胰岛内源胰岛素分泌的检测方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种胰岛内源胰岛素分泌的检测方法及应用，涉及生物技术领域，本发明专利技术提供的胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，包括将胰岛贴壁培养后加入锌离子荧光染料共孵育并置于显微镜下，然后刺激贴壁的胰岛细胞分泌胰岛素，观察胰岛内源胰岛素的分泌。通过贴壁培养胰岛，并利用锌离子与胰岛素形成晶体结构并共释放的特性，加入锌离子荧光染料共孵育后进行镜下观察，实现了在胰岛上实时观察胰岛素囊泡的分泌个数。通过实时监测，能够大量缩短检测的时间，有效提高检测效率。

【技术实现步骤摘要】
胰岛内源胰岛素分泌的检测方法及应用
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种胰岛内源胰岛素分泌的检测方法及应用。
技术介绍
目前常用的检测胰岛素分泌的技术主要包括酶联免疫吸附(ELISA)、放射性免疫(RIA)、全内反射荧光成像(Totalinternalreflectionfluorescencemicroscope，TIRFM)、膜电容检测(Pacthclamp)、SRB双光子成像等。酶联免疫吸附和放射性免疫技术利用抗原-抗体免疫反应，特异性检测溶液中的胰岛素，能精确地检测到pg级的胰岛素分泌，但检测费用昂贵，检测流程耗时长。利用SRB(SulforhodamineB，SRB)染料非选择性标记囊泡的Ω结构，可实现胰岛胰岛素囊泡分泌观察，但所观察到的分泌一定程度上包含了胞吞囊泡，以及Alpha细胞和Delta细胞的分泌囊泡。且只能检测到少量的分泌囊泡(几十至200个)。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，以至少缓解现有技术中存在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，所述方法包括：将胰岛贴壁培养后加入锌离子荧光染料共孵育并置于显微镜下，然后刺激贴壁的胰岛β细胞分泌胰岛素，观察胰岛内源胰岛素的分泌。/n

【技术特征摘要】
1.一种胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，所述方法包括：将胰岛贴壁培养后加入锌离子荧光染料共孵育并置于显微镜下，然后刺激贴壁的胰岛β细胞分泌胰岛素，观察胰岛内源胰岛素的分泌。


2.根据权利要求1所述的胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，所述显微镜包括高速转盘共聚焦显微镜、双光子显微镜或高内涵成像系统。


3.根据权利要求1所述的胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，所述锌离子荧光染料包括不透膜锌离子荧光染料，优选包括FluoZin-1或RhodZin-3染料。


4.根据权利要求1所述的胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，将胰岛置于玻璃底的培养容器中进行贴壁培养，促进胰岛贴壁。


5.根据权利要求4所述的胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，贴壁培养所用的贴壁培养基包括含有葡萄糖、FBS和双抗的RPMI1640培养基；优选地，所述贴壁培养基包括含有5～8mM葡萄糖、10％～15％(v/v)FBS和100U双抗的RPMI1640培养基。


6.根据权利要求4所述的胰岛内源胰岛素分泌的检测方法，其特征在于，所述贴壁培养的时间为18-36小时，所述贴壁培养的温度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈良怡，彭晓红，王丽芬，杨璐，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11