用于评估微生物对环境中铅离子解毒作用的生物检定方法技术

本发明专利技术涉及一种用于评估微生物对环境中铅离子解毒作用的生物检定方法，该方法通过本氏烟草种子在含铅微生物细胞悬液中的萌芽率表征受试微生物在含铅水环境中的解毒作用，通过本氏烟草幼苗在含铅土壤中生长的检定方法表征受试生物在含铅土壤环境中的解毒效果，可直观地反映不同受试微生物对环境中铅离子的吸附效果，从而对不同菌株的生物解毒能力进行表征。以本发明专利技术提供的生物检定方法对受试菌株的铅离子固定能力进行评估，更接近于真实的重金属铅污染环境的生物修复，同时，本发明专利技术也适用于除铅以外的其他金属离子耐受菌株生物解毒作用的相关研究，对于实现重金属污染环境的原位修复具有深远意义。

【技术实现步骤摘要】
用于评估微生物对环境中铅离子解毒作用的生物检定方法
本专利技术涉及一种用于评估微生物对环境中铅离子(Pb2+)解毒作用的生物检定方法，该方法基于本氏烟草在水环境中的萌发和在土壤环境中的植株生长状况，可直观地表征受试微生物对环境中Pb2+的固定效果。
技术介绍
早在公元前3000年左右，人类就已经发现了重金属铅(Pb)的存在，它还被用来制造电池、电缆和弹药，有时还被用作汽油添加剂。一些铅的化合物还被当作原材料用于合成橡胶、玻璃、颜料等制品。金属铅还具有优良的耐腐蚀与耐酸碱性能，从而广泛应用于制造化工和冶金设备等行业。国民经济的快速发展使得我国工业对铅的需求不断增加，如今我国铅的消费量已超过美国，居世界第一位。同时，铅作为我国土壤污染的五大重金属之一，对环境造成的污染问题越来越严重。据统计，我国约有1.3104hm2耕地受到金属铅的污染，导致粮食大幅减产达到1.0107吨，而且，近年来，一些食用作物中也经常被检测出铅等重金属的含量超标。铅已被世界卫生组织(WHO)认为是对儿童造成最严重威胁的环境毒物，婴幼儿主要通过土壤介质接触铅。目前公认的净化铅污本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于评估微生物对环境中铅离子解毒作用的生物检定方法；其特征是以本氏烟草为观测对象，通过本氏烟草种子在含铅微生物细胞悬液中的萌芽率表征受试微生物在含铅水环境中的解毒作用；通过本氏烟草幼苗在含铅土壤中生长的检定方法表征受试生物在含铅土壤环境中的解毒效果，从而直观地反映微生物对环境中Pb

【技术特征摘要】
1.用于评估微生物对环境中铅离子解毒作用的生物检定方法；其特征是以本氏烟草为观测对象，通过本氏烟草种子在含铅微生物细胞悬液中的萌芽率表征受试微生物在含铅水环境中的解毒作用；通过本氏烟草幼苗在含铅土壤中生长的检定方法表征受试生物在含铅土壤环境中的解毒效果，从而直观地反映微生物对环境中Pb2+的固定能力。


2.如权利要求1所述的方法，其特征是，用于铅离子(Pb2+)吸附的受试微生物菌株包括野生型宿主菌E.coliBL21(DE3)以及三株表面展示工程菌BL21(pR-FL)、BL21(pR691-FL)和BL21(pD-FL)；其中BL21(pR-FL)中的重组质粒pR-FL核苷酸序列如SEQIDNo.1；BL21(pR691-FL)中的重组质粒pR691-FL核苷酸序列如SEQIDNo.2；BL21(pD-FL)中的重组质粒pD-FL核苷酸序列如SEQIDNo.3。


3.如权利要求1所述的方法，其特征是，本氏烟草种子在含铅微生物细胞悬液中的萌芽率表征步骤如下：
(1)受试微生物菌悬液制备：根据受试微生物对生长条件的要求，选择对应的培养基和蛋白诱导剂，诱导培养24h后用双蒸水(ddH2O)洗涤制成OD600＝3的细胞悬液；
(2)Pb2+添加：分别在各个受试微生物细胞悬液和同等体积的蒸馏水中添加500-2000μM的Pb2+并混合均匀，制成各个受试微生物含铅细胞悬液和不含微生物的Pb2+水溶液；
(3)种子排布：将预先灭菌并裁剪好的的滤纸平放在无菌培养皿的底部，并将精确计数的本氏烟草种子均匀排布在滤纸上；
(4)烟草萌发：将步骤(2)中制备好的受试微生物含铅细胞悬液和不含微生物的Pb2+水溶液分别添加至步骤(3)的培养皿中，使液面高度刚好覆盖种子，然后将培养皿在白光照射下于25-28℃孵育；
(5)萌芽率计算：当种皮破裂可见时，认为种子已经萌发...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾晓强，李莹，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12