一种基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法技术

本发明专利技术涉及基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法，本发明专利技术不用将回接的病斑组织再次进行培养，而是采用扫描电子显微镜观察，取回接果实病斑处组织，在无菌条件下放置于扫描电子显微镜的载物台上面，使用导电胶布固定，在冷台温度‑30℃条件下，电压5KV，采用SE模式观察成像，在700×的放大倍数下可清晰观察到果实组织中的菌丝情况，本发明专利技术可降低检测时间，同时可更加直观准确地判定果实组织是否受真菌浸染，同时不受培养基的环境影响，从而得出准确的检测结果。

【技术实现步骤摘要】
一种基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法
本专利技术涉及猕猴桃病菌检测领域，具体涉及一种基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法。
技术介绍
对于病原真菌致病性研究是猕猴桃果实腐烂病病害研究和防治的重要基础工作。目前行业内常用的步骤主要分为病菌分离纯化培养、病菌回接、致病力测定等几个步骤，最后将回接发病病斑处的组织再次接回到培养基上进行培养，得到相应的菌落，然后根据菌落形态判断猕猴桃果实腐烂病病斑处的病菌种类是否与原始菌种一致，从而确定果实腐烂病致病的病原真菌。以上方式存在的缺陷在于整个检测过程时间较长，其中最后的病斑组织菌落培养至少需要5~7天，这就使得整个检测过程时间增强；其次，病斑也有可能不是因为病原真菌侵染而导致果实腐烂症状，有可能是因为物理刺伤、细菌浸染等原因出现相似腐烂病症，再者，在接回的病菌中可能存在多种菌种，但最后由于培养基的问题造成部分菌种死亡，也就是因为环境的改变影响了菌种的自然发育，综上，导致最终的检测结果存在误差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基于扫描电子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法，其特征在于，该方法包括：/n1）病原真菌分离纯化，切开猕猴桃病斑果皮挑取病健交界处组织放入PDA培养基上培养，得到病原真菌单菌株，对其进行纯化处理，纯化后的菌株保存备用；/n2）致病力测定，选取健康的猕猴桃果实，选取适龄的病原真菌进行回接，放入培养箱培养；/n3）扫描电子显微镜观察，取回接果实病斑处组织，在无菌条件下放置于扫描电子显微镜的载物台上面，使用导电胶布固定，在冷台温度-30℃条件下，电压5KV，采用SE模式观察成像，在700×的放大倍数下可清晰观察到果实组织中的菌丝情况。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法，其特征在于，该方法包括：
1）病原真菌分离纯化，切开猕猴桃病斑果皮挑取病健交界处组织放入PDA培养基上培养，得到病原真菌单菌株，对其进行纯化处理，纯化后的菌株保存备用；
2）致病力测定，选取健康的猕猴桃果实，选取适龄的病原真菌进行回接，放入培养箱培养；
3）扫描电子显微镜观察，取回接果实病斑处组织，在无菌条件下放置于扫描电子显微镜的载物台上面，使用导电胶布固定，在冷台温度-30℃条件下，电压5KV，采用SE模式观察成像，在700×的放大倍数下可清晰观察到果实组织中的菌丝情况。


2.根据权利要求1所述的基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法，其特征在于，所述培养基包括新鲜马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g,加洁净水定容至1L后，置于蓝色丝口瓶内，在121℃条件下灭菌20min。


3.根据权利要求2所述的基于扫描电子显微镜的猕猴桃果实腐烂病病菌检测方法，其特征在于，所述1）的详细步骤为：
11）先用75%酒精喷施发病猕猴桃果实表面，然后放置于生物安全柜洁净台面上；
12）采用无菌风吹干猕猴桃果实后用无...

【专利技术属性】
技术研发人员：何利钦，庄启国，郑晓琴，李明章，张茜，王丽华，李峤虹，王凤琪，李燕，
申请(专利权)人：四川省自然资源科学研究院，
类型：发明
国别省市：四川;51