微生物分离和检测制造技术

用于将含有非微生物细胞的样品中的微生物与非微生物细胞分离的方法包括将所述样品用颗粒孵育以形成颗粒‑微生物复合物，然后将所述颗粒‑微生物复合物与所述非微生物细胞分离。这些方法用于检测也包含非微生物细胞的样品中是否存在微生物。特定的试剂和试剂组合增强混合样品中的微生物的选择性捕获。还提供了对应的组合物和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】微生物分离和检测专利
本专利技术通常涉及在样品中将微生物与非微生物细胞分离的领域和检测样品中是否存在微生物的方法。该方法通常依赖于测量样品中存在的微生物酶活性(如果有)，其中样品还包含酶活性的非微生物来源。本专利技术依赖于有效隔离酶活性的微生物来源。因此，本专利技术的方法能够确定样品，例如未纯化的血液、血液培养物和其他体液中是否存在微生物病原体。本专利技术还涉及包含用于实施所述方法的试剂的试剂盒。专利技术背景在许多情况下，测量与细胞活力相关的某些分子的存在和水平很重要。例如，测量ATP水平在哺乳动物细胞中可用于生长分析和毒理学目的。培养方法可用于检测少量细菌，但这种技术需要几天才能完成，尤其是在尝试检测少量细菌以及检测生长较慢的微生物的时候。还提出了作为活力指标来检测腺苷酸激酶(SquirrellDJ,MurphyMJ,LeslieRL,GreenJCD:AcomparisonofATPandadenylatekinaseasbacterialcellmarkers:correlationwithagarplatecounts(作为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将含有非微生物细胞的样品中的微生物与非微生物细胞分离的方法，所述方法包括：/na)将所述样品用颗粒孵育以形成颗粒-微生物复合物，其中所述孵育步骤在聚茴香脑磺酸钠和/或选择性裂解所述样品中的非微生物细胞同时保持所述样品中存在的微生物完整的试剂的存在下进行；以及/nb)将所述颗粒-微生物复合物与所述非微生物细胞分离。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180403 GB 1805479.11.一种将含有非微生物细胞的样品中的微生物与非微生物细胞分离的方法，所述方法包括：
a)将所述样品用颗粒孵育以形成颗粒-微生物复合物，其中所述孵育步骤在聚茴香脑磺酸钠和/或选择性裂解所述样品中的非微生物细胞同时保持所述样品中存在的微生物完整的试剂的存在下进行；以及
b)将所述颗粒-微生物复合物与所述非微生物细胞分离。


2.一种将含有非微生物细胞的样品中的微生物与非微生物细胞分离的方法，所述方法包括：
a)将所述样品用颗粒孵育以形成颗粒-微生物复合物；以及
b)将所述颗粒-微生物复合物与所述非微生物细胞分离；
其中所述颗粒具有未被以下中的任何一者包覆的外表面：(i)抗体，(ii)碳水化合物，(iii)由载脂蛋白H蛋白衍生的肽，(iv)甘露糖结合凝集素蛋白。


3.一种检测也包含非微生物细胞的样品中是否存在微生物的方法，所述方法包括：
a)将所述样品用颗粒孵育以形成颗粒-微生物复合物，其中所述孵育步骤在聚茴香脑磺酸钠和/或选择性裂解所述样品中的非微生物细胞同时保持所述样品中存在的微生物完整的试剂的存在下进行；
b)将所述颗粒-微生物复合物与所述非微生物细胞分离；以及
c)检测所述颗粒-微生物复合物中是否存在微生物。


4.一种检测也包含非微生物细胞的样品中是否存在微生物的方法，所述方法包括：
a)将所述样品用颗粒孵育以形成颗粒-微生物复合物；
b)将所述颗粒-微生物复合物与所述非微生物细胞分离；以及
c)检测所述颗粒-微生物复合物中是否存在微生物；
其中所述颗粒具有未被以下中的任何一者包覆的外表面：(i)抗体，(ii)碳水化合物，(iii)由载脂蛋白H蛋白衍生的肽，(iv)甘露糖结合凝集素蛋白。


5.根据权利要求2或权利要求4所述的方法，其中所述孵育步骤在聚茴香脑磺酸钠和/或选择性裂解所述样品中的非微生物细胞同时保持所述样品中存在的微生物完整的试剂的存在下进行。


6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中步骤(c)包括：(i)检测与所述微生物相关的核酸分子的酶活性，(ii)通过细胞计数或显微术直接检测所述微生物，(iii)细胞培养后检测所述微生物，(iv)通过核酸扩增检测所述微生物，或(v)通过核酸测序检测所述微生物。


7.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中步骤(c)包括以下步骤：
i)将所述颗粒-微生物复合物中的所述微生物裂解；
ii)将裂解物用核酸分子孵育，所述核酸分子充当用于所述微生物的核酸修饰活性的底物；以及
iii)具体确定由所述核酸修饰酶对所述底物核酸分子的作用产生的经修饰的核酸分子是否存在，以指示所述微生物是否存在。


8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(i)包括加入包含所述底物核酸分子的裂解试剂。


9.根据权利要求7或权利要求8所述的方法，其中所述核酸修饰酶包括DNA或RNA聚合酶，任选地其中所述DNA聚合酶为DNA聚合酶I。


10.一种检测受试者中是否存在微生物感染的方法，所述方法包括对来自所述受试者的样品进行权利要求3至9中任一项所述的方法。


11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括洗涤所述分离的颗粒-微生物复合物以除去非微生物细胞或裂解物。


12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b)还包括从所述颗粒-微生物复合物中除去所述非微生物细胞。


13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b)使用磁场或离心进行。


14.一种组合物，所述组合物包含：
a)能够与微生物形成复合物的颗粒，其中所述颗粒具有外表面；
b)聚茴香脑磺酸钠；以及
c)至少一种选择性裂解样品中的非微生物细胞同时保持所述样品中存在的微生物完整的试剂。


15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述组合物还包含含有非微生物细胞并且可能含有微生物细胞的样品。


16.一种用于进行权利要求1至13中任一项所述的方法的试剂盒，所述试剂盒包含：
a)能够与微生物形成复合物的颗粒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·洛克哈特，保罗·杰伊，詹姆斯·图尔纳，安德鲁·罗杰斯，马修·克劳，威廉·缪伦，
申请(专利权)人：动力生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB