管疾病和/或癌症的诊断和预后。然而，肾酶作为相关生物标志物的验证需要用于其检测的高选择性试剂。抗体-基技术广泛用于生物标志物的检测。迄今为止，仅有少量抗肾酶的试剂抗体，并且没有或仅有最低的鉴定。胰腺癌是最致死的赘生物之一，其导致全世界约330,000人死亡并且导致美国40,000人死亡(WorldCancerReport2014.WHOPress；2014)。胰癌难以检测，并且大部分病例是在晚期诊断的(Nolen等人,2014PLoSONE.9(4):e94928)。尽管在这种癌症的化疗使用中具有一些进展，但是该疾病仍极耐受所有药物疗法(Hidalgo等人,2010NewEnglandJournalofMedicine.362(17):1605-17)。胰腺癌个体的整体5-年存活率<5％(Hidalgo等人,2010NewEnglandJournalofMedicine.362(17):1605-17)，并且需要其它治疗靶标。胰腺癌的发生依赖于基因突变的逐步积累(Jones等人,2008Science.321(5897):1801-6)，其中一些导致异常的MAPK、PI3K和JAK-STAT信号转导。从最低限度发育不良的上皮细胞到发育异常，再到浸润性癌的发展反映了激活致癌基因(例如，KRAS2)或者使肿瘤抑制基因9(例如，CDKN2a/INK4a、TP53和DPC4/SMaD4)失活的基因突变的逐步积累(Hidalgo等人,2012AnnalsofOncology.23(suppl10):x135-x8)。95、90和75％的胰腺肿瘤分别在KRAS2、CDKN2a和TP53中具有突变。这些突变导致了以癌症生长为特征的持续和失调的增殖。已通过24个晚期胰腺导管腺癌(PDAC)的综合基因分析定义了PDAC中的突变全景图和核心信号通路(Jones等人,2008Science.321(5897):1801-6)。这些数据表明大部分PDAC含有主要为点突变并且影响约12个细胞信号通路的大量遗传变化。该研究还鉴别了541个在PDAC中，在90％的肿瘤中过表达至少10-倍的基因。这包括最近鉴别的蛋白肾酶(RNLS)、肿瘤或肿瘤来源的细胞系的2至4-倍的增加。RNLS是新型分泌的黄素蛋白(Xu等人,2005JClinInvest.115(5):1275-80；Desir等人,2012JAmHeartAssoc.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，包含特异性结合至肾酶的抗体或其结合部分。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171229 US 62/611,6091.一种组合物，包含特异性结合至肾酶的抗体或其结合部分。


2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分以至少10-6M的亲和力特异性结合至肾酶。


3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分特异性结合包含选自由SEQIDNO:1-8组成的组的氨基酸序列的肽。


4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述肾酶是人肾酶。


5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分选自由单克隆抗体、多克隆抗体、单链抗体、免疫缀合物、去岩藻糖基化抗体和双重特异性抗体组成的组。


6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述免疫缀合物包含治疗剂或检测部分。


7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分选自由人源化抗体、嵌合抗体、完全人抗体和抗体模拟物组成的组。


8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分包含选自由以下项组成的组中的至少一种：a)包含SEQIDNO:155的氨基酸序列的重链(HC)CDR1，b)包含选自由SEQIDNO:156、SEQIDNO:162和SEQIDNO:168组成的组的氨基酸序列的HCCDR2，c)包含选自由SEQIDNO:157和SEQIDNO:163组成的组的氨基酸序列的HCCDR3，d)包含SEQIDNO:152的氨基酸序列的轻链(LC)CDR1，e)包含SEQIDNO:153的氨基酸序列的LCCDR2，和f)包含选自由SEQIDNO:154和SEQIDNO:160组成的组的氨基酸序列的LCCDR3。


9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分包含含有SEQIDNO:155的氨基酸序列的HCCDR1、含有SEQIDNO:156的氨基酸序列的HCCDR2、含有SEQIDNO:157的氨基酸序列的HCCDR3、含有SEQIDNO:152的氨基酸序列的LCCDR1、含有SEQIDNO:153的氨基酸序列的LCCDR2，和含有SEQIDNO:154的氨基酸序列的LCCDR3。


10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分包含含有SEQIDNO:219的氨基酸序列的VH和含有SEQIDNO:221的氨基酸序列的VL。


11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或其结合部分包含选自由以下项...

【专利技术属性】
技术研发人员：加里·德西尔，布赖斯·纳尔逊，
申请(专利权)人：耶鲁大学，
类型：发明
国别省市：美国;US