抗血浆激肽释放酶抗体制造技术

本发明专利技术的名称为抗血浆激肽释放酶抗体。本文公开的是能够结合血浆激肽释放酶并抑制其活性的抗体。这样的抗体与血浆激肽释放酶的催化结构域中的一个或多个关键残基相互作用。所述抗体也可包含特定的重链互补决定区3(CDR)基序和任选地在重链可变区和轻链可变区中得某些位置的特定残基。

【技术实现步骤摘要】
抗血浆激肽释放酶抗体本申请为申请日是2014年3月14日、申请号是201480015180.9(PCT/US2014/027100)、专利技术名称为“抗血浆激肽释放酶抗体”的中国申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2013年3月15日提交的美国临时申请号61/791,822的申请日的权益，其全部内容通过引用并入本文。专利技术背景血浆激肽释放酶是接触系统的丝氨酸蛋白酶组分，并且是不同炎性疾病、心血管病、感染病(脓毒症)和肿瘤学疾病的潜在药物靶(SainzI.M.等，ThrombHaemost98，77-83，2007)。在暴露于外源或带负电荷的表面时通过因子XIIa激活接触系统，或在内皮细胞表面上通过脯氨酰羧肽酶激活接触系统(SainzI.M.等，ThrombHaemost98，77-83，2007)。血浆激肽释放酶的激活经其对因子XII的反馈激活增强了内在凝聚并且经产生促炎性九肽缓激肽而加重炎症。作为循环中的主要激肽原酶，血浆激肽释放酶主要负责在脉管系统中产生缓激肽。血浆激肽释放酶的主要天然抑制剂——C1-抑制剂蛋白(C1-INH)的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(HAE)。患HAE的患者遭受通常由未知的触发剂促发的疼痛性水肿的急性发作(ZurawB.L.等，NEnglJMed359，1027-1036，2008)。通过动物模型中药理学试剂的使用或遗传研究，血浆激肽释放酶-激肽系统(血浆KKS)已经牵涉到各种疾病。因此，非常感兴趣的是鉴定抑制血浆激肽释放酶活性的试剂，从而有效治疗与血浆激肽释放酶相关的疾病。
技术实现思路
本专利技术是基于由人血浆激肽释放酶(PKal)的催化结构域和DX2930(特异性结合人PKal并有效抑制其活性的抗体)的Fab片段形成的复合物的晶体结构的测定，以及血浆激肽释放酶(PKal)和抗体二者中对于两个分子之间的相互作用和/或对于pKal活性的抑制是关键性的残基的鉴定。因此，本公开特征在于能够抑制其活性(例如，至少50％)的抗PKal抗体、包括其的药学组合物以及药学组合物用于治疗与血浆激肽释放酶相关的疾病和病症的用途。在一个方面中，本公开提供了结合人血浆激肽释放酶(PKal)的分离的抗体，其中所述抗体与人PKal中的一个或多个氨基酸残基相互作用并且抑制其活性至少50％。与抗体相互作用的PKal中的氨基酸残基可以是V410、L412、T413、A414、Q415、R416、L418、C419、H434、C435、F436、D437、G438、L439、W445、Y475、K476、V477、S478、E479、G480、D483、F524、E527、K528、Y552、D554、Y555、A564、D572、A573、C574、K575、G576、S578、T596、S597、W598、G599、E600、G601、C602、A603、R604、Q607、P608、G609、V610和Y611，如在图2中指示的(粗体的和加下划线的)。在一些实例中，抗PKal抗体可结合PKal的表位，所述表位包括PKal中的下述区段之一(图2)：V410-C419、H434-L439、Y475-G480、F524-K528、Y552-Y555、D572-S578、T596-R604或Q607-Y611。在其他实例中，抗体相对于在位置R551、Q553、Y555、T558和R560包含一个或多个突变的PKal的突变体(例如，失活突变体)(例如，图5中显示的突变体2)优先结合PKal。在另一方面中，本公开提供了结合人血浆激肽释放酶的分离的抗体，其中抗体包括重链可变区，其包括互补决定区1(HCCDR1)、互补决定区2(HCCDR2)和互补决定区3(HCCDR3)。抗体中的HCCDR3包括基序X99R100X101G102X103P104R105X106X107X108X109X110X111(SEQIDNO：58)，其中X99是R或Q，X101是T、I、R、S或P，X103是V、I或L，X106是R或W，X107是D或N，X108是A、S、D、E或V，X109是F或L，X110是D、E或N，和X111是I、N、M或S。在一些实例中，X99可以是Q和X101可以是I、R、S或P。在其他实例中，X106可以是W和X111可以是N、M或S。可选地或另外，X101可以是I，X108可以是E，和X103可以是I或L。在仍其他实例中，X101可以是I和X103可以是I或L，或X103可以是I或L和X110可以是D、E或N。在一些实施方式中，本文所述的抗PKal抗体的重链可变区包括HCCDR1中的H31。可选地或另外，重链可变区包括框架区1(FR1)中的F27、F29或二者。本文所述的抗PKal抗体可进一步包括轻链可变区，其包括互补决定区1(LCCDR1)、互补决定区2(LCCDR2)和互补决定区3(LCCDR3)。在一些实施方式中，LCCDR2包括K50、L54、E55、S56或其组合。可选地或另外，轻链可变区进一步包括框架区3(FR3)中的G57。当必要时，轻链可变包区括框架区2(FR2)中的N45。本文所述的任何抗PKal抗体均可抑制PKal的活性至少50％(例如，至少80％、90％、95％或99％)。在一些情况下，抗体的表观Ki(Ki,app)小于约1nM(例如，小于约0.1nM，或小于约0.05nM)。可选地或另外，本文所述的抗PKal抗体对PKal的结合亲和力(KD)可小于10-6M(例如，小于10-7M、10-8M或10-9M)。本文所述的抗PKal抗体可以是全长抗体或其抗原结合片段。可选地或另外，抗体可以是人抗体或人源化的抗体。也在本公开内容范围内的是用于治疗与血浆激肽释放酶相关的各种疾病和病症的药学组合物，或用于制造用于治疗所述疾病和病症的药物的药学组合物。药学组合物每个包含如本文所描述的一种或多种抗PKal抗体和药学上可接受的载体。此外，本文所述的是治疗与血浆激肽释放酶相关的疾病的方法，包括向需要其的受试者施用有效量的药学组合物，所述药学组合物包含本文所述的一种或多种抗PKal抗体。在一些实例中，受试者是人患者，其被诊断患有所述疾病、怀疑具有所述疾病，或处在所述疾病的风险中。下面说明书中阐释本专利技术的一个或多个实施方式的细节。通过下述附图和若干实施方式的详细说明以及通过所附的权利要求，本专利技术的其他特征或优势将显而易见。附图说明下述附图形成本说明书的一部分并且被包括以进一步显示本公开的某些方面，其可通过参考这些附图的一个或多个结合本文呈现的具体实施方式的详细描述被好地理解。图1显示了衍生DX2930的亲本抗体M0162-A04的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的氨基酸序列，和它们与所指示的相应种系VH和VL基因的比对。指出了与种系序列相比，M0162-A04中的变化(粗体的)。图2显示了人血浆激肽释放酶的催化结构域(全长人PKal的残基391-638)的氨基酸序列(SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结合人血浆激肽释放酶的分离的抗体，其中所述抗体包括：/n轻链可变区，其包括序列为RASQSISSWLA的互补决定区1(LC CDR1)、序列为KASTLES的互补决定区2(LC CDR2)和序列为QQYNTYWT的互补决定区3(LC CDR3)，以及/n重链可变区，其包括序列为HYIMM的互补决定区1(HC CDR1)、序列为GIYSSGGITVYADSVKG的互补决定区2(HC CDR2)和互补决定区3(HC CDR3)，并且其中HC CDR3包括序列：/n(i)RRIGIPRRDAFDI(克隆X133-B02)；/n(ii)RRIGIPRRDEFDI(克隆X133-D06)；/n(iii)RRTGAPRRDAFDI(克隆X135-A01)；/n(iv)RRTGSPRRDAFDI(克隆X133-G05)；/n(v)RRTGLPRRDAFDI(克隆X133-F10)或/n(vi)RRTGIPRRDEFDI(克隆X135-A03)。/n

【技术特征摘要】
20130315 US 61/791,8221.结合人血浆激肽释放酶的分离的抗体，其中所述抗体包括：
轻链可变区，其包括序列为RASQSISSWLA的互补决定区1(LCCDR1)、序列为KASTLES的互补决定区2(LCCDR2)和序列为QQYNTYWT的互补决定区3(LCCDR3)，以及
重链可变区，其包括序列为HYIMM的互补决定区1(HCCDR1)、序列为GIYSSGGITVYADSVKG的互补决定区2(HCCDR2)和互补决定区3(HCCDR3)，并且其中HCCDR3包括序列：
(i)RRIGIPRRDAFDI(克隆X133-B02)；
(ii)RRIGIPRRDEFDI(克隆X133-D06)；
(iii)RRTGAPRRDAFDI(克隆X135-A01)；
(iv)RRTGSPRRDAFDI(克隆X133-G05)；
(v)RRTGLPRRDAFDI(克隆X133-F10)或
(vi)RRTGIPRRDEFDI(克隆X135-A03)。


2.权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体抑制PKal的活性至少80％。


3.权利要求1或2所述的分离的抗体，其中所述抗体的表观Ki(Ki,app)小于约1nM。


4.权利要求1-3任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体相对于包含在R551、Q553、Y555、T558和R...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·尼克森，J·A·肯尼斯顿，S·R·科莫，
申请(专利权)人：戴埃克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US