特异性针对人类连接蛋白4的抗体制造技术

本发明专利技术提供了以高亲和性和特异性识别人类连接蛋白4(Nectin4)并抑制它与具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)的结合的单克隆抗体。本发明专利技术还提供了包含所述抗体的药物组合物和将它们用于癌症免疫疗法和诊断的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性针对人类连接蛋白4的抗体
本专利技术属于免疫治疗领域，并涉及结合到人类蛋白连接蛋白4(Nectin4)的抗体及其片段、编码这些抗体的多核苷酸序列和产生这些抗体的细胞。本专利技术还涉及包含这些抗体的治疗和诊断组合物，以及使用这些抗体治疗和诊断疾病、特别是癌症的方法。
技术介绍
免疫疗法是在过去十年中在癌症治疗中做出的最有希望的进展之一。通过例如用特异性针对肿瘤细胞上的抗原的抗体治疗、使用抗原呈递细胞与肿瘤细胞的融合体治疗或通过抗肿瘤T细胞的激活，癌症免疫疗法被用于产生并增强抗肿瘤免疫应答。在患者中召集针对肿瘤细胞的免疫细胞(例如T细胞)的能力，提供了一种对抗到目前为止被认为是不可治愈的癌症类型和转移瘤的治疗模式。T细胞介导的免疫应答包括多个连续步骤，它们受到控制免疫应答强度的共刺激和共抑制信号之间的平衡的调控。被称为免疫检查点的抑制信号对于维持自我耐受和限制免疫介导的附带组织损伤来说至关重要。当感染或免疫激发被清除、恶化或持续时，这些信号改变，并且这些改变影响并重塑免疫应答。免疫检查点蛋白的表达可以被肿瘤调控。例如，癌细胞表面上程序性死亡配体-1(PD-L1)上调，通过与PD-1结合以抑制原本可能攻击这些肿瘤细胞的T细胞，允许它们避开宿主免疫系统。因此，免疫检查点代表了激活针对癌症的功能性细胞免疫的重要屏障。因此，特异性针对免疫细胞上的抑制性配体的拮抗性抗体被认为是可行的抗癌药剂，并且它们正被用于癌症治疗(例如纳武单抗和派姆单抗)。免疫检查点分子的另一个实例是“具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体”(TIGIT)。TIGIT是在包括T细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)在内的各种不同免疫细胞上表达的一种共抑制分子。TIGIT以高亲和性结合到脊髓灰质炎病毒受体(PVR，CD155)。特异性针对TIGIT的单克隆抗体(mAb)被公开在例如WO2016/028656和WO2017/037707中。脊髓灰质炎病毒受体(PVR)是参与介导细胞粘附到细胞外基质分子的一种跨膜糖蛋白。PVR是一种已知的肿瘤抗原和用于治疗性干预的靶点。阻断肿瘤细胞上的PVR预期会降低肿瘤细胞的存活力。PVR在血管生成和肿瘤转移中也具有关键作用。包括美国专利申请号20070041985、美国专利申请号20090215175和WO2017149538在内的几项专利申请公开了特异性结合到PVR的分子和抗体及其对抗癌症的用途。连接蛋白细胞粘附分子4(连接蛋白4)，也被称为脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白4(PVRL4)，是一种I型跨膜蛋白，并且是由相关免疫球蛋白样粘附分子构成的连接蛋白家族的成员。连接蛋白4是包括肺癌、乳腺癌、结肠癌和卵巢癌在内的许多肿瘤的一种肿瘤相关标志物。Chailta-Eid等，2016(CancerRes.2016；76:3003–13)公开了抗连接蛋白4抗体(恩诺单抗(Enfortumab))-药物偶联物在多种临床前癌症模型中是高效治疗剂。与微管蛋白抑制剂瑞他汀偶联的所述抗体结合人类以及大鼠和猴的连接蛋白4，并抑制表达连接蛋白4的几种细胞系和异种移植物的生长。尽管在癌症免疫疗法中取得了成功，但对增强免疫系统的细胞以攻击肿瘤细胞的其他方法和更加有效且特异的药剂和药物组合，仍存在着未满足的需求。一种这样的方法涉及通过特异性单克隆抗体抑制连接蛋白4与TIGIT的结合。
技术实现思路
本专利技术提供了结合到人类蛋白连接蛋白4的抗体及其片段、编码这些抗体的多核苷酸序和产生这些抗体的细胞。本专利技术部分是基于下述发现，即以前作为麻疹病毒的受体和肿瘤抗原而为人所知的连接蛋白4是免疫抑制分子TIGIT的一种配体，并因此首次提出了将它作为抑制TIGIT对抗癌免疫力的抑制效应的靶点。在某些实施方式中，本专利技术还提供了包含连接蛋白4的结合位点的嵌合抗原受体(CAR)。本专利技术提供了特异性针对人类连接蛋白4的高度有效的单克隆抗体(mAb)，其不仅阻断连接蛋白4与抑制性受体TIGIT之间的相互作用，而且对表达这种受体的靶细胞具有直接作用。这些与连接蛋白4的结合常数在亚纳摩尔范围内的抗体，在未偶联到任何毒素或抗肿瘤剂的情况下逆转了免疫系统的TIGIT抑制，并直接增强肿瘤细胞的消除。因此，本专利技术的抗体可用于例如在癌症免疫疗法中抑制靶细胞上的连接蛋白4与免疫细胞上的TIGIT之间的相互作用。此外，本文中描述的一些完整抗体诱导ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)活性。连接蛋白4在肿瘤细胞上特异性过表达。本专利技术的抗体的ADCC活性诱导与它们对连接蛋白4的高亲和性和它们的ADCC活性一起，使它们成为用于免疫疗法的理想候选者。本专利技术提供了识别连接蛋白4、阻止它结合到TIGIT蛋白并抑制对淋巴细胞例如自然杀伤(NK)细胞和T-细胞的抑制活性的抗体及其片段。本文中公开的抗连接蛋白4抗体能够结合到靶细胞例如癌细胞上存在的连接蛋白4。本专利技术的抗体和片段的特征在于具有独特的成组互补决定区(CDR)序列，对人类连接蛋白4的高亲和性和高特异性，并且可以作为独立疗法和与其他抗癌药剂相组合用于癌症免疫疗法，以对抗肿瘤免疫逃避。所述抗体也可用于预防病毒感染，特别是预防麻疹感染。现在已公开，本文中公开的高亲和性抗连接蛋白4抗体阻断TIGIT-连接蛋白4相互作用并恢复T和NK细胞活性。某些本专利技术的单克隆抗体还能够阻断连接蛋白4与连接蛋白1之间的相互作用，表明了它们干扰表达连接蛋白4的肿瘤的侵入性的能力。此外，抗连接蛋白4mAb能够在大多数靶细胞中诱导NK细胞活化。有利的是，根据本专利技术所述的抗连接蛋白4mAb对靶癌细胞具有直接作用，在不需NK细胞和/或毒素的情况下诱导它们的杀死。还已公开，本专利技术的抗连接蛋白4抗体对共刺激受体例如DNAM1的信号传导没有阻断作用，因此预期它们对其他免疫诱导信号没有有害效应。有趣的是，尽管在人类与啮齿动物连接蛋白4序列之间具有高的序列相似性，但某些本专利技术的抗体对人类连接蛋白4高度特异，并且不结合啮齿动物连接蛋白4。某些本文中描述的抗连接蛋白4mAb能够通过阻断肿瘤细胞上的连接蛋白4，以不依赖于免疫的方式降低肿瘤细胞存活率。在某些实施方式中，本文中描述的连接蛋白4抗体在未结合到任何有毒分子的情况下，通过以不依赖于免疫的方式干扰与肿瘤细胞上的连接蛋白1的结合而抑制肿瘤细胞的增殖。根据一个方面，本专利技术提供了一种分离的单克隆抗体(mAb)或其抗体片段，其至少包含特异性结合到人类连接蛋白4并抑制它与TIGIT的结合的抗原结合部分。本专利技术还提供了一种能够抑制人类连接蛋白4与人类TIGIT的结合的mAb或其抗体片段，其与T-淋巴细胞和/或自然杀伤(NK)细胞一起用于癌症的治疗。根据某些实施方式，所述mAb未被偶联到任何毒素或抗肿瘤剂。根据某些实施方式，所述分离的抗体或抗体片段包含选自下述的6个互补决定区(CDR)序列的组：i.包含SEQIDNO：22的重链(HC)可变区的三个CDR和包含SEQIDNO：24的轻链(LC)可变区的三个CDR，或其与所述抗体或片段序列具有至少90％序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与连接蛋白4结合的分离的单克隆抗体或其至少包含抗原结合部分的抗体片段，其中所述分离的抗体或抗体片段能够抑制连接蛋白4与具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)的结合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180509 US 62/668,8241.一种与连接蛋白4结合的分离的单克隆抗体或其至少包含抗原结合部分的抗体片段，其中所述分离的抗体或抗体片段能够抑制连接蛋白4与具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)的结合。


2.根据权利要求1所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其中所述分离的抗体或抗体片段包含：
(i)包含SEQIDNO：39的重链(HC)可变区的三个互补决定区(CDR)和包含SEQIDNO：40的轻链(LC)可变区的三个CDR，或其与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的类似物或衍生物；
(ii)包含SEQIDNO：35的重链(HC)可变区的三个CDR和包含SEQIDNO：36的轻链(LC)可变区的三个CDR，或其与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的类似物或衍生物；或
(iii)包含SEQIDNO：37的重链可变区的三个CDR和包含SEQIDNO：38的轻链可变区的三个CDR，或其与所述抗体或片段序列具有至少90％序列同一性的类似物或衍生物。


3.根据权利要求1或2中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含选自下述的CDR组：
i.6个CDR的组，其中：HCCDR1是SYYIH(SEQIDNO：25)；HCCDR2是WIYPGNVNTKYNERFKG(SEQIDNO：26)；HCCDR3是SNPYVMDY(SEQIDNO：27)；LCCDR1是KASQSVNNDVA(SEQIDNO：28)；LCCDR2是YASNRFT(SEQIDNO：29)；并且LCCDR3是QQAYRSPYT(SEQIDNO：30)；
ii.6个CDR的组，其中：HCCDR1是AYNIH(SEQIDNO：9)，HCCDR2是YIYPNNGGSGYNQKFMN(SEQIDNO：10)，HCCDR3是FDYDEAWFIY(SEQIDNO：11)，LCCDR1是SASSSVSYMH(SEQIDNO：12)，LCCDR2是DTSKLAS(SEQIDNO：13)，并且LCCDR3是FQGSGSPYT(SEQIDNO：14)；和
iii.6个CDR的组，其中：HCCDR1是TYYIH(SEQIDNO：15)，HCCDR2是WIYPGNVNTKNNEKFKV(SEQIDNO：16)，HCCDR3是SNPYVMDY(SEQIDNO：17)，LCCDR1是KASQSVSNDVA(SEQIDNO：18)，LCCDR2是YASNRYT(SEQIDNO：19)，并且LCCDR3是QQDYSSPYT(SEQIDNO：20)。


4.根据权利要求1至3中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含选自SEQIDNO：39、SEQIDNO：35、SEQIDNO：37的重链可变区或与所述重链可变区序列具有至少95％序列相似性的类似物。


5.根据权利要求1至4中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含选自SEQIDNO：40、SEQIDNO：36、SEQIDNO：38的轻链可变区序列或与所述轻链可变区序列具有至少95％序列相似性的类似物。


6.根据权利要求1至5中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQIDNO：39，并且所述轻链包含SEQIDNO：40。


7.根据权利要求1至5中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQIDNO：35，并且所述轻链包含SEQIDNO：36。


8.根据权利要求1至5中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQIDNO：37，并且所述轻链包含SEQIDNO：38。


9.根据权利要求1至9中的任一项所述的分离的单克隆片段，其中所述片段是单链Fv(scFv)。


10.根据权利要求9所述的分离的单克隆片段，其包含选自SEQIDNO：32和SEQIDNO：34的序列或其与所述序列具有至少90％序列相似性的变体。


11.根据权利要求6、7或8中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段的变体，其与所述抗体链具有至少95％的同一性。


12.根据权利要求1至9中的任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其中所述单克隆抗体以10-9M至10-10M的亲和性与人连接蛋白4结合。


13.一种多核苷酸序列，其编码根据权利要求1至11中的任一项所述的单克隆抗体或抗体片段的HC或LC序列的至少一个区域。


14.根据权利要求13所述的多核苷酸序列，其编码单克隆抗体重链可变区，其中所述多核苷酸序列包含选自SEQIDNO：45、SEQIDNO：41、SEQIDNO：43的序列及其与所述序列具有至少90％同一性的变体。


15.根据权利要求13所述的多核苷酸序列，其编码单克隆抗体轻链可变区，其中所述多核苷酸序列选自SEQIDNO：46、SEQIDNO：42、SEQIDNO：44及其与所述序列具有至少90％同一性的变体。


16.一种质粒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥夫尔·曼德尔波姆，阿迪·雷切斯，斯提潘·约尼奇，平沙斯·楚克尔曼，
申请(专利权)人：耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司，耐科廷疗法有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL