一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体、应用及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种抗VEGFR‑2单克隆抗体的检测性抗体、应用及检测方法，检测性抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8；轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12。本发明专利技术筛选得到了一种针对抗VEGFR‑2单克隆抗体的检测性抗体，该抗体可以快速、灵敏、准确的检测体液中抗VEGFR‑2单克隆抗体的药物浓度，为协助抗VEGFR‑2的单克隆抗体临床诊断和临床试验的药理、药代分析提供了可靠的研究方法。

【技术实现步骤摘要】
一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体、应用及检测方法
本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体、应用及检测方法。
技术介绍
肿瘤生长依赖新生血管的形成已经在肿瘤生物学上研究的比较透彻。新生血管生成是指从预先存在的毛细血管以出芽方式形成新的血管的过程。这一过程是由多种因子来激发和调控的，包括碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,BFGF)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、血小板衍生生长因子(platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)、血管生成素-1(angiopoietin-1)、肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)、转移生长因子-β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)等。其中，VEGF是目前发现的最为强大和专一的刺激内皮细胞增生的因子，此外，它还有增加血管通透性，趋化血管内皮细胞等功能。迄今为止,已发现的VEGF信号转导的主要受体包括fms样酪氨酸激酶VEGFR-1(Fms–liketyrosine即Flt-1)、胎儿肝激酶插入区受体VEGFR–2(Kinaseinsertdomain-containingreceptor即KDR/Flk-1)和VEGFR–3(Flt-4)，三者均具有酪氨酸活性。其中，VEGFR-2主要分布在血管内皮细胞，也分布在造血干细胞、巨噬细胞等，它的主要作用是介导VEGF的血管内皮细胞增生，趋化内皮细胞和增加血管通透性等功能，因此，其是VEGF的主要功能受体。深入理解VEGFR-2的结构与功能以及它在新生血管生成过程中的调控机制有利于理解相关病理生理现象，并对相关疾病的治疗起指导作用。人VEGFR-2又名激酶插入区受体(kinasedomainreceptor,KDR)，其编码基因位于4q12，编码了1356个氨基酸，是一分子量为230kD的跨膜糖蛋白。VEGFR-2是一酪氨酸激酶跨膜蛋白，分为胞外区、跨膜区和胞内激酶活性区，其胞外区有7个免疫球蛋白样的结构区域(Ig-likedomain)，这7个区分别有着不同的功能。VEGF和VEGFR-2受体作为关键的血管内皮细胞特异因子信号传导途径的分子参与肿瘤新生血管的生成，VEGF的主要生物学功能都是通过VEGFR-2实现，VEGFR-2和VEGF结合后发生二聚体化，并且VEGFR-2胞内的酪氨酸残基自身磷酸化，从而激活并将细胞膜/细胞质激酶级联反应信号传递到细胞核，可引发内皮细胞的一系列变化，包括血管内皮细胞增殖、存活、细胞骨架重排、细胞迁移以及基因表达等，并最终引起血管增生。目前，由于VEGF/VEGFR2信号通路在肿瘤的发生发展中的关键作用，越来越多的生物医药公司投入抗VEGFR-2单克隆抗体的研发，目前公开的专利有很多，例如美国专利申请号为US10/506997，专利名称为：HumanantibodiesspecifictoKDRandusesthereof；中国专利CN201210533178.3，专利名称为：人源抗人血管内皮细胞生长因子抗体及其应用；中国专利CN201710130518.0，专利名称为：一种改进的抗VEGFR-2单克隆抗体等，上述专利均是针对抗VEGFR-2单克隆抗体研发，并没有专门针对某种抗VEGFR-2单克隆抗体的药物浓度检测方案的研究，这对抗体在临床诊断和临床试验的药理、药代分析中存在不便，因此，本专利技术在现有专利CN201710130518.0提供的一种改进的抗VEGFR-2单克隆抗体(抗体的轻链可变区的氨基酸序列包含SEQNO:1、SEQNO:2或SEQNO:3中的任一种；重链可变区的氨基酸序列为SEQNO:4)的基础上，研制了一种专门用于检测该专利中抗VEGFR-2单克隆抗体的药物浓度的检测性抗体。
技术实现思路
为了更加灵敏、快速、可靠的检测抗VEGFR-2单克隆抗体的药物浓度，本专利技术在现有专利CN201710130518.0提供的一种改进的抗VEGFR-2单克隆抗体的基础上，提供了一种能够灵敏快速地检测该专利提供的抗VEGFR-2抗体的药物浓度的检测性抗体、应用和检测方法，为该专利提供的抗VEGFR-2单克隆抗体的临床试验药理、药代分析提供了可靠的研究方法，同时可用于临床试验中血清或其他体液中抗VEGFR-2单克隆抗体的浓度检测。本专利技术具体技术方案如下：本专利技术提供了一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体，所述检测性抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8；所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11或SEQIDNO:12。进一步的，所述检测性抗体选自以下任意一种：(A-1)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:5，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:9；(A-2)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:6，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:10；(A-3)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:7，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；(A-4)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:8，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:12。进一步的，所述检测性抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区的氨基酸序列选自人的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或鼠的IgG1、IgG2a、IgG2b；所述轻链恒定区的氨基酸序列为人或鼠的Cκ；优选的，所述重链恒定区的氨基酸序列为人的IgG4，所述轻链恒定区的氨基酸序列为人的Cκ。本专利技术还提供了一种多肽或蛋白，所述多肽或所述蛋白包含所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体。本专利技术进一步的提供了一种多核苷酸分子，所述多核苷酸分子编码所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体的氨基酸序列。本专利技术还提供了一种重组DNA表达载体，所述重组DNA表达载体包含所述的多核苷酸分子。本专利技术进一步的提供了一种转染所述的重组DNA表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或原核细胞；优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为HEK293E细胞、CHO细胞或NS0细胞。本专利技术还提供了一种检测试剂或试剂盒，所述检测试剂或所述试剂盒均包括所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体。进一步的，本专利技术还提供了一种所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体用于检测体液中抗VEGFR-2单克隆抗体药物浓度的应用。本专利技术还提供了一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：S1、用pH9.6的碳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体，其特征在于，所述检测性抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:8；所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11或SEQ ID NO:12。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体，其特征在于，所述检测性抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8；所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11或SEQIDNO:12。


2.如权利要求1所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体，其特征在于，所述检测性抗体选自以下任意一种：
(A-1)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:5，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:9；
(A-2)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:6，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:10；
(A-3)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:7，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；
(A-4)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:8，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:12。


3.如权利要求2所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体，其特征在于，所述检测性抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区的氨基酸序列选自人的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或鼠的IgG1、IgG2a、IgG2b；所述轻链恒定区的氨基酸序列为人或鼠的Cκ；
优选的，所述重链恒定区的氨基酸序列为人的IgG4，所述轻链恒定区的氨基酸序列为人的Cκ。


4.一种多肽或蛋白，其特征在于，所述多肽或所述蛋白包含权利要求1-3任一项所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体。


5.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子编码权利要求1-3任一项所述的抗VEGFR-2单克隆抗体的检测性抗体的氨基酸序列。


6.一种重组DNA表达载体，其特征在于，所述重组DNA表达载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：白义，吴桐，李晓敏，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，北京精益泰翔技术发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11