青霉素G酰基转移酶高量产菌株选育及发酵方法技术

本发明专利技术属于生物发酵领域，具体涉及一种青霉素G酰基转移酶高产菌株选育及发酵方法。所述方法包括如下步骤：将青霉素G酰基转移酶产生菌用灭菌水进行梯度稀释，培养基上恒温培养过夜；将符合菌落形态标准的菌落接种于摇瓶培养基中恒温培养；将符合菌丝形态和OD

【技术实现步骤摘要】
青霉素G酰基转移酶高量产菌株选育及发酵方法
本专利技术属于生物发酵领域，具体涉及一种青霉素G酰基转移酶高产菌株及该菌株的选育及利用其发酵生产青霉素G酰基转移酶的方法。
技术介绍
青霉素G酰基转移酶是应用于酶法阿莫西林生产中的关键酶，其以6-APA和D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐为基本原来，经缩合反应生成阿莫西林，从而获得β-内酰胺抗生素。国内外文献表明，天然菌株的青霉素G酰基转移酶的酶活性普遍偏低，几乎没有工业应用价值，目前报道的各类天然的菌株最高活力在40U/mL，仍有很大的提升空间。青霉素G酰基转移酶在医药中间体的生产、多肽的合成中，都发挥了关键作用，具有广泛的市场需求和发展前景，是工业上非常重要的生物催化剂，是一种重要的医药工业用酶。生物酶具有反应专一性、高效性和温和性等特点，在化工医药、轻工食品、环境保护等领域发挥着巨大作用，已经成为工业生产的主力军。菌种性能的提高主要通过人工诱导和自然选育，随着基因工程的发展，科研工作者已将工作重点集中在构建基因工程菌以提高青霉素G酰基转移酶的表达活性。在1987年科学界报道了青霉素G酰基转移酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高青霉素G酰基转移酶菌株产量的菌种选育及发酵的方法，所述方法包括如下步骤：/n(1)青霉素G酰基转移酶产生菌用灭菌水进行梯度稀释，得到稀释液；/n(2)将步骤(1)中所述稀释液于培养基上恒温培养过夜；/n(3)将步骤(2)中符合菌落形态标准的菌落，接种于摇瓶培养基中恒温培养；/n(4)将步骤(3)中符合菌丝形态和OD

【技术特征摘要】
1.一种提高青霉素G酰基转移酶菌株产量的菌种选育及发酵的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)青霉素G酰基转移酶产生菌用灭菌水进行梯度稀释，得到稀释液；
(2)将步骤(1)中所述稀释液于培养基上恒温培养过夜；
(3)将步骤(2)中符合菌落形态标准的菌落，接种于摇瓶培养基中恒温培养；
(4)将步骤(3)中符合菌丝形态和OD600值标准的摇瓶，低温保存；
(5)将步骤(4)中的菌丝接种于种子瓶培养基中恒温培养，控制种子瓶OD600值标准，然后再次接入种子瓶培养基中，相同条件下进行扩大培养；
(6)制备发酵罐培养基，并配制补料瓶溶液，进行发酵扩大培养适时补充料瓶溶液，并补入诱导剂。


2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(2)中，所述培养基为：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1％、氯化钠1％、琼脂粉1.5％，PH值7.2～7.3。


3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)中摇瓶培养基或步骤(5)中种子瓶培养基为：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1％、氯化钠1％、PH值7.2-7.3。


4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(6)中，所述补料瓶溶液为：50％甘油。


5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(6)中，所述诱导剂为IPTG。


6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(6)中，所述发酵罐培养基为：酵母浸膏5-20g/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勤，廖挺，强生平，田喜珍，
申请(专利权)人：联邦制药内蒙古有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15