一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用，通过体外实验，构建携带敲降CIRBP的shRNA的慢病毒和对照空载病毒，并用病毒感染人前列腺癌细胞系（PC3和LNCaP），然后通过单克隆传代，得到稳定敲降CIRBP和对照病毒感染的PC3和LNCaP细胞。然后通过western blot方法检测对照组和敲降组CIRBP的表达水平，证实敲降组确实下调了CIRBP的表达。然后检测敲降CIRBP后对前列腺癌细胞系PC3和LNCaP的影响，我们发现敲降CIRBP后可以显著抑制两种前列腺癌细胞的迁移和侵袭。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用。
技术介绍
前列腺癌是目前全世界男性第二大癌症，每年造成超过25万人死亡。随着社会老龄化、人口城市化、膳食结构西方化，我国前列腺癌发病率呈显著增长趋势，对男性的生命健康构成威胁。临床上，通常将前列腺癌分为局部型和进展型。局部型前列腺癌可以通过睾丸切除术等进行根治性治疗，五年生存率较高，而进展型前列腺癌无法根治。由于我国男性缺乏前列腺特异性抗原（PSA）的筛查，前列腺癌患者在就诊时病灶多已经发生转移发展为进展型前列腺癌。此类前列腺癌一般只能通过雄激素去势疗法进行治疗，虽然具有一定的疗效，但对于肿瘤的抑制一般只能维持1.5至4年。随着疾病的进展，多数病人逐渐发展为去势抵抗型前列腺癌，使雄激素去势疗法失去治疗效果。化疗通常作为激素难治性前列腺癌或远处转移的晚期前列腺癌患者的治疗措施，用于延长患者的生命。然而，虽然近年来化疗方案不断改进，新的化疗药物层出不穷，但抗前列腺癌药物依然普遍存在靶向性差和毒性大等问题，极大程度上限制了药效的发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的一种靶向CIRBP在抗前列腺癌药物中的应用，其特征在于步骤为：
第一步，细胞系构建：将293T细胞传至T75的培养瓶中，细胞贴壁后换为无抗生素培养基培养至细胞密度80%-90%时用脂质体2000进行转染备用；
第二步，配质粒与opti-DMEM的混合物：加入载体质粒20μg与12μg包装质粒PHelper1.0和10μg包装质粒PHelper2.0后加opti-DMEM将体积补足至1.5mL；配脂质体与opti-DMEM的混合物：脂质体40µL每瓶加opti-DMEM将体积补足至1.5mL，放置五分钟；将脂质体与opti-DMEM的混合物加入质粒与opti-DMEM的混合物中，混匀，孵育20分钟，得脂质体-DNA复合物；
第三步：为293T细胞换无抗生素培养基，每瓶12mL，将第二步孵育好的脂质体-DNA复合物加入培养瓶中，每瓶3mL，混匀，4-6小时后换为有抗生素培养基转染；
第四步：转染后48小时和72小时分别收集shCIRBP和EV病毒，然后用0.45µm滤器过滤，分装后冻于-80℃冰箱，在六孔板中按密度为5*104每孔接种PC3和LNCaP细胞，待细胞融合度在40-60%时加入慢病毒，12小时后更换培养液，72小时后用荧光显微镜检测感染效率，然后进行单细胞传代，构建PC3-shCIRBP、PC3-EV、LNCaP-shCIRBP和LNCaP-EV细胞系；
第五步，细胞划痕实验：首先在6孔板背面，使用marker笔均匀的划横线，每隔0.5~1cm画一条，横穿过孔，每孔至少穿过5条线；6孔板上将PC3-shCIRBP、PC3-EV、LNCaP-shCIRBP和LNCaP-EV细胞系接种，每孔12×104个细胞，每种细胞系设3个复...

【专利技术属性】
技术研发人员：董福禄，卢婷婷，王锐，陈亦凡，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32