一种提取发酵溶液中低含量红霉素A的方法技术

本发明专利技术涉及制药领域，具体涉及一种提取发酵溶液中低含量红霉素A的方法，所述方法包括：(1)发酵液陶瓷膜过滤；(2)滤液溶媒萃取，饱和氯化钠洗涤轻相；(3)成盐结晶：轻相中加入水，加酸溶液调节pH，再加入硫氰酸盐，与硫氰酸反应，生成硫氰酸红霉素，用醋酸溶液继续调节pH，析出硫氰酸红霉素,过滤，热水洗涤，过滤，干燥，得到硫氰酸红霉素。发酵液中红霉素A组分低于75％，经过本发明专利技术方法处理后，得到符合要求的硫氰酸红霉素成品，且收率达到80％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种提取发酵溶液中低含量红霉素A的方法
本专利技术涉及制药领域，具体涉及一种提取发酵溶液中低含量红霉素A的方法。
技术介绍
红霉素是一类大环内脂类抗生素，主要包括红霉素A、红霉素B、红霉素C、红霉素D、红霉素E和红霉素F等6种组分，其中以红霉素A的抗菌活力最强。红霉素通常采用微生物发酵的方法进行生产，在发酵培养的过程中，发酵液中的红霉素杂质组分，与主要成分红霉素A同时产生，发酵工艺不同，发酵液中的红霉素组分含量不同。发酵异常时，红霉素A组分的含量较低，低于70％，主要的杂质组分红霉素B、C、D较高。传统的提取工艺，不能有效分离杂质组分。目前主要有两种工艺提取发酵液中的红霉素：工艺1：发酵液微滤、滤液树脂除杂、纳滤浓缩结晶，重结晶。工艺2：发酵液板框过滤、溶媒萃取、萃取液除杂、萃取液结晶。传统的红霉素发酵液过滤使用微滤膜或板框，过滤精度低，滤液含有大量蛋白和色素，需使用树脂进行净化处理，工艺复杂，生产废水量大。传统的提取方法，使用溶媒萃取，主要用的溶剂为醋酸丁酯或含有醋酸丁酯的混合溶媒，在硫氰酸红霉素结晶时，得到的硫氰酸红霉素A含量在80％以下，杂质红霉素B+C大于3.0％，结晶过程总收率小于85％。CN103044508B公开了一种一种从红霉素发酵液中分离大环内酯类抗生素的结晶硫氰酸红霉素提取方法，该方法采用超滤膜过滤，滤液通过纳滤浓缩，将浓缩液中流加硫氰酸红霉素得到粗盐后，将粗盐溶解在醋酸戊酯或二氯甲烷等预溶剂中。或将浓缩液中红霉素在碱性条件下萃取至预溶剂中，然后将进行活性炭脱色，在脱色液中加入丙酮，最后加入硫氰酸盐进行结晶。该专利使用多种溶媒，溶媒回收分离困难，且在溶媒相中脱色，溶媒损耗较大。使用两次结晶，收率损失大。专利CN105348340A公开了一种硫氰酸红霉素的制备方法，该方法在萃取后的轻相使用饱和氯化钠进行脱水后，使用活性炭进行脱色，然后加入硫氰酸盐溶液，与红霉素成盐后，加入复合溶媒，使用醋酸溶液调节pH结晶得到硫氰酸红霉素。该专利在溶媒中使用活性炭，不宜回收，溶媒损失较大，且成盐时加入复合溶媒，溶媒成分较多，分离困难。CN201610177576公开了一种高纯度红霉素A的制备方法，该方法取硫氰酸红霉素，在有机溶剂和水组成的两相中，加碱溶解，取有机相，加入水进行洗涤，在有机相中析出红霉素A碱，过滤干燥后，再将干粉以水为溶剂进行重结晶，得到高纯度的红霉素A。该方法以硫氰酸红霉素为原粉，溶解后，结晶出红霉素A碱，再进行重结晶，得红霉素A。
技术实现思路
针对以上技术现状，本专利技术提供一种提取发酵液中低含量红霉素A的方法，该方法得到的成品，红霉素A的含量大于80％，红霉素B+C的含量小于3％，其它杂质含量均符合药典标准。本方法不使用活性炭，溶媒回收时，向母液加入纯化水洗涤，分相取轻相，即可重复用于滤液的萃取，回收方便。本专利技术所述从发酵溶液中提取低含量红霉素A的方法，其包括：(1)过滤：发酵液通过截留分子量3万-100万滤膜过滤，收集滤液；(2)萃取：滤液用有机溶媒萃取，然后用碱调节pH值8.0-12、搅拌至分相，轻相用饱和氯化钠洗涤，得轻相溶液；(3)结晶：向轻相溶液中加入水，控制温度，然后加入酸溶液调节pH,再加入硫氰酸盐反应，加完后继续反应，然后使用酸溶液继续调节pH值至3.0-6.0、结晶、过滤、干燥，得到硫氰酸红霉素。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(1)中滤膜截留分子量为3万-100万，优选范围为3万-10万，优选滤膜为陶瓷滤膜；过滤时温度为5-20℃，优选为8-12℃。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(2)中有机溶媒的用量为有机相中红霉素浓度在25000-45000u/ml，优选28000-32000u/ml；优选有机溶媒为醋酸丁酯、丁醇、辛醇、煤油、乙酸乙酯、或它们中的一种或者几种；优选醋酸丁酯、辛醇或者煤油。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(2)中碱为氢氧化钠、氢氧化钾；优选为氢氧化钠溶液，进一步优选氢氧化钠溶液浓度为15-25％。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(2)中进一步pH值在8.0-12，pH优选9.5-11.5；萃取时温度为20-40℃，优选为30-35℃。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(2)饱和氯化钠溶液的用量为5-50％(v/v)，优选为10-30％。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：结晶时，在轻相中加入纯化水，用量为0.1～2BV，优选0.8-1.2BV；作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：温度为20～60℃，优选30-40℃；作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：加入纯化水后，用酸溶液调节pH至6.5-7.5。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中硫氰酸钠溶液的浓度为10-40％，优选15-25％；作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：所述硫氰酸钠与红霉素A的摩尔比为1.0～2.0：1，优选为1.1～1.3：1；作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：加入时间为5min-2h，优选50-70min。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：加完硫氰酸盐后，继续反应0.5～1h。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：成盐反应完毕，用醋酸溶液调节终点至pH值为3～6，优选终点pH值为5-6。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中的酸为醋酸；优选醋酸的浓度为15-25％，进一步优选为20％。作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：滤饼用40～80℃的热水洗涤，热水最佳温度为：45-55℃；作为实施方案之一，本专利技术所述步骤(3)中进一步包括：过滤在真空-0.08MPa以下，75～80℃干燥，得符合规定的硫氰酸红霉素。作为实施方案之一，本专利技术从发酵溶液中提取低含量红霉素A的方法包括：(1)过滤红霉素发酵液放罐后，进入陶瓷膜过滤，陶瓷膜截留分子量为3万～100万，最优截留范围为3万-10万；。过滤过程料液温度为5-20℃，优选8-12℃；(2)萃取滤液中加入萃取剂，所述萃取剂为醋酸丁酯、丁醇、辛醇、煤油、乙酸乙酯或它们中的一种或者几种，优选醋酸丁酯、辛醇或煤油；萃取剂用量为有机相中红霉素含量为25000-45000u/ml，优选28000～32000u/ml；用碱液调节pH在8.0-12，pH优选9.5-11.5；温度为20-40℃，优选30-35℃；所述碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾，优选使用氢氧化钠溶液，浓度为15-25％；搅拌10min后分相，取轻相；轻相使用5-50％(v/v)的饱和氯化钠溶液进行洗涤，用量优选为10-30％，搅拌10min,分相，取轻相；(3)结晶在轻相中加入0.1～2BV的纯化水，优选0.8-1.2BV，温度为20～60℃，优选30-40℃，用15-25％，优选20％醋酸水溶液，调节pH＝6.5～7.5；加入硫氰酸钠溶液，硫氰酸钠溶液的浓度为10-40％，优选15-25％；硫氰酸钠的用量为硫氰酸钠：红霉素A摩尔比为1.0～2.0：1，优选1.0～1.5：1，进一步优选1.1-1.3：1；加入时间为5min-2h、优选50-70min；加完后继续反应0.5～1h，用15-25％，优选20％的醋酸溶液调节终点至pH＝3～6，优选终点本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提取发酵溶液中低含量红霉素A的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)过滤：发酵液通过截留分子量3万‑100万滤膜过滤，收集滤液；(2)萃取：滤液用有机溶媒萃取，然后用碱调节pH值8.0‑12、搅拌至分相，轻相用饱和氯化钠洗涤，得轻相溶液；(3)结晶：向轻相溶液中加入水，控制温度，然后加入酸溶液调节pH值,再加入硫氰酸盐反应，加完后继续反应，然后使用酸溶液继续调节pH值至3.0‑6.0、过滤、滤饼用热水洗涤，过滤，干燥，得到硫氰酸红霉素。

【技术特征摘要】
1.一种提取发酵溶液中低含量红霉素A的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)过滤：发酵液通过截留分子量3万-100万滤膜过滤，收集滤液；(2)萃取：滤液用有机溶媒萃取，然后用碱调节pH值8.0-12、搅拌至分相，轻相用饱和氯化钠洗涤，得轻相溶液；(3)结晶：向轻相溶液中加入水，控制温度，然后加入酸溶液调节pH值,再加入硫氰酸盐反应，加完后继续反应，然后使用酸溶液继续调节pH值至3.0-6.0、过滤、滤饼用热水洗涤，过滤，干燥，得到硫氰酸红霉素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中滤膜截留分子量为3万-100万，优选范围为3万-10万，优选滤膜为陶瓷滤膜；过滤时温度为5-20℃，优选为8-12℃。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中有机溶媒的用量为使有机相中红霉素浓度为25000-45000u/ml，优选28000～32000u/ml；优选有机溶媒为醋酸丁酯、丁醇、辛醇、煤油或乙酸乙酯，或它们中两种或两种以上组合；优选醋酸丁酯、辛醇或者煤油，或它们中两种或两种以上组合。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中碱为氢氧化钠、或氢氧化钾；优选为氢氧化钠溶液；所述氢氧化钠溶液浓度优选为15-25％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中进一步包括pH值为8.0-12，优选pH值为9.5-11.5；萃取时温度为20-40℃，优选为30-35℃。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)饱和氯化钠溶液的用量为5-50％(v/v)；优选为10-30％。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中进一步包括：结晶时，在轻相中加入为纯化水，用量为0.1～2BV，优选为0.8-1.2BV。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中进一步包括：温度为20～60℃，优选30-40℃。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中进一步包括：加入纯化水后，用酸溶液调节pH至6.5-7.5。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中硫氰酸钠溶液的浓度为10-40％，优选15-25％。11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述硫氰酸钠与红霉素A的摩尔比为1.0～2.0：1，优选为1.1-1.3：1。12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中加入时间为5min-2h，优选50-70min。13....

【专利技术属性】
技术研发人员：何同鹏，吴艳菲，王克玉，
申请(专利权)人：联邦制药内蒙古有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15