一种以TDPBP衍生载体辅助合成抗SARS八肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种三(4‑二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP及其衍生物作为多肽合成小分子载体的抗SARS八肽液相合成方法。以三(4‑二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP衍生物替代固相树脂，在偶联脱水剂的作用下与N‑端和侧链保护的精氨酸的C‑端连接；分离纯化后脱除N‑端Fmoc；再依次与N‑端保护的苯丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、缬氨酸和丙氨酸进行偶联和脱Fmoc反应，制备抗SARS八肽的前体；侧链脱保护并剪除载体，得到抗SARS八肽的固体。与目前已有的合成方法相比，本发明专利技术简便、快捷、节约、高效地大规模合成制备抗SARS八肽，而且TDPBP衍生的辅助基团易于回收并再生后循环利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。

【技术实现步骤摘要】
一种以TDPBP衍生载体辅助合成抗SARS八肽的方法
本专利技术属于生物有机化学领域中多肽的合成方法，涉及一种以TDPBP衍生载体辅助合成抗SARS八肽的方法，具体涉及一种基于三(4-二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP及其衍生物作为多肽合成小分子载体的抗SARS八肽液相合成方法。
技术介绍
1.多肽合成的经典方法1.1液相多肽合成(LPPS)早期，肽的合成是在溶液中进行的，需要对保护基进行仔细操作，并进行复杂的后处理和分离。[1]这种方法对于更长和更复杂的肽的合成可能存在一定问题，但是对于较短的肽仍然有效。[2]1.2固相多肽合成(SPPS)BruceMerrifield开创性地引入了固相合成(SPPS)，大大简化了试剂和溶剂去除的步骤。[3-5]这种方法为自动化打开了大门，因为随后的偶联反应可以通过一组重复的操作进行，[6-9]因此许多之前具有挑战性难以合成的多肽都被运用SPPS合成了。[10-13]最初，使用N-α-Boc保护的氨基酸构件(Boc/苄基)，Fmoc/tBu的方法后来才得到普及，主要是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三(4-二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP及其衍生物，其特征在于：分子结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.一种三(4-二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP及其衍生物，其特征在于：分子结构式为：





2.一种权利要求1所述三(4-二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP及其衍生物的合成方法，其特征在于步骤如下：
步骤A：将4,4'-二羟基二苯甲酮加至THF中溶解，在0℃搅拌下并加入缚酸剂Et3N，并在该温度下搅拌10分钟；向反应混合物中逐滴二苯基次膦酰氯并搅拌0.5h；反应结束后H2SO4溶液淬灭反应混合物，并减压浓缩；然后将残余物溶于乙酸乙酯中，用水洗涤3次，并用MgSO4干燥；通过柱色谱分离纯化CH2Cl2︰MeOH＝50︰1，得到4-(4'-羟基苯甲酰基)苯基二苯基次膦酸酯；
步骤B：将产物1加入含有缚酸剂Et3N的THF溶液中，在0℃下搅拌，并在该温度下搅拌10分钟；向反应混合液中滴加POCl3，并在室温搅拌2h；反应结束后用H2SO4溶液淬灭反应混合物，并减压浓缩；然后将残余物溶于乙酸乙酯中，用H2O洗涤3次，并用MgSO4干燥；浓缩后加入乙酸乙酯以溶解样品，并逐滴加入石油醚并不断搅拌；体系出现沉淀，将白色沉淀过滤并干燥，得到产物三(4'-二苯基膦酰基氧基苯甲酰基苯基)膦酸酯；
步骤C1：将产物2加入到CH3OH溶液中，在0℃下搅拌10min，将NaBH4分三批次分别添加到反应混合液中，在0℃密封条件下搅拌反应1小时；反应结束后加入饱和NH4Cl淬灭反应混合物；将混合液浓缩并将残留物溶于乙酸乙酯中，用H2O洗涤3次，用MgSO4干燥，浓缩后加入乙酸乙酯溶解样品；逐滴加入的石油醚并不断搅拌，体系出现白色沉淀，将沉淀过滤并干燥，得到纯化产物1：TDPBP-OH；
步骤C2：将产物2加入到乙醇和吡啶混合溶液中，然后将NH2OH·HCl加入上述混合液中，并回流反应5小时；反应结束后将反应混合物在减压下浓缩；将残余物溶于乙酸乙酯中，并用HCl洗涤3次，用MgSO4干燥并浓缩，样品滴加乙酸乙酯以溶解样品，并逐滴添加石油醚并不断地搅拌。溶液中出现沉淀，将沉淀过滤并干燥，得到纯化产物1，TDPBP＝N-OH；
或以NH2-NH2取代NH2OH·HCl得到得到纯化产物4：TDPBP＝N-NH2；
步骤C3：将产物2加入到氨的CH3OH溶液中，在室温下搅拌2小时，得纯化产物5：TDPBP-NH2；
步骤D：将产物3加入到二氯甲烷溶液中，在0℃下，将SOCl2滴加到上述的反应混合物中并在在室温下搅拌反应5h，反应结束后在40℃下减压浓缩，然后加入DCM继续浓缩浓缩3次，得到纯化产物3，TDPBP-Cl；
以HBr取代SOCl2处理化合物3，PDPBP-OH，:得纯化产物6：PDPBP-Br；
步骤F：采用NaHS处理纯化产物5PDPBP-Cl或纯化产物8PDPBP-Br得纯化产物7：PDPBP-SH；
所述石油醚为VEA/VPE＝1︰4。


3.一种采用权利要求1所述三(4-二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP衍生物TDPBP-X进行基团辅助抗SARS八肽的液相合成方法，其特征在于步骤如下：
步骤1、辅助基团TDPBP-X与N-端和侧链保护的氨基酸进行偶联：以辅助基团TDPBP-X替代固相多肽合成中的树脂，在脱水偶联剂的作用下与氨基酸在0～50℃下搅拌反应1～3小时，得到生成物A；所述N-端和侧链保护的氨基酸与TDPBP-X辅助基团的摩尔比为3～4:1；所述脱水偶联剂与N-端和侧链保护的氨基酸的配比为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；
所述辅助基团为三(4-二苯基膦酰氧基苯甲酰基苯基)磷酸酯TDPBP的衍生物TDPBP-X；
所述氨基酸采用N-端和侧链保护的精氨酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH的C-端与TDPBP-X辅助基团连接，生成化合物A，[Fmoc-Arg(Pbf)]3-TDPBP；
步骤2、分离纯化：向生成物A加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助TDPBP-辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物A与其他杂质分离；
对分离后的生成物A进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物A；
步骤3、脱除N-端Fmoc：将纯化的生成物A采用脱Fmoc试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物B，[H2N-Arg(Pbf)]3-TDPBP；向生成物B加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助TDPBP-辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物B与其他杂质分离；
对分离后的生成物B进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物B；
步骤4、以纯化的含有辅助基团TDPBP-的生成物B作为原料，再与芴甲氧羰基Fmoc保护的苯丙氨酸Fmoc-Phe-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物[H2N-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP；
以第一次重复后纯化的生成物[H2N-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP作为原料，再与芴甲氧羰基Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物[H2N-Gly-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP；
以第二次重复后纯化的生成物[H2N-Gly-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP作为原料，再与N-端和侧链保护的丝氨酸Fmoc-Ser(tBu)-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物[H2N-Ser(tBu)-Gly-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP；
以第三次重复后纯化的生成物[H2N-Ser(tBu)-Gly-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP作为原料，再与N-端和侧链保护的谷氨酰胺Fmoc-Gln(Trt)-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物[H2N-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Gly-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP；
以第四次重复后纯化的生成物[H2N-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Gly-Phe-Arg(Pbf)]3-TDPBP作为原料，再与芴甲氧羰基Fmoc保护的亮氨酸Fmoc-Leu-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物[...

【专利技术属性】
技术研发人员：钦传光，李海迪，张子鑫，王娟，王镇涛，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61