抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用。本发明专利技术从噬菌体抗体库筛选得到了具有良好特异性、高亲和性和敏感性的抗人Tim3抗体，本发明专利技术所得到的抗人Tim3抗体能够特异性地识别结合可溶性Tim3和细胞膜表面Tim3蛋白。

【技术实现步骤摘要】
抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用
本专利技术涉及生物医学和抗体工程
，尤其是涉及一种抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用。
技术介绍
免疫治疗为肿瘤治疗提供了新途径，以PD1/PDL1和CTLA4免疫检查点抑制剂为代表的抗体药物，已经使部分肿瘤患者受益，但多数患者表现为药物初始无反应或部分应答患者仍然出现肿瘤进展，这可能与存在其他免疫抑制分子的作用及免疫系统的不完全激活相关。筛选并联合新的免疫治疗靶标，优化治疗策略，是当前肿瘤治疗的一大发展趋势。T细胞免疫球蛋白粘蛋白3(T-cellimmunoglobulinandmucindomain-3，Tim3；也称为HAVCR2)是继PD1/PDL1和CTLA4之后最热门的免疫抑制分子之一。Tim3是一种I型跨膜糖蛋白，最初在产生IFN-γ的Th1和细胞毒性CD8+T(Tc1)细胞表面发现。随后发现Tim3可表达于多种肿瘤细胞和其他免疫细胞，如Th17细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocytes，TILs)、调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)和天然免疫细胞。Tim3与其配体结合负性调控免疫应答。目前已报道的Tim3配体有4个，包括半乳凝素-9(Galectin-9,Gal9)、癌胚抗原相关细胞粘附分子1(carcino-embryonicantigenrelatedcellularadhesionmolecule1，CEACAM1)、高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupproteinB1，HMGB1)和磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PtdSer)。Tim3与其配体结合介导免疫抑制。具体而言，Tim3与PtdSer结合介导凋亡细胞的清除；Tim3与HMGB1结合抑制肿瘤微环境中树突状细胞介导的天然免疫应答；Tim3与CEACAM1结合与Tim3介导的免疫耐受和T细胞耗竭相关；Tim3与Gal9结合调控肿瘤微环境中T细胞的凋亡，介导T细胞免疫抑制。Tim3介导自身免疫和同种异体免疫的免疫耐受，Tim3表达失调与自身免疫性疾病相关，T细胞上Tim3的表达水平与自身免疫性疾病进展呈负相关。然而，在慢性病毒感染(如人类免疫缺陷病毒HIV、丙型肝炎病毒HCV)和肿瘤发展过程中，Tim3的高水平表达与T细胞抑制和功能耗竭相关。在多种类型的肿瘤中可检测到Tim3表达升高，如非小细胞肺癌、肝细胞癌、宫颈癌、结直肠癌、卵巢癌、头颈部癌、肾细胞癌、胃癌、食道癌、前列腺癌、膀胱尿路上皮癌和非霍奇金淋巴瘤等。已报道Tim3表达升高常与患者较短的生存期有关。Tim3是实体瘤潜在的预后标志物。Tim3可以从细胞表面切割下来成为可溶性Tim3(sTim3)。sTim3水平一定程度上反映了细胞膜表面Tim3表达水平。肿瘤微环境中，抗肿瘤免疫的主要效应细胞CD8+T细胞一旦表达或共表达Tim3、PD1和CTLA4等免疫抑制分子，则标志着CD8+T细胞功能耗竭。肿瘤浸润性淋巴细胞中Tim3的表达水平与PD1/PDL1水平正相关，Tim3表达上调可能是诱导PD1抗体治疗耐药的重要机制。Tim3是肿瘤免疫治疗的有效靶点，抗Tim3单抗可与CTLA-4、PD-1和PD-L1抗体等起到协同作用，并且能够治疗PD-1和PD-L1耐药的患者。Tim3抗体的抗肿瘤治疗目前处于临床试验阶段。Tim3抗体在肿瘤治疗中具有较好的临床应用前景。现有的Tim3单抗大多是通过鼠杂交瘤技术制备。抗体工程技术的进步促进了抗体的制备，并提高了其检测性能。噬菌体抗体库技术可以用于筛选任何抗原特异性的抗体。利用免疫的小鼠噬菌体抗体库筛选人Tim3高性能单克隆抗体，与鼠杂交瘤抗体筛选技术相比，更有机会获得高亲和力抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗人Tim3抗体或其功能性片段及其应用。本专利技术提供的抗体具有高敏感性、高特异性、高亲和力和结合不同抗原表位的特点，可以用于检测可溶性Tim3蛋白及细胞膜表面Tim3蛋白，有助于提高检测结果的准确性。为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供以下技术方案：一种抗人Tim3抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含如下CDR区：重链的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示，或者分别如SEQIDNO.4-5以及SEQIDNO.3所示，或者分别如SEQIDNO.6-8所示；轻链的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.14-16所示；或者分别如SEQIDNO.17-19所示；或者分别如SEQIDNO.20-22所示；或者分别如SEQIDNO.23-25所示。在一些实施方式中，所述抗体或其功能性片段的重链可变区序列和轻链可变区序列的氨基酸序列分别如SEQIDNO.9和SEQIDNO.26所示，或者分别如SEQIDNO.10和SEQIDNO.27所示，或者分别如SEQIDNO.11和SEQIDNO.28所示，或者分别如SEQIDNO.12和SEQIDNO.29所示。在一些实施方式中，所述抗体或其功能性片段还包含抗体恒定区Fc；优选地，所述恒定区Fc包括重链恒定区和轻链恒定区；优选地，所述重链恒定区选自：IgD、IgE、IgM、IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgG4中任意一种；优选地，所述轻链恒定区为κ型或λ型轻链恒定区；更优选地，所述重链恒定区选自IgG1，氨基酸序列如SEQIDNO.13所示；更优选地，所述轻链恒定区为κ型，氨基酸序列如SEQIDNO.30所示。在一些实施方式中，所述功能性片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv中的一种或多种。在一些实施方式中，所述抗体为小鼠单克隆抗体。一种核酸分子，所述核酸分子编码所述抗体或其功能性片段。一种载体，所述载体包含所述核酸分子。一种宿主细胞，所述宿主细胞包括所述核酸分子或所述载体。优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为HEK293E(humanembryonickidney293Ecell)细胞、CHO(Chinesehamsterovarycell)细胞或NSO胸腺瘤细胞。一种抗体偶联物，其包括所述抗体或其功能性片段。所述抗体或其功能性片段在制备检测Tim3蛋白的试剂或试剂盒中的应用。一种试剂盒，所述试剂盒包括所述抗体或其功能性片段、所述核酸分子、所述载体和所述抗体偶联物中的一种或多种。有益效果：本专利技术提供的抗Tim3抗体具有较强的亲和力和较高的特异性，能够识别并结合Tim3不同抗原表位，可以用于检测可溶性Tim3蛋白及细胞膜表面Tim3蛋白，有助于提高检测结果的准确性，本专利技术提供的抗体开发前景广阔。本专利技术研制出一种全新的Tim3抗体，为鼠抗人Tim3的单克隆抗体，对可溶性Tim3蛋白和细胞膜表面Tim3蛋白检测具有高敏感性、高特异性、高亲和力和具有可结合Tim3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗人Tim3抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含如下CDR区：/n重链的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示，或者分别如SEQ IDNO.4-5以及SEQ ID NO.3所示，或者分别如SEQ ID NO.6-8所示；/n轻链的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14-16所示；或者分别如SEQID NO.17-19所示；或者分别如SEQ ID NO.20-22所示；或者分别如SEQ ID NO.23-25所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗人Tim3抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含如下CDR区：
重链的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示，或者分别如SEQIDNO.4-5以及SEQIDNO.3所示，或者分别如SEQIDNO.6-8所示；
轻链的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.14-16所示；或者分别如SEQIDNO.17-19所示；或者分别如SEQIDNO.20-22所示；或者分别如SEQIDNO.23-25所示。


2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段的重链可变区序列和轻链可变区序列的氨基酸序列分别如SEQIDNO.9和SEQIDNO.26所示，或者分别如SEQIDNO.10和SEQIDNO.27所示，或者分别如SEQIDNO.11和SEQIDNO.28所示，或者分别如SEQIDNO.12和SEQIDNO.29所示。


3.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包含抗体恒定区Fc；优选地，所述恒定区Fc包括重链恒定区和轻链恒定区；
优选地，所述重链恒定区选自：IgD、IgE、IgM、IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgG4中任意一种；
优选地，所述轻链恒定区为κ型或λ型轻链恒定区；
更优选地，所述重链恒定区选自IgG1...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫卓红，张洪涛，王小珏，易玲，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11