靶向于白介素36R的抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了靶向于白介素36R的抗体及其制备方法和应用。具体地，本发明专利技术提供了高亲和力高生物活性的IL‑36R抗体，所述抗体能够与IL‑36R高亲和力结合，并且能够阻断IL‑36R配体（α、β、γ）与IL‑36R结合，阻断IL‑36R配体激活的信号通路，从而治疗和/或预防IL‑36相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
靶向于白介素36R的抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及医药领域，更具体地涉及靶向于白介素36R的抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
IL-1受体家族成员(IL1R)包含至少11个成员，其中包括IL1RI(IL1R1)、IL1RII(IL1R2)、IL1RAcP(IL1R3)、ST2(T1/IL1R4)、IL18Ra(IL1Rrp/IL1R5)、IL1Rrp2(IL1RL2/IL1R6/IL-36R)、IL18Rb(AcPL/IL1R7)、IL1RAPL1(TIGIRR2/IL1R8)、和TIGIRR1(IL1R9)。IL-36R可识别3个不同的激活配体细胞因子，IL36α，IL36β，IL36γ（也被称为IL-1F6、IL-1F8、IL-1F9），引发炎症细胞因子的表达。并有2个天然拮抗剂IL-36Ra（IL-1F5）和IL-38,他们与IL-36R结合后会抑制炎症细胞因子的表达。IL-36R在肺上皮细胞、脑血管细胞、肾、睾丸、单核细胞、皮肤衍生的角质细胞、成纤维细胞和内皮细胞上表达。IL-36R由细胞膜外配体结合结构域、跨膜螺旋和细胞内信号转导Toll/IL-1受体结构域（Toll/IL-1receptordomain，TIR结构域）组成。IL-36α、IL-36β、IL-36γ首先与IL-36R结合，使其与IL-1RAcP形成信号转导复合体，然后募集髓样分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88），激活由c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminalkinases，JNK）和细胞外调节蛋白激酶（extracellularregulatedproteinkinases，ERK1/2）介导的丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinases，MAPK）和核因子KappaB（nuclearfactorkappaB，NF-κB）途径，产生大量炎症介质，进而介导炎症反应，在适应性免疫中发挥重要作用。IL-36Ra与IL-36R的结合不会导致IL-1RAcP的募集，促炎性级联反应未开启，实现了IL-36Ra的抗炎特性。在正常人体中，IL-36α、IL-36β、IL-36γ介导的信号激活作用和IL-36Ra介导的信号抑制作用为平衡状态，当IL-36Ra发生基因突变时，会导致其抑制功能失活，打破平衡状态，发生炎症疾病。IL-36细胞因子参与了某些严重的银屑病，包括泛发性脓疱性银屑病（GPP）和掌跖脓疱病（PPP）。GPP是一种严重的全身型类型脓疱型银屑病，具有致死性。PPP是慢性的影响手掌和脚掌的脓疱型银屑病。目前针对GPP和PPP的治疗方法包括口服类视黄醇和外用类固醇，但是治疗疗效差并有严重副作用。因此，本领域仍需要能够与IL-36R高亲和力结合，并且能够阻断IL-36α、IL-36β、IL-36γ与IL-36R结合的抗IL-36R抗体，用于治疗GPP、PPP等IL-36相关疾病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供靶向于白介素36R的抗体及其制备方法和应用。具体地，本专利技术的目的在于提供一种高亲和力高生物活性的IL-36R抗体及其应用，能够与IL-36R高亲和力结合，并且能够阻断IL-36α、IL-36β、IL-36γ与IL-36R结合。本专利技术的另一目的在于提供一种白介素36R结合分子及其用途，特别是在治疗和/或预防、或诊断IL-36相关疾病如银屑病中的用途。本专利技术的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO:3所示的CDR1，SEQIDNO:4所示的CDR2，和SEQIDNO:5所示的CDR3。在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能够保留IL-36R结合亲和力的衍生序列。在另一优选例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO:9所示的氨基酸序列。本专利技术的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有如本专利技术第一方面所述的重链可变区。在另一优选例中，所述的抗体的重链还包括重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的。本专利技术的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO:6所示的CDR1’，SEQIDNO:7所示的CDR2’，和SEQIDNO:8所示的CDR3’。在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能够保留IL-36R结合亲和力的衍生序列。在另一优选例中，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。在另一优选例中，所述轻链可变区具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述轻链可变区具有SEQIDNO:10、11或12所示的氨基酸序列。本专利技术的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有如本专利技术第三方面所述的轻链可变区。在另一优选例中，所述的抗体的轻链还包括轻链恒定区。在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的。本专利技术的第五方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：(1)如本专利技术第一方面所述的重链可变区；和/或(2)如本专利技术第三方面所述的轻链可变区；或者，所述抗体具有：如本专利技术第二方面所述的重链；和/或如本专利技术第四方面所述的轻链。在另一优选例中，所述抗体与人IL-36R蛋白(优选野生型)结合的亲和力常数KD（M）为(0.5-10)×10-11，较佳地为(1-6)×10-11，更佳地为(1-2)×10-11。在另一优选例中，所述抗体与对人IL-1Rrp2结合的亲和力常数KD（M）为(0.5-10)×10-11，较佳地为(1-6)×10-11，更佳地为(1-2)×10-11。在另一优选例中，所述抗体能够阻断IL-36α，IL-36β，IL-36γ与IL-36R的结合。在另一优选例中，所述抗体能够阻断IL-36α，IL-36β，IL-36γ介导的细胞因子分泌，较佳地，所述细胞因子包括：IL-6,IL-8,GM-CSF。在另一优选例中，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或其组合。在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。在另一优选例中，所述的抗体是部分或全人源化的单克隆抗体。在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQIDNO：1或9所示；和/或所述的抗体的轻链可变区序列如SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于，所述抗体具有：/n(1) 重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：/nSEQ ID NO:3所示的CDR1，/nSEQ ID NO:4所示的CDR2，和/nSEQ ID NO:5所示的CDR3；和/n(2) 轻链可变区，所述的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：/nSEQ ID NO:6所示的CDR1’，/nSEQ ID NO:7所示的CDR2’，和/nSEQ ID NO:8所示的CDR3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于，所述抗体具有：
(1)重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
SEQIDNO:3所示的CDR1，
SEQIDNO:4所示的CDR2，和
SEQIDNO:5所示的CDR3；和
(2)轻链可变区，所述的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
SEQIDNO:6所示的CDR1’，
SEQIDNO:7所示的CDR2’，和
SEQIDNO:8所示的CDR3’。


2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或其组合。


3.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区序列如SEQIDNO：1或9所示；和/或
所述抗体的轻链可变区序列如SEQIDNO：2、10、11或12所示。


4.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：
(i)如权利要求1所述的抗体；以及
(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。


5.一种CAR构建物，其特征在于，所述的CAR构建物的单克隆抗体抗原结合区域的scFv段为特异性结合于IL-36R的结合区，
并且，所述scFv的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
SEQIDNO:3所示的CDR1，
SEQIDNO:4所示的CDR2，和
SEQIDNO:5所示的CDR3；和
所述scFv的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：
SEQIDNO:6所示的CDR1’，
SEQIDNO:7所示的CDR2’，和
SEQIDNO:8所示的CDR3’。


6.一种重组的免疫细胞，其特征在于，所述的免疫细胞表达外源的如权利要求5所述的CAR构建物。


7.一种抗体药物偶联物，其特征在于，所述的抗体药物偶联物含有：
(a)抗体部分，所述抗体部分为如权利要求1所述的抗体；和
(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、或其组合。


8.一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如权利要求1所述的抗体、如权利要求4所述的重组蛋白、如权利要求5所述的CAR构...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯玉杰，于海佳，韦小越，彭国媛，陈时，瞿丽丽，
申请(专利权)人：上海华奥泰生物药业股份有限公司，华博生物医药技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31